郭建强
- 作品数：28 被引量：67H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项中国医药卫生事业发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- H1N1亚型流感病毒M1和NA基因在昆虫杆状病毒系统中的共表达
- 2015年
- 目的 构建共表达H1N1亚型流感病毒M1和NA基因的重组杆状病毒.方法 以PCR扩增H1N1亚型流感病毒A/PR/8/34毒株M1和NA基因,构建含有M1、NA双基因的重组转移载体pFBD-M1-NA,将其转化DH10Bac,获得重组Bacmid-M1-NA穿梭载体.将Bacmid-M1-NA转染sf9昆虫细胞,在细胞内包装出重组杆状病毒rBac-M1-NA,空斑实验测定病毒滴度,PCR方法鉴定外源基因插入情况.间接免疫荧光（IFA）检测M1、NA基因的表达情况.结果 获得的重组杆状病毒滴度为1×10^7pfu/ml;PCR检测结果证实M1、NA基因成功整合到了重组杆状病毒基因组.IFA结果显示,rBac-M1-NA感染的sf9昆虫细胞成功表达了M1、NA基因.结论 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功构建了共表达H1N1亚型流感病毒M1和NA基因的重组杆状病毒,为研究流感病毒样颗粒（VLPs）的形成机制以及新型流感疫苗研发奠定了基础.
- 陈爱珺姚立红徐鹏卫张智清郭建强
- 关键词：蛋白质类神经氨酸酶杆状病毒
- 共表达流感病毒基质蛋白1和基质蛋白2基因的重组杆状病毒的构建
- 2015年
- 目的构建共表达流感病毒基质蛋白1(matrix protein 1,M1)和基质蛋白2(M2)基因的重组杆状病毒。方法扩增流感病毒A/PR/8/34株的M1和M2全长基因,并将其分别插入到p Fast Bacdual(p FBD)载体的两个多克隆位点,筛选出阳性重组转座载体p FBD-M1/M2,将其转化含有穿梭载体Bacimd的感受态DH10Bac细胞,经同源重组获得重组穿梭载体r Bacmid-M1/M2,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,包装出重组杆状病毒r Bac-M1/M2。采用噬斑形成法检测重组病毒滴度,PCR法检测重组病毒基因组M1和M2基因插入情况,间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western blot法检测M1和M2基因的表达。结果经PCR鉴定重组穿梭载体r Bacmid-M1/M2构建正确;第3代r Bac-M1/M2滴度为1×108 pfu/ml;感染r Bac-M1/M2的sf9昆虫细胞经PCR扩增,可见3 600 bp的条带;可在感染细胞的胞内和胞膜上检测到明显的特异性黄绿色荧光;感染r Bac-M1/M2的细胞裂解上清与鼠抗流感病毒(PR8株)多克隆抗体发生特异性反应,在相对分子质量约26 000及11 000处可见特异性反应条带。结论成功构建了共表达H1N1亚型流感病毒M1和M2基因的重组杆状病毒,为构建流感病毒样颗粒以及研制新型广谱流感疫苗奠定了基础。
- 姚立红陈爱珺徐鹏卫张智清郭建强
- 关键词：流感病毒杆状病毒
- 昆虫杆状病毒系统表达登革2型病毒prM/E蛋白被引量：2
- 2014年
- 目的:构建表达登革2型病毒prM/E蛋白的真核细胞系。方法:应用聚合酶链反应(PCR)方法从含有登革2型病毒prM/E基因的质粒中扩增得到prM/E基因。将该片段亚克隆到pGEM-T Easy载体上,用XhoⅠ和NheⅠ双酶切将其与同样双酶切的pFastBac Dual质粒连接,构建转移载体pFBD-prM/E。将转移载体转化的同时,含有杆状病毒穿梭载体Bacmid和Helper质粒的感受态DH10 Bac得到重组Bacmid;用后者转染Sf 9细胞获得重组杆状病毒。双酶切鉴定构建的重组杆状病毒转移载体pFBD-prM/E,间接免疫荧光法检测目的蛋白的表达。结果:通过间接免疫荧光法可观察到特异性绿色荧光,即检测到prM/E蛋白的表达。结论:利用昆虫杆状病毒系统成功表达了登革2型病毒prM/E蛋白,为登革病毒prM和E蛋白的功能研究、登革病毒感染的诊断以及登革病毒样颗粒疫苗的研制奠定了基础。
- 刘晓宇姚立红陈爱珺郭建强张智清陈辉
- 关键词：登革2型病毒E蛋白杆状病毒表达系统
- 病毒样颗粒技术的研究进展被引量：13
- 2009年
- 病毒样颗粒(Virus-like Particles,VLPs)为不含病毒基因组的空壳或包膜状颗粒结构,与天然病毒颗粒结构相似。VLPs技术在病毒的组装与形态多样性等基础研究中发挥了重要作用。VLPs作为疫苗,可有效诱导机体产生免疫反应。VLPs具有独特的免疫学特性,不但能通过影响抗原递呈细胞发挥佐剂效应,还可以作为其它佐剂、多肽疫苗和核酸疫苗的整合平台设计多种形式的疫苗。在适宜条件下,VLPs可以包裹核酸或其它小分子物质,因此可以作为分子运载工具靶向性地递送基因或药物。VLPs还可以替代天然病毒在免疫学检测中发挥重要作用。
- 郭建强张智清
- 关键词：病毒样颗粒疫苗免疫学检测
- H1N1亚型流感病毒NA基因在昆虫杆状病毒系统中的表达及鉴定
- 2013年
- 目的构建含有H1N1亚型流感病毒NA基因的重组杆状病毒。方法用PCR方法扩增甲型H1N1亚型流感病毒（A／PR8／34）全长神经氨酸酶基因，并将其连接于pFastBacdual载体，构建杆状病毒转移载体pFBD-NA。转化含有Bacmld的DHl0B感受态细胞后，获得重组穿梭载体rBacmid—NA。将其转染昆虫细胞sf9，获得重组病毒rBac—NA。提取重组杆状病毒rBac—NA的DNA并使用PCR方法检测；采用间接免疫荧光，SDS-PAGE，WesternBlot鉴定以及ELISA方法检测所表达的NA蛋白。结果经PCR鉴定所构建质粒rBacmid—NA正确；使用间接免疫荧光检测可见特异性绿色荧光位于感染细胞的表面，WesternBolt检测可与小鼠抗PR8株多克隆抗体和兔抗甲型流感病毒NA多克隆抗体发生特异性免疫反应；经ELISA检测，NA蛋白可被鼠抗流感病毒（PR8）多克隆抗体特异性识别。结论上述结果证明，我们获得了表达流感病毒NA蛋白的重组杆状病毒，为进一步研究NA蛋白的功能和新型流感疫苗的开发奠定了基础。
- 姚立红付金奇陈爱珺刘晓宇徐鹏卫郭建强张乐翠
- 关键词：正黏病毒科神经氨酸酶
- 共表达甲型流感病毒M1和HA双基因的重组腺病毒的构建及鉴定被引量：4
- 2009年
- 以我国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)作为研究对象,通过引入内部核糖体进入位点序列(IRES),构建共表达H5N1亚型禽流感病毒膜蛋白基因M1和HA的重组腺病毒。PCR扩增禽流感病毒H5N1亚型M1和HA基因的全长可读框片段,先后亚克隆入pStar载体,然后扩增M1-IRES-HA片段并将其插入穿梭载体pShuttle-CMV,再与pAd-Easy载体在BJ5183菌中通过同源重组产生重组腺病毒载体,转化293细胞,包装出重组腺病毒Ad-M1/HA。将Ad-M1/HA感染293细胞,可观察到明显细胞病变效应,用免疫荧光及Western-blot方法均检测到M1和HA基因的表达。共表达M1和HA双基因的重组腺病毒的成功构建为开发新型重组腺病毒流感疫苗奠定了基础。
- 郭建强姚立红陈爱珺徐一贾润清薄洪董婕周剑芳舒跃龙张智清
- 关键词：血凝素腺病毒载体
- 融合蛋白及其编码基因与应用
- 本发明是关于一种融合蛋白及其编码基因与应用。本发明的融合蛋白是铜绿假单胞菌外毒素A的非必需区或羧基末端与1-3个拷贝的甲型流感病毒M2蛋白胞外区融合获得的融合蛋白；所述铜绿假单胞菌外毒素A的氨基酸序列为序列表中的序列15...
- 张智清徐一刘晓宇郭建强姚立红陈爱君
- 中塞友好生物安全实验室埃博拉病毒核酸检测质量控制体系的建立被引量：5
- 2016年
- 详细地阐述了中塞友好生物安全实验室实施埃博拉病毒核酸检测整个质量控制的过程,全面地展示固定P3实验室第一批检测队在埃博拉病毒病实验室检测中表现出的科学、严谨、准确与高效,为实验室检测工作提供参考和依据。首先描述了质控体系要点,包括了组织和人员管理、质量管理文件体系、仪器设备、检测试剂和耗材、审核、实验室空间和功能、实验室维护与安全保障等各个方面的质控要点。其次,从埃博拉病毒核酸检测前、检测中到检测后过程,分述了质控在埃博拉病毒检测整个流程的各个环节中的应用。技术精良的专业检测队伍和实行人性化管理是援非抗埃成功的基石;做好生物安全防护是有效质控和完成检测任务的前提;配备专业的后勤保障确实非常必要;中塞友好生物安全实验室的建立对于中塞友谊具有划时代的意义,该实验室将成为塞拉利昂今后最为重要的埃博拉病毒实验室检测基地。
- 王芹张勇聂凯聂凯王环宇杜海军宋敬东肖康雷雯雯郭建强隗合江蔡琨王衍海吴江Idrissa Laybohr Kamara梁米芳梁米芳武桂珍
- 关键词：埃博拉病毒核酸检测生物安全
- 甲型H_5N_1流行性感冒病毒基质蛋白2与基质蛋白1双基因载体疫苗的构建及其免疫学评价
- 2011年
- 目的构建表达甲型H5N1流行性感冒(流感)病毒基质蛋白(Matrix Protein,M)2(M2)与1(M1)基因的脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid,DNA)疫苗与腺病毒(Adenovirus,Ad)载体疫苗,将其联合免疫小鼠,对免疫效果进行评价。方法以中国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)[A(甲型)/Anhui(安徽)/1/2005]作为研究对象,聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增全长M2和M1基因,构建共表达H5N1亚型AIVM2和M1基因的重组pStar-M2/M1。利用Ad-Easy载体系统,在293细胞中包装出表达M2基因的重组Ad-M2和表达M1基因的重组Ad-M1。按初次免疫-加强免疫程序,分别用重组pStar-M2/M1和重组Ad-M2+Ad-M1免疫BALB/c小鼠,共免疫4次,每次间隔14d。第1、3次用DNA疫苗,第2、4次用重组Ad疫苗,每次免疫前及末次免疫后13d采集血清,用于检测体液免疫应答。末次免疫后14d,以H1N1亚型流感病毒A/PuertoRico(PR,波多黎各)/8/34/株进行攻击。病毒攻击后14d内,逐日观察小鼠的存活及体重变化情况。结果用间接免疫荧光(Indirect Immunofluorescence Assay,IFA)方法检测到了重组pStar-M2/M1、Ad-M2、Ad-M1载体上相应插入基因的表达,将其联合免疫小鼠后,酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测到小鼠血清中的抗H5N1亚型流感病毒M2、M1的IgG抗体。病毒攻击实验结果表明,免疫后小鼠对流感病毒A/PR/8/34(H1N1)株的攻击有一定的交叉保护作用。结论成功构建了表达甲型H5N1流感病毒M2与M1基因的DNA疫苗与重组Ad疫苗,联合免疫小鼠后刺激产生了特异性的体液免疫应答,并对异源毒株具有一定的交叉保护作用。
- 郭建强姚立红陈爱珺刘晓宇付金奇张智清
- 关键词：联合免疫
- H5N1亚型流感病毒M2与NA基因真核表达载体的构建与鉴定
- 2011年
- 目的 构建表达H5N1亚型流感病毒M2和NA基因的多种真核表达载体.方法 以我国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒（A/Anhui/1/2005）作为研究对象,PCR扩增全长M2与NA基因.将M2基因克隆入真核表达载体pStar的IRES上游或下游的MCS,构建重组pStar-M2/和pStar-/M2.将NA基因克隆人pStar载体IRES上游或下游的MCS,构建重组pStar-NA/和pStar-/NA.将M2和NA基因先后克隆到pStar载体IRES序列的上游和下游MCS,分别构建双基因共表达重组pStar-M2/NA和pStar-NA/M2.将重组质粒转染293细胞,使用IFA方法 检测各重组质粒相应外源基因的表达.结果 通过酶切鉴定,各重组质粒构建正确.将其转染293细胞后,使用IFA方法 检测到了各重组质粒中相应外源基因的表达.结论 构建了多种表达H5NI亚型流感病毒M2和（或）NA基因的真核表达载体,为研究开发流感DNA疫苗奠定了基础.
- 郭建强姚立红陈爱珺刘晓宇付金奇徐鹏卫张智清
- 关键词：流感病毒A型病毒蛋白质类神经氨酸酶
