姜良
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：北京市农林科学院畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金北京市科技计划项目更多>>
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- 牛疱疹病毒1型gE蛋白胞外区基因的杆状病毒表达及其表达产物的免疫反应性被引量：4
- 2014年
- 为获得具有生物学活性的牛疱疹病毒1型(BHV 1)囊膜糖蛋白gE,采用PCR方法从BHV 1感染的牛肾细胞全基因组中扩增出约1.7kb的gE基因,再将1 176bp的gE胞外区基因片段克隆到新型杆状病毒载体pFastBac-LIC-Bse中,构建重组转移质粒pFB-gE。将pFB-gE转化到杆状病毒基因组的DH10Bac感受态细胞中,制备重组杆粒rBacmid-gE。将该重组杆粒的DNA转染昆虫细胞Sf9,获得与gE基因发生重组的杆状病毒。Western-blot分析及间接免疫荧光试验(IFA)的结果显示,重组杆状病毒在Sf9中表达了分子质量大小约为43ku的gE融合蛋白,该融合蛋白分别与小鼠抗His标签单克隆抗体和小鼠抗BHV 1多克隆抗体发生特异性结合,表明获得的gE融合蛋白具有良好的免疫反应性。本研究为进一步获得高特异性的诊断抗原奠定了基础。
- 姜良黄秀芬王天坤刘杉杉李永清
- 关键词：GE基因胞外区杆状病毒表达
- 牛疱疹病毒1型gE基因在杆状病毒表达系统pFB-LIC-Bse内的表达
- 为获得具有生物活性的牛疱疹病毒1型(BHV-1)病毒囊膜糖蛋白gE,采用PCR方法从BHV-1感染的牛肾细胞全基因组中扩增出约1.5 kb的gE基因片段,再将gE基因克隆到新型杆状病毒载体pFastBac-L1C-Bse...
- 黄秀芬姜良王天坤张林波李永清
- 关键词：囊膜糖蛋白杆状病毒表达系统基因表达
- 文献传递
- 鸡补体C3d抗血清的制备与应用
- 2015年
- 为探讨补体因子C3d在家禽健康诊断中的意义,将鸡补体因子C3d全长基因克隆到原核表达载体pET28a中构建重组表达质粒pET28a-C3d,然后将pET28a-C3d转化到大肠埃希菌BL21(DE3)并以IPTG诱导表达。表达产物采用氯化钾染色切胶法进行纯化,获得分子质量约35ku的C3d目的蛋白。将所得蛋白与弗氏佐剂制备疫苗免疫小鼠,制备抗鸡补体因子C3d血清。用制备的血清与重组杆状病毒表达的C3d蛋白进行Western blot和间接免疫荧光(IFA)鉴定血清的特异性。进一步应用该血清对不同健康状态的鸡血清进行C3d相关补体成份相对含量的检测。结果鸡补体因子C3d在大肠埃希菌中成功表达,纯化的C3d蛋白免疫小鼠后制备的抗血清经ELISA检测抗体效价达1∶256 000。Western blot和IFA结果显示,该血清能与重组杆状病毒表达的C3d蛋白发生特异性反应。临床应用试验表明,该血清不仅能用于检测不同健康状态鸡血浆中C3d的表达状况,还能用于ELISA检测不同鸡血清中C3d相关补体成分的相对含量差异。研究还证实鸡血浆中C3d相关补体成分的表达因机体免疫状态不同而存在差异,结果为了解C3d与鸡体健康状况之间的关系提供了依据。
- 闫敏鑫黄秀芬任慧英刘杉杉姜良李永清
- 关键词：原核表达蛋白纯化抗血清免疫学指标
- 紫玉米花色苷抑制牛传染性鼻气管炎病毒在牛肾细胞中增殖
- 为研究紫玉米花色苷抗病毒效果,先通过观察细胞病变效应测定了紫玉米花色苷对牛肾细胞的传代系MDBK细胞的毒性作用,以此确定紫玉米花色苷的安全浓度范围.然后以3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)...
- 姜良黄秀芬刘杉杉闫敏鑫赵晓燕张林波李永清
- 关键词：牛传染性鼻气管炎抗病毒作用细胞增殖
- 文献传递
- 紫玉米花色苷抑制牛传染性鼻气管炎病毒在牛肾细胞中增殖的研究被引量：2
- 2014年
- 为研究紫玉米花色苷(purple corn anthocynins,PCA)的抗病毒效果,本试验先通过观察细胞病变效应测定了PCA对牛肾细胞传代系MDBK细胞的毒性作用,以此确定PCA的安全浓度范围;然后以3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测了安全浓度范围内的PCA对牛传染性鼻气管炎病毒在MDBK细胞中复制的影响。PCA毒性试验结果显示,PCA对MDBK细胞的最大安全浓度为262.14μg/mL;而最小浓度为7.8125μg/mL的PCA就能对牛传染性鼻气管炎病毒在MDBK细胞中的复制有明显抑制作用。MTT试验结果显示,PCA对MDBK细胞的半数抑制浓度(TC50)为262.14μg/mL,对病毒的半数抑制浓度(IC50)为11.38μg/mL,以此计算出治疗指数(TI)为23.04。由此证明PCA具有良好的抗牛传染性鼻气管炎病毒的作用,提示紫玉米可作为防制奶牛传染性鼻气管炎的饲料原料。
- 姜良黄秀芬刘杉杉闫敏鑫赵晓燕张林波李永清
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒病毒复制
- 火鸡疱疹病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：1
- 2015年
- 针对火鸡疱疹病毒(HVT)特异性的sorf1区基因序列设计引物,建立检测HVT的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行检测。结果表明,建立的实时荧光定量PCR方法标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好线性关系(r2=0.99),熔解曲线分析显示该PCR扩增具有良好的特异性、敏感性和重复性,试验表明该方法最低检测浓度为7×101拷贝/μL。利用该方法对野生型HVT和rHVT-pmpD-N在体内和体外的复制特性进行检测,结果表明重组后的HVT与野生型HVT的增殖速度基本一致。本试验建立的检测方法能够快速检测HVT,准确率高,特异性好,具有较高的灵敏度和稳定性,为监测HVT体内和体外的病毒含量和复制情况提供了一种有效的手段。
- 刘杉杉孙伟闫敏鑫黄秀芬姜良何诚李永清
- 关键词：火鸡疱疹病毒SYBR实时荧光定量PCR
