陈爱珺
- 作品数：37 被引量：88H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 昆虫杆状病毒系统表达登革2型病毒prM/E蛋白被引量：2
- 2014年
- 目的:构建表达登革2型病毒prM/E蛋白的真核细胞系。方法:应用聚合酶链反应(PCR)方法从含有登革2型病毒prM/E基因的质粒中扩增得到prM/E基因。将该片段亚克隆到pGEM-T Easy载体上,用XhoⅠ和NheⅠ双酶切将其与同样双酶切的pFastBac Dual质粒连接,构建转移载体pFBD-prM/E。将转移载体转化的同时,含有杆状病毒穿梭载体Bacmid和Helper质粒的感受态DH10 Bac得到重组Bacmid;用后者转染Sf 9细胞获得重组杆状病毒。双酶切鉴定构建的重组杆状病毒转移载体pFBD-prM/E,间接免疫荧光法检测目的蛋白的表达。结果:通过间接免疫荧光法可观察到特异性绿色荧光,即检测到prM/E蛋白的表达。结论:利用昆虫杆状病毒系统成功表达了登革2型病毒prM/E蛋白,为登革病毒prM和E蛋白的功能研究、登革病毒感染的诊断以及登革病毒样颗粒疫苗的研制奠定了基础。
- 刘晓宇姚立红陈爱珺郭建强张智清陈辉
- 关键词：登革2型病毒E蛋白杆状病毒表达系统
- H1N1亚型流感病毒NA基因在昆虫杆状病毒系统中的表达及鉴定
- 2013年
- 目的构建含有H1N1亚型流感病毒NA基因的重组杆状病毒。方法用PCR方法扩增甲型H1N1亚型流感病毒（A／PR8／34）全长神经氨酸酶基因，并将其连接于pFastBacdual载体，构建杆状病毒转移载体pFBD-NA。转化含有Bacmld的DHl0B感受态细胞后，获得重组穿梭载体rBacmid—NA。将其转染昆虫细胞sf9，获得重组病毒rBac—NA。提取重组杆状病毒rBac—NA的DNA并使用PCR方法检测；采用间接免疫荧光，SDS-PAGE，WesternBlot鉴定以及ELISA方法检测所表达的NA蛋白。结果经PCR鉴定所构建质粒rBacmid—NA正确；使用间接免疫荧光检测可见特异性绿色荧光位于感染细胞的表面，WesternBolt检测可与小鼠抗PR8株多克隆抗体和兔抗甲型流感病毒NA多克隆抗体发生特异性免疫反应；经ELISA检测，NA蛋白可被鼠抗流感病毒（PR8）多克隆抗体特异性识别。结论上述结果证明，我们获得了表达流感病毒NA蛋白的重组杆状病毒，为进一步研究NA蛋白的功能和新型流感疫苗的开发奠定了基础。
- 姚立红付金奇陈爱珺刘晓宇徐鹏卫郭建强张乐翠
- 关键词：正黏病毒科神经氨酸酶
- 应用酵母双杂交系统筛选与CIKS(151-574)相互作用的蛋白质
- 2003年
- CIKS(ConnectiontoIKKandSAPK JNK)是最近发现的细胞蛋白 ,能激活IKK和SAPK JNK。应用酵母双杂交系统 ,将CIKS(15 1 5 74)插入载体pAS2 1作为诱铒 ,筛选人HeLa细胞MATCHMAKERcDNA文库 ,以期为阐明NFκB及JNK活性调控的分子机理提供新的线索。筛选得到 6个阳性AD 文库质粒 ,并用酵母双杂交实验验证了阳性AD 文库质粒与CIKS的相互作用。将阳性AD 文库质粒测序并对测序结果做BLAST分析 ,发现它们分别是RIKENcDNA 473340F0 3,PLAC8,CD2 7BP (Siva 1) ,CDC5L ,SnRNPsmB ,DVL2。CIKS能与这些功能各异的蛋白质相互作用 ,表明CIKS在细胞的多种生理活动中发挥作用。
- 黄国锦张智清姚立红陈爱珺徐春晓朱宏建柴映爽严馨蕊金冬雁
- 关键词：CDNA文库蛋白质相互作用酵母双杂交系统细胞蛋白
- 重组人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(sTNFRⅡ)的纯化被引量：1
- 2002年
- 目的 从大肠杆菌破碎液中纯化可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ,获得能够中和TNF活性的受体蛋白。方法 菌体破碎液经热沉淀处理后,用金属鳌合层析柱纯化重组蛋白。并对蛋白的理化特性和生物学活性进行分析。结果 纯化的重组蛋白纯度大于95％,并且能中和TNF的生物学活性,抑制其对细胞的杀伤作用。结论该工艺能简便有效地纯化出TNF受体蛋白,为进一步深入研究奠定了基础。
- 徐春晓姚立红祖东黄国锦严馨蕊柴映爽陈爱珺张智清
- 关键词：重组人肿瘤坏死因子纯化大肠杆菌生物学活性
- 共表达甲型流感病毒M1和HA双基因的重组腺病毒的构建及鉴定被引量：4
- 2009年
- 以我国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)作为研究对象,通过引入内部核糖体进入位点序列(IRES),构建共表达H5N1亚型禽流感病毒膜蛋白基因M1和HA的重组腺病毒。PCR扩增禽流感病毒H5N1亚型M1和HA基因的全长可读框片段,先后亚克隆入pStar载体,然后扩增M1-IRES-HA片段并将其插入穿梭载体pShuttle-CMV,再与pAd-Easy载体在BJ5183菌中通过同源重组产生重组腺病毒载体,转化293细胞,包装出重组腺病毒Ad-M1/HA。将Ad-M1/HA感染293细胞,可观察到明显细胞病变效应,用免疫荧光及Western-blot方法均检测到M1和HA基因的表达。共表达M1和HA双基因的重组腺病毒的成功构建为开发新型重组腺病毒流感疫苗奠定了基础。
- 郭建强姚立红陈爱珺徐一贾润清薄洪董婕周剑芳舒跃龙张智清
- 关键词：血凝素腺病毒载体
- 心里美萝卜dsRNA的克隆和cDNA杂交法检测不同变种萝卜dsRNA的亲缘性被引量：3
- 1992年
- 我们曾报道,十字花科萝卜的各种栽培变种都含有抗病毒、抗癌作用的干扰素诱生剂,其有效成分为dsRNA。本实验构建了含有心里美萝卜dsRNA的cDNA重组质粒。以其cDNA为探针进行杂交试验,探讨各种变种萝卜dsRNA之间的亲缘关系。 萝卜dsRNA的分离和纯化参照文献,先从萝卜提取总核酸,然后经CF11纤维素柱层析和低融点琼脂糖制备电泳,获得较纯的dsRNA。
- 王燕平陈爱珺张竞付士红许兆祥
- 关键词：DSRNA萝卜CDNA克隆
- 呼吸道感染住院患儿Merkel细胞多瘤病毒检测及临床研究
- 2017年
- 目的:了解北京地区Merkel细胞多瘤病毒(MCPyV)在呼吸道感染住院儿童中的流行情况和临床特点。方法:采集北京友谊医院儿科呼吸道感染住院患儿的鼻咽抽吸物样本200份,并收集相应的患儿临床资料,采用TaqMan real-time PCR方法检测MCPyV LTAg基因,并经测序确认;MCPyV阳性样本同时检测常见的人呼吸道病毒混合感染情况。结果:200份标本中共检出MCPyV阳性6例,检出率3%;感染儿童年龄从6月到5岁,其中年龄≤3岁的占83.3%(5/6)。诊断包括支气管肺炎和急性支气管炎,临床表现包括发热、咳嗽、喘息。6例阳性样本均与其他呼吸道病毒混合感染,A型流感病毒和呼吸道合胞病毒混合感染最常见,6例阳性样本MCPyV载量均低于10拷贝/μL。结论:real-time PCR方法检测呼吸道感染住院患儿中MCPyV的感染率为3%,6例MCPyV阳性样本均与其他呼吸道病毒混合感染且MCPyV载量较低,不能认为MCPyV是儿童呼吸道感染的病因。
- 魏田力郑文芝麻粉莲姚立红陈爱珺崔红郑丽舒
- 关键词：呼吸道感染
- 鼠诺如病毒MNV—CW1感染C57BL／6小鼠的特点被引量：1
- 2016年
- 目的 探讨鼠诺如病毒（Murinenoroviurs，MNV）感染C57BL／6小鼠后临床及生物学特征，了解MNV的感染特点。方法将MNV—CWI毒株以高剂量（10^4PFU／只）和低剂量（102PFU／只）分别灌胃到C57BL／6小鼠体内，建立MNV感染小鼠模型。对感染小鼠进行体征观察和体温检测，检测粪便和血液排毒情况、组织中病毒的分布情况以及十二指肠病理切片检查。结果感染的小鼠没有明显的体表变化，没有腹泻、发热等临床症状和病理改变。粪便检测感染后1～2d排毒。在感染后第3天部分血液中检测到MNVRNA。主要感染部位为消化系统和脾脏。结论本研究建立的MNV—CW1感染C57BL／6小鼠模型为MNV感染小鼠致病机制进一步研究提供实验信息和技术支撑。
- 庞立丽靳淼王慧敏王莹陈爱珺李慧颖章青高福段招军
- 关键词：小鼠
- 嵌合蛋白sTNFRⅡ-IgG Fc纯化与生物学活性研究被引量：2
- 2004年
- 目的 建立嵌合蛋白sTNFR IgGFc的纯化工艺 ,并对该蛋白的理化和生物活性进行研究。方法 嵌合蛋白sTNFRⅡ IgGFc经变性、复性后 ,用金属螯合层析进行纯化 ,纯化的蛋白进行配基结合实验和拮抗TNF活性检测。结果 该嵌合蛋白的纯度大于 95 % ,在体外能够二聚化 ,保留了sTNFRⅡ对hTNFα的结合特性 ,同单体sTNFRⅡ相比 ,对hTNFα的拮抗活性明显提高。
- 徐春晓姚立红黄国锦柴映爽陈爱珺张智清
- 关键词：可溶性受体嵌合蛋白纯化工艺
- H1N1亚型流感病毒M1和NA基因在昆虫杆状病毒系统中的共表达
- 2015年
- 目的 构建共表达H1N1亚型流感病毒M1和NA基因的重组杆状病毒.方法 以PCR扩增H1N1亚型流感病毒A/PR/8/34毒株M1和NA基因,构建含有M1、NA双基因的重组转移载体pFBD-M1-NA,将其转化DH10Bac,获得重组Bacmid-M1-NA穿梭载体.将Bacmid-M1-NA转染sf9昆虫细胞,在细胞内包装出重组杆状病毒rBac-M1-NA,空斑实验测定病毒滴度,PCR方法鉴定外源基因插入情况.间接免疫荧光（IFA）检测M1、NA基因的表达情况.结果 获得的重组杆状病毒滴度为1×10^7pfu/ml;PCR检测结果证实M1、NA基因成功整合到了重组杆状病毒基因组.IFA结果显示,rBac-M1-NA感染的sf9昆虫细胞成功表达了M1、NA基因.结论 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功构建了共表达H1N1亚型流感病毒M1和NA基因的重组杆状病毒,为研究流感病毒样颗粒（VLPs）的形成机制以及新型流感疫苗研发奠定了基础.
- 陈爱珺姚立红徐鹏卫张智清郭建强
- 关键词：蛋白质类神经氨酸酶杆状病毒
