张振韬
- 作品数：16 被引量：23H指数：3
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究被引量：7
- 2013年
- 旨在探讨BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的作用机理。采用单层贴壁培养作为分化模式，分别采用10、20、30和40ng·mL-1 BMP4浓度诱导雄性鸡胚胎干细胞，通过形态学、荧光定量PCR和免疫细胞化学检测诱导效果。根据细胞形态变化和差异基因表达量变化，确定了BMP4的适宜诱导浓度为40ng·mL-1。在适宜浓度诱导过程中，诱导4d类胚体开始出现，6～8d类胚体逐渐增大，数量增多，10d部分类胚体开始散开，变为小的圆形细胞，12d在散开后的类胚体周围可观察到少量生殖样细胞，14d生殖样细胞数目增多，且呈聚团生长的趋势。诱导过程中相应基因表达量也发生变化：胚胎干细胞标记基因Nanog、Sox2表达量显著下降（P〈O．01），生殖细胞特异基因Stra8、Dazl、integrina6、c-kit表达量均呈显著上升趋势（P〈O．01）。BMP4可以引起生殖细胞相应基因的表达，促进雄性鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞方向分化，结果为雄性生殖细胞的体外诱导研究提供试验参考，为进一步研究雄性生殖细胞发生和调控机制提供理论基础。
- 施青青张振韬李鹏程郑蒙蒙王丹黄晓梅张亚妮李碧春
- 关键词：鸡胚胎干细胞雄性生殖细胞分化BMP4
- 鸡ES细胞体外定向诱导分化特性的研究被引量：1
- 2011年
- 旨在探索鸡胚胎干细胞(ES细胞)体外定向诱导的多向分化潜能。分离鸡X期胚盘细胞,体外培养传代,经鉴定后,采用地塞米松(DEX)、β-甘油磷酸钠(β-GP)和维生素C(VitC)诱导ES细胞向成骨细胞分化;采用维甲酸(RA)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)诱导ES细胞向神经元样细胞分化;采用DEX、胰岛素、IBMX诱导ES细胞向脂肪细胞分化,比较不同浓度组合诱导剂的诱导效果,分别用Von Kossa’s染色法、甲苯胺蓝染色法、免疫组化法、油红O染色法和RT-PCR鉴定诱导产生的细胞。结果显示,ES细胞被诱导3～21d后,分化为成骨细胞,诱导率为40%～72%;被诱导4～7d后,分化为神经元样细胞,诱导率为71%～84%;被诱导2～21d后,分化为脂肪细胞,油红O染色阳性,并表达PPARγ基因。结果表明,在体外条件下,ES细胞可被特异的化学物质定向诱导分化为成骨细胞、神经元样细胞和脂肪细胞,具有多向分化潜能。
- 李碧春陈香凝裴敬帅施青青傅德智阴彦辉张振韬窦套存王克华
- 关键词：胚胎干细胞体外培养诱导分化
- 鸡胚胎干细胞的分离及其嵌合体制备条件探索被引量：2
- 2012年
- 分离培养鸡胚胎干细胞(ESCs),体外培养传代后,进行碱性磷酸酶活性检测和SSEA-1染色鉴定;并用线性化的质粒pEGFP-N1转染鸡ESCs。受体种蛋经赤道面开窗后,将经转染的ESCs注射到受体鸡胚胚下腔,以便制作嵌合体鸡;对获得的嵌合体鸡分别提取血液和组织DNA后进行PCR检测。结果表明:5只存活的的嵌合体鸡血液中没有发生EGFP基因嵌合,但有4只嵌合体鸡的部分器官表达了EGFP基因,其中有2只鸡的性腺发生嵌合,表明利用赤道面开窗后对受体鸡进行胚下腔显微注射可以生产嵌合体鸡。
- 张亚妮杨海燕施青青张振韬郑蒙蒙王丹李碧春
- 关键词：鸡胚胎干细胞显微注射
- 徐淮山羊LPL基因克隆及其表达产物亚细胞定位的研究被引量：2
- 2011年
- 旨在克隆徐淮山羊脂蛋白酯酶(LPL)基因的cDNA,并通过EGFP融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位。本研究通过RT-PCR方法克隆徐淮山羊LPL基因cDNA,并初步进行生物信息学分析,构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-LPL。聚乙烯亚胺(PEI)介导pEGFP-C1-LPL转染NIH-3T3细胞,48h后在荧光倒置显微镜下观察,并用RT-PCR方法检测LPLmRNA在细胞内的表达。结果,成功克隆出山羊LPL基因1 530bp长的cDNA,完整阅读框大小为1 437bp,共编码478个氨基酸,GenBank登录号为GU082383。信号肽区域预测结果表明LPL蛋白含有一小段信号肽序列,其可能性为100%。信号肽酶切割位置在第23和24个氨基酸之间,其可能性达到65.9%。成功构建融合表达载体pEGFP-C1-LPL,并且RT-PCR显示转染后LPL在mRNA水平上表达明显。EGFP-LPL融合蛋白定位在NIT-3T3细胞外和细胞膜部分。结果表明,首次成功克隆出徐淮山羊LPL基因cDNA;重组质粒pEGFP-C1-LPL构建成功,并在NIH-3T3细胞中明显表达。
- 秦玉蓉许峰田智泉高波张振韬阴彦辉孙敏李碧春
- 关键词：真核表达绿色荧光蛋白
- 湖羊MyoG基因CDS的克隆及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2011年
- 参阅GenBank发表的波尔山羊肌细胞生成素(MyoG)基因序列,设计3对具有互补末端的特异性引物,分别扩增出湖羊MyoG基因的3个外显子,利用重叠PCR技术,将此3个外显子连接,并构建成重组质粒pcDNA3.0-MyoG,转染NIH-3T3细胞,RT-PCR鉴定。结果表明:成功克隆了湖羊MyoG基因的CDS,在离体细胞中MyoG基因发生了转录,这为进一步研究MyoG基因的体内外表达及生物学的活性奠定了基础。
- 许峰秦玉蓉阴彦辉张振韬宋正海范广习高波李碧春
- 关键词：MYOG基因重叠PCR真核表达载体湖羊
- 视黄酸及Stra8基因联合作用对雄性鸡胚胎干细胞分化的影响
- 2015年
- 旨在研究视黄酸（All-trans retinoic acid，RA）及Stra8（Stimulated by retinoic acid gene8）基因联合作用对雄性鸡胚胎干细胞（Chicken embryonic stem cells，cESCs）分化的影响。
- 张振韬王丹施青青
- 关键词：鸡胚胎视黄酸雄性胚胎干细胞STEM
- 鸡瘦素蛋白输卵管特异性表达载体的构建及其表达的研究被引量：1
- 2010年
- 研究旨在利用生物反应器原理获得大量的、供实验研究的人瘦素蛋白。根据GenBank公布的人瘦素蛋白基因序列(登录号为NM000230)设计一对特异性引物,构建鸡输卵管瘦素特异性表达载体pOV3-OB,将重组质粒采用PEI包裹后翅静脉注射试验用鸡,收集蛋清并检测瘦素蛋白表达情况。结果显示:通过Western-blot检测,瘦素蛋白发生特异性表达。人瘦素蛋白可以在鸡输卵管中实现暂态表达,本研究为该蛋白的获取及其生物活性的研究奠定基础。
- 阴彦辉张振韬高波孙敏许峰秦玉蓉李碧春
- 关键词：瘦素克隆生物反应器
- 神经氨酸酶基因联合抗黏液病毒基因的抗病毒作用被引量：1
- 2013年
- 拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果。克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA;分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因共表达载体pVITRO2-Mx-NA的正确性。用pVITRO2-Mx-NA转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)方法检测目的基因的表达。随后用pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞,利用RT-PCR及微量细胞病变抑制法测定重组蛋白抗新城疫病毒(NDV)的效果。结果:酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达载体pVITRO2-Mx-NA,在转染后的NIH-3T3和CEF细胞中同时检测到了NA和Mx基因的表达。联合基因表达的重组蛋白可保护CEF细胞在孵育的72h内免受NDV的感染,而转染了突变型Mx或者NA单基因真核表达载体的CEF细胞在孵育的48h内亦未受到NDV的侵染;与单基因转染组相比,联合基因转染组明显延迟NDV感染CEF细胞的时间,差异显著(P<0.05)。构建的双基因真核表达载体pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞后,其表达的重组蛋白Mx-NA在细胞水平上具有协同延缓NDV感染的能力,且优于单个基因。
- 傅德智张亚妮陈昊李伟郑蒙蒙王丹张振韬施青青李碧春
- 关键词：MX抗NDV
- 徐淮山羊PPAR基因cDNA的克隆和生物信息学分析
- 2011年
- 为克隆徐淮山羊过氧化氢酶体激活增殖受体(PPAR)基因的cDNA,探讨徐淮山羊PPAR基因的生物信息学功能。根据GenBank中发表的绵羊PPAR基因序列,设计并合成1对引物,采用RT-PCR方法克隆徐淮山羊脂肪组织中PPAR基因cDNA,提交GenBank,并运用DNAStar软件及在线工具进行生物信息学分析。成功克隆出徐淮山羊PPAR基因的编码区全序列cDNA,大小为1 428 bp,GenBank登录号为GU082382,有起始密码子ATG和终止密码子TAG,编码475个氨基酸;徐淮山羊PPAR基因序列与鸡、鼠、猪、牛、绵羊相应编码区(CDS)的同源性分别为81%、89%、92%、98%、99%,徐淮山羊PPAR氨基酸序列与鸡、鼠、猪、牛、绵羊的PPAR氨基酸序列同源性分别为92.9%、97.3%、98.3%、99.6%、99.8%;PPAR蛋白无信号肽区域,属于非分泌型蛋白。
- 秦玉蓉许峰田智泉高波张振韬阴彦辉孙敏李碧春
- 关键词：徐淮山羊CDNA克隆生物信息学
- 调控鸡雄性性原细胞分化的关键基因和信号通路的分析
- [目的]本研究旨在探寻参与调控鸡雄性性原细胞分化的关键基因和信号通路,以期提高雄性生殖细胞的体外诱导生成效率。[方法]采用流式细胞分选法获得纯化的鸡胚胎干细胞(Embryonicstem cells,ESCs)、原始生殖...
- 张亚妮张振韬施青青左其生李东王颖洁王飞纪燕琴路镇宇张文慧靳锴陈少则汪怡临李碧春
- 关键词：鸡胚胎干细胞原始生殖细胞精原干细胞MICROARRAY
