罗建明
- 作品数：8 被引量：26H指数：3
- 供职机构：复旦大学附属肿瘤医院中心实验室更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 外源性TNF-α基因联合异搏定、三苯氧胺逆转多药耐药性被引量：8
- 2001年
- 目的 观察TNF α基因联合异搏定 (VRP)、三苯氧胺 (TAM)逆转多药耐药性 (MDR)的效果。方法 以重组逆转录病毒为载体将TNF α基因导入具MDR表型的人乳腺癌细胞系MCF7/ADR ,经G418抗性筛选获阳性克隆MCF7/ADR TNF。以PCR与ELISA法检测目的基因的整合与表达。MTT法检测外源性TNF -a基因联合VRP、TAM的逆转MDR作用 ,应用公式I=d/D1+d/D2 分析联合逆转效应。结果 MCF7/ADR -TNF细胞中有TNF α基因的整合和表达 ,TNF α分泌量为 1737pg/ml(10 6cells/ 48h)。与阴性对照细胞相比 ,MCF7/ADR -TNF细胞对ADR的耐药性明显降低 (P <0 .0 5 ) ,耐药逆转倍数为 1.6倍。TNF α基因与VRP联合呈拮抗效应 ,而TNF α基因与TAM (6 μmol/L)联合对MCF7/ADR的耐药性逆转有明显的协同效应 (效应指数I=0 .6 4)。结论 外源性TNF
- 郭伟剑李杰沈兆忠罗建明钱关祥孙欲晓胡亮
- 关键词：多药耐药性异博定三苯氧胺
- 人胰腺癌高肝转移细胞株的建立及其意义被引量：2
- 2007年
- 背景与目的:胰腺癌肝转移是胰腺癌晚期常见的症状,也是主要的致死原因。肿瘤转移是一个相当复杂的过程,建立胰腺癌肝转移模型是研究胰腺癌肝转移机理关键的一步。本研究通过连续人胰腺癌SW1990细胞脾脏移植法筛选出高肝转移胰腺癌细胞株,并对其转移相关特性进行分析。方法:人胰腺癌SW1990细胞脾内注射出现肝转移病灶后,将肝转移病灶肿瘤细胞体外原代培养扩增,再脾内注射出现肝转移病灶,此过程重复4次筛选到SW1990H4;然后比较SW1990H4和SW1990细胞株的核型、细胞体外增殖、细胞周期、体外侵袭、体内成瘤性、转移性和部分转移相关基因MMP-2、MMP-9、VEGF、bFGF和E-cadherin mRNA表达水平的差异。结果:SW1990H4和SW1990细胞株的核型及周期差异无显著性(P>0.05);SW1990H4体外细胞增殖速度、体外侵袭能力、移植瘤增长速度和肝转移率均显著高于SW1990细胞株(P<0.05),SW1990H4细胞MMP-2、VEGF、bFGF和E-cadherin mR-NA表达水平均高于SW1990,只有MMP-9 mRNA表达水平低于SW1990。结论:SW1990H4是人胰腺癌高肝转移细胞株,可应用于胰腺癌肝转移机制研究和抗肝转移药物的筛选。
- 石卫东刘鲁明孟志强陈震林钧华罗建明于尔辛
- 关键词：胰腺癌SW1990细胞
- 肿瘤坏死因子-α基因抑制耐药性人乳腺癌细胞的研究被引量：3
- 2002年
- 目的 观察肿瘤坏死因子 α(TNF α)基因对耐药细胞生长的抑制作用及机制。方法以重组逆转录病毒为载体将TNF α基因导入耐药性人乳腺癌细胞系MCF7/ADR ,获阳性克隆MCF7/ADR TNF1与MCF7/ADR TNF2。体外观察并比较野生型和转基因癌细胞的生长速度 ,流式细胞仪分析细胞周期的变化 ,端粒酶重复扩增实验 (TRAP)综合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法测定端粒酶活性的变化。结果 MCF7/ADR TNF1与MCF7/ADR TNF2细胞中有TNF α基因的整合和表达 ,病毒上清中TNF α含量分别为 173 7μg/L(10 6个细胞 /4 8h)、2 875 μg/L。与阴性对照细胞相比 ,MCF7/ADR TNF1与MCF7/ADR TNF2细胞的生长速度明显减慢 ,生长抑制率分别为 3 2 .4%、5 4.8% ,细胞周期阻滞于S +G2 /M期 ,端粒酶活性降低。结论 外源性TNF α基因的导入能有效抑制耐药细胞 ,阻滞细胞周期、抑制端粒酶活性可能为其主要机制。
- 郭伟剑孟志强沈兆忠罗建明郑颂国钱关祥孙欲晓胡亮
- 关键词：多药耐药性肿瘤坏死因子-Α乳腺癌细胞端粒酶活性
- 健脾理气方对人肝癌细胞SMMC7721化疗耐药性的影响被引量：1
- 2001年
- 目的:观察健脾理气方对人肝癌细胞 SMMC 7721化疗耐药性的影响。方法:采用血清药理学方法研究健脾理气方的效应。MTT 法检测健脾理气方、阿霉素(ADR)结合的抑癌效应,观察健脾理气方对ADR 耐药性的影响。流式细胞仪(FCM)检测健脾理气方对细胞内 ADR 累积的影响。RT-PCR、免疫组化法分析健脾理气方对细胞 MDR_1基因的 mRNA 及 P170糖蛋白(P-gp)表达水平的影响。结果:健脾理气方作用2天对肝癌细胞的抑制率为(4.4±1.9)%,ADR(0.2μg/ml)组的抑制率为(23.3±2.3)%;健脾理气方结合ADR 组的抑制率为(17.0±2.7)%,明显低于 ADR 组(P<0.05),健脾理气方使 ADR 的耐药性增高,敏感性下降。健脾理气方处理使细胞 MDR_1 mRNA 及 P-gp 表达水平上调,胞内 ADR 浓度下降。结论:健脾理气方使 SMMC7721细胞对 ADR 的耐药性增高。
- 郭伟剑林钧华于尔辛郑颂国罗建明沈兆忠
- 关键词：健脾理气方肝癌细胞系多药耐药性
- 结肠癌耐药细胞株LoVo/5-FU的建立及其差异表达基因的筛选被引量：3
- 2007年
- 目的:建立结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU并初步筛选可能的耐药相关基因.方法:采用5-FU浓度递增法建立人结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU,观察其生长规律并绘制细胞生长曲线:用MTT法鉴定耐药细胞株耐药性并计算耐药指数(RI);用基因芯片技术检测耐药细胞株LoVo/5-FU与其亲本细胞株LoVo中的差异表达基因,从中筛选出可能的耐药相关基因;用半定量RT-PCR方法对筛选出的部分耐药相关基因在耐药细胞及其亲本细胞中的表达情况进行验证.结果:LoVo/5-FU细胞与LoVo细胞相比,生长缓慢,细胞体积增大.LoVo/5-FU对5-FU、ADM、MMC耐药,而对CDDP无耐药性(RI:7.69,2.78,1.43和0.96).通过基因芯片筛选出差异表达基因425个,可能的耐药相关基因包括CYP1B1,NAT2,RNF20,SNAI2,MAP3K2,其中CYP1B1在LoVo/5-FU与LoVo中的表达有明显差异(Cy5/Cv3=5.877).结论:LoVo/5-FU细胞株耐药性稳定,耐药机制可能与CYP1B1,NAT2等耐药相关基因有关.
- 盛雅萍李建芳刘炳亚罗建明郑磊贞陈强郭伟剑
- 关键词：结肠癌耐药相关基因5-氟尿嘧啶MTT法逆转录-聚合酶链反应
- 人肾母细胞瘤裸小鼠肾原位移植模型的建立和生物学特性的研究被引量：4
- 2003年
- 目的 建立人肾母细胞瘤的裸小鼠肾原位移植模型。方法 直接将未经处理的患儿肾母细胞瘤组织块接种在裸小鼠肾包膜下作原代以及系列传代移植 ;原、2、3、4代接种裸小鼠数目分别为 2、5、5、18只 ,每代间隔时间均为 8周。原、2、3代裸小鼠分别于接种 8周后全部处死 ,4代裸小鼠从接种后 3周至 8周 ,每周处死 3只至全部 ,取出移植瘤进行称重 ,以反映肿瘤生长动力学。采用流式细胞仪检测原代和系列传代肿瘤样本中细胞周期 /凋亡分布以及倍体数。光学显微镜下观察肿瘤标本形态学以及角质蛋白 18和结蛋白的免疫组化染色特征 ,聚合酶链反应扩增基因组微卫星序列D14S6 8、D18S6 9andD2 0S199,以确定其人源性。结果 人肾母细胞瘤在原代裸小鼠中形成肾原位移植瘤 ,随后系列传四代 ,共 30只裸小鼠 ,其中 2 7只在肾原位可以检测到移植瘤生长 ;移植瘤生长曲线符合指数模型 ,其倍体数、细胞周期分布在各代之间相似。所有移植瘤都保留了最初的组织形态学和免疫组化染色特征。而且 ,移植瘤基因组微卫星DNA序列与人肾母细胞瘤完全一致。结论 该异种原位移植瘤模型 ,准确地重现所移植的人肾母细胞瘤的形态和恶性生物学特点 ,具有重要的基础和临床研究应用价值。
- 何小伟袁胜涛高解春陆丽娟陈莲丁健罗建明
- 关键词：肾母细胞瘤组织形态学分子遗传学
- 维甲酸对肾母细胞瘤分化诱导和生长抑制的实验研究被引量：3
- 2003年
- 目的 研究维甲酸对肾母细胞瘤是否具诱导分化和体内生长抑制作用。方法 建立人类肾母细胞瘤裸小鼠肾原位移植的模型;荷瘤裸小鼠30只均分两组,分别口服维甲酸30mg·kg^(-8)·d^(-1)和等量芝麻油;测量治疗和对照组裸小鼠体重和移植瘤重量,光镜、电镜观察两组移植瘤的形态学改变,流式细胞仪分析增殖指数,RT-PCR半定量检测IGF2和H19mRNA含量。结果 两组裸小鼠体重差异无显著性意义(P>0.05);维甲酸治疗组裸小鼠移植瘤重量增长显著低于对照组(P<0.05),增殖指数PI也低于对照组(P<0.05)。光镜下移植瘤组织学类型为胚基-上皮混合型,电镜下显示治疗组移植瘤分化较对照组好,出现一些发育成熟的结构如微绒毛、基底膜等;两组移植瘤都扩增出IGF2mRNA治疗组IGF2mRNA灰度值0.950±0.146,低于对照组的1.071±0.238,但统计学比较差异无显著意义。H19在两组裸小鼠移植瘤瘤中都没有检测出阳性转录产物。结论 维甲酸通过诱导肾母细胞瘤分化发挥抑瘤作用,这一效应与IGF2和H19表达调控没有直接联系。
- 何小伟高解春袁胜涛陈莲罗建明陆丽娟丁健
- 关键词：维甲酸肾母细胞瘤分化诱导
- 康莱特诱导具多药耐药表型的人乳腺癌细胞MCF7^(adr)凋亡及周期阻滞的研究被引量：3
- 2001年
- 目的:观察康莱特对耐药细胞的作用及分子机制。方法:以敏感型乳腺癌细胞株 MCF7为对照,四氮唑蓝(MTT)法检测康莱特对耐药细胞株 MCF7^(adr)的抑制作用。以 Annexin V 标记法、DNA 含量测定法及电镜观察康莱特的诱导耐药细胞 MCF7^(adr)凋亡及周期阻滞的作用。免疫组化法检测康莱特对 MCF7^(adr)细胞 p53、p21^(WAF1/CIP1)蛋白表达的影响,RT-PCR 法检测康莱特对 MCF7^(adr)细胞 p21^(WAF1/CIP1)mRNA 表达水平的影响。结果:康莱特对 MCF7^(adr)细胞的半数抑制剂量(IC_(50))为26μ1/ml,与其对敏感细胞 MCF7的 IC_(50)(21μ1/ml)差异无显著性(P>0.05)。康莱特能诱导 MCF7^(adr)出细胞凋亡及细胞周期阻滞(G_0/G_1及 G_2/M 期),使 p53蛋白、p21^(WAF1/CIP1)mRNA 及蛋白表达水平升高。结论:康莱特对耐药细胞同样有效,这为其临床应用于已产生耐药性的肿瘤提供了依据。
- 郭伟剑沈兆忠罗建明郑颂国
- 关键词：康莱特多药耐药凋亡
