刘杉杉
- 作品数：10 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目北京市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 利用细菌人工染色体技术构建表达鹦鹉热衣原体PmpD基因的重组HVT
- 家禽免疫的主要挑战来自于如何设计出只需接种单一剂量就可以防控多种疾病的疫苗。为了实现一针防两病(禽衣原体病和马立克氏病)的目的,本研究以火鸡疱疹病毒(HVT)为载体表达鹦鹉热衣原体多型外膜D蛋白(PmpD)抗原,构建同时...
- 刘杉杉黄秀芬姜良孙盈何诚李永清
- 关键词：鹦鹉热衣原体马立克氏病毒活载体疫苗
- 文献传递
- 紫玉米花色苷抑制牛传染性鼻气管炎病毒在牛肾细胞中增殖
- 为研究紫玉米花色苷抗病毒效果,先通过观察细胞病变效应测定了紫玉米花色苷对牛肾细胞的传代系MDBK细胞的毒性作用,以此确定紫玉米花色苷的安全浓度范围.然后以3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)...
- 姜良黄秀芬刘杉杉闫敏鑫赵晓燕张林波李永清
- 关键词：牛传染性鼻气管炎抗病毒作用细胞增殖
- 文献传递
- 鹦鹉热衣原体重组HVT活载体疫苗的构建与免疫效力测定
- 引言鹦鹉热衣原体是专性胞内革兰氏阴性菌,感染禽后引起严重的呼吸道病和继发症,也是重要的人兽共患病之一。理想的衣原体疫苗需要诱导机体产生良好的细胞免疫和体液免疫,才能有效控制禽衣原体的持续感染。HVT被认为是构建活载体疫苗...
- 何诚刘杉杉褚军李永清
- 表达鸡补体因子C3d基因多克隆抗体的制备及应用
- 引言C3d分子是补体活化过程中C3的一个最小裂解片段,可以与B细胞表面受体CR2/CD21结合,各项研究已经证实其免疫佐剂的功能[1,3],但对于鸡C3d蛋白结构及其单体对机体免疫系统的影响仍缺少研究。本研究通过构建原核...
- 闫敏鑫刘杉杉黄秀芬陈小玲李永清
- 牛疱疹病毒1型gE蛋白胞外区基因的杆状病毒表达及其表达产物的免疫反应性被引量：4
- 2014年
- 为获得具有生物学活性的牛疱疹病毒1型(BHV 1)囊膜糖蛋白gE,采用PCR方法从BHV 1感染的牛肾细胞全基因组中扩增出约1.7kb的gE基因,再将1 176bp的gE胞外区基因片段克隆到新型杆状病毒载体pFastBac-LIC-Bse中,构建重组转移质粒pFB-gE。将pFB-gE转化到杆状病毒基因组的DH10Bac感受态细胞中,制备重组杆粒rBacmid-gE。将该重组杆粒的DNA转染昆虫细胞Sf9,获得与gE基因发生重组的杆状病毒。Western-blot分析及间接免疫荧光试验(IFA)的结果显示,重组杆状病毒在Sf9中表达了分子质量大小约为43ku的gE融合蛋白,该融合蛋白分别与小鼠抗His标签单克隆抗体和小鼠抗BHV 1多克隆抗体发生特异性结合,表明获得的gE融合蛋白具有良好的免疫反应性。本研究为进一步获得高特异性的诊断抗原奠定了基础。
- 姜良黄秀芬王天坤刘杉杉李永清
- 关键词：GE基因胞外区杆状病毒表达
- 基于CMV启动子表达鹦鹉热衣原体PmpD-N蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建
- 2018年
- 为构建表达鹦鹉热衣原体多型外膜蛋白D的N端(PmpD-N)蛋白重组火鸡疱疹病毒(HVT),以鹦鹉热衣原体CB7株DNA为模板,通过PCR扩增pmpD-N基因,构建带有巨细胞病毒(CMV)启动子的真核表达盒,采用细菌人工染色体技术构建HVT重组子,转染细胞获得HVT重组病毒,并在体外评价该重组病毒的相关特性。结果表明,转染细胞后成功获得HVT重组病毒。通过Western blot和IFA分析表明,重组病毒表达了PmpD-N蛋白。Confocal分析表明,PmpD-N蛋白分布在细胞的胞核、胞浆和细胞表面。HVT重组病毒的复制特性和野生型HVT一致。HVT重组病毒能够激活巨噬细胞促炎性细胞因子IL-6和NO的产生。该试验成功构建了含有CMV启动子,能够表达PmpD-N蛋白的HVT重组病毒,为下一步进行动物试验和分析该病毒的免疫效力奠定了基础。
- 刘杉杉刘杉杉张稳张稳罗杰沈易华罗杰何诚
- 关键词：鹦鹉热衣原体火鸡疱疹病毒
- 紫玉米花色苷抑制牛传染性鼻气管炎病毒在牛肾细胞中增殖的研究被引量：2
- 2014年
- 为研究紫玉米花色苷(purple corn anthocynins,PCA)的抗病毒效果,本试验先通过观察细胞病变效应测定了PCA对牛肾细胞传代系MDBK细胞的毒性作用,以此确定PCA的安全浓度范围;然后以3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测了安全浓度范围内的PCA对牛传染性鼻气管炎病毒在MDBK细胞中复制的影响。PCA毒性试验结果显示,PCA对MDBK细胞的最大安全浓度为262.14μg/mL;而最小浓度为7.8125μg/mL的PCA就能对牛传染性鼻气管炎病毒在MDBK细胞中的复制有明显抑制作用。MTT试验结果显示,PCA对MDBK细胞的半数抑制浓度(TC50)为262.14μg/mL,对病毒的半数抑制浓度(IC50)为11.38μg/mL,以此计算出治疗指数(TI)为23.04。由此证明PCA具有良好的抗牛传染性鼻气管炎病毒的作用,提示紫玉米可作为防制奶牛传染性鼻气管炎的饲料原料。
- 姜良黄秀芬刘杉杉闫敏鑫赵晓燕张林波李永清
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒病毒复制
- 鸡补体C3d抗血清的制备与应用
- 2015年
- 为探讨补体因子C3d在家禽健康诊断中的意义,将鸡补体因子C3d全长基因克隆到原核表达载体pET28a中构建重组表达质粒pET28a-C3d,然后将pET28a-C3d转化到大肠埃希菌BL21(DE3)并以IPTG诱导表达。表达产物采用氯化钾染色切胶法进行纯化,获得分子质量约35ku的C3d目的蛋白。将所得蛋白与弗氏佐剂制备疫苗免疫小鼠,制备抗鸡补体因子C3d血清。用制备的血清与重组杆状病毒表达的C3d蛋白进行Western blot和间接免疫荧光(IFA)鉴定血清的特异性。进一步应用该血清对不同健康状态的鸡血清进行C3d相关补体成份相对含量的检测。结果鸡补体因子C3d在大肠埃希菌中成功表达,纯化的C3d蛋白免疫小鼠后制备的抗血清经ELISA检测抗体效价达1∶256 000。Western blot和IFA结果显示,该血清能与重组杆状病毒表达的C3d蛋白发生特异性反应。临床应用试验表明,该血清不仅能用于检测不同健康状态鸡血浆中C3d的表达状况,还能用于ELISA检测不同鸡血清中C3d相关补体成分的相对含量差异。研究还证实鸡血浆中C3d相关补体成分的表达因机体免疫状态不同而存在差异,结果为了解C3d与鸡体健康状况之间的关系提供了依据。
- 闫敏鑫黄秀芬任慧英刘杉杉姜良李永清
- 关键词：原核表达蛋白纯化抗血清免疫学指标
- 利用细菌人工染色体技术构建表达鹦鹉热衣原体PmpD基因的重组HVT
- 家禽免疫的主要挑战来自于如何设计出只需接种单一剂量就可以防控多种疾病的疫苗。为了实现一针防两病(禽衣原体病和马立克氏病)的目的,本研究以火鸡疱疹病毒(HVT)为载体表达鹦鹉热衣原体多型外膜D蛋白(PmpD)抗原,构建同时...
- 刘杉杉黄秀芬姜良孙盈何诚李永清
- 关键词：家禽鹦鹉热衣原体活载体疫苗
- 文献传递
- 火鸡疱疹病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：1
- 2015年
- 针对火鸡疱疹病毒(HVT)特异性的sorf1区基因序列设计引物,建立检测HVT的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行检测。结果表明,建立的实时荧光定量PCR方法标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好线性关系(r2=0.99),熔解曲线分析显示该PCR扩增具有良好的特异性、敏感性和重复性,试验表明该方法最低检测浓度为7×101拷贝/μL。利用该方法对野生型HVT和rHVT-pmpD-N在体内和体外的复制特性进行检测,结果表明重组后的HVT与野生型HVT的增殖速度基本一致。本试验建立的检测方法能够快速检测HVT,准确率高,特异性好,具有较高的灵敏度和稳定性,为监测HVT体内和体外的病毒含量和复制情况提供了一种有效的手段。
- 刘杉杉孙伟闫敏鑫黄秀芬姜良何诚李永清
- 关键词：火鸡疱疹病毒SYBR实时荧光定量PCR
