杜凤
- 作品数：14 被引量：21H指数：4
- 供职机构：中国科学院成都生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省科技计划项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学理学更多>>
- 基于LAMP建立非洲猪瘟病毒的快速可视化检测方法被引量：5
- 2022年
- 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)由非洲猪瘟病毒(ASF virus,ASFV)引起,具有高度传染性和破坏性,给猪产业造成严重的经济损失,威胁全球食品安全;1921年在肯尼亚首次报告,欧亚多国也陆续报告了该病.该病目前没有商业疫苗和有效治疗方法,控制疫情最有效的办法是对感染和接触的猪立即扑杀并深埋.因此建立精准快速的检测方法对ASF的预防和疫情监测十分关键.基于环介导等温扩增技术建立了一步法可视化等温检测,选择ASFV的P72基因作为检测的靶标,构建含有该靶标的标准质粒样本,利用Real-time LAMP确定引物扩增的特异性和效率,通过筛选可视化染料、优化显色条件建立两种ASFV的等温比色检测方法,真实样本基因组可以在40 min内完成检测,可肉眼直接判断检测结果.本研究构建方法为非洲猪瘟的现场诊断和疫情监测提供了一种可靠、便捷、低成本的选择.
- 韦莹华丁盛董娟杜凤崔欣唐卓
- 关键词：非洲猪瘟病毒核酸检测环介导等温扩增技术可视化
- 体外筛选剪切DNA的DNA酶
- 2013年
- 为得到能够剪切单链DNA序列的人工DNA酶,通过体外筛选的方法,得到了一类DNA酶F-9.F-9的结构由两侧与底物结合区域和中间的酶活性中心组成;F-9在一定的Cu2+、Mn2+离子浓度下发挥催化作用,可以与底物结合形成二级结构.F-9可以剪切DNA序列,底物识别区域ACTG为保守序列.同时,对DNA酶的剪切位点作了进一步研究,证明F-9是一个多位点剪切的DNA酶.
- 张华帆王明齐陈浩东董娟杜凤周丽唐卓
- 关键词：体外筛选DNA酶催化活性
- 孔雀石绿和结晶紫在荧光检测中的比较被引量：4
- 2013年
- 为优选出三苯甲烷染料中的一种染料与G-四聚体结合开发为荧光定量报告体系,对孔雀石绿(Malachitegreen,MG)和结晶紫(Crystal violet,CV)与G-四聚体结合后的灵敏度和重现性进行了比较研究.首先,比较了4种不同DNA(hum21,short-hum21,double-strands,single-strand)分别与孔雀石绿和结晶紫结合后的荧光光谱,结果显示,两种染料均可区分以上4种DNA,但孔雀石绿的灵敏度更高.然后,将孔雀石绿和结晶紫应用到实时荧光检测中,进一步比较验证两种染料灵敏度,并考察两种染料的重现性,结果显示,孔雀石绿的重现性和灵敏度均优于结晶紫.由此,建立了孔雀石绿与G-四聚体结合的荧光定量报告体系.
- 赵永云杜凤董娟陈浩东周丽陈蓉唐卓
- 关键词：孔雀石绿结晶紫
- 一种PCR检测核酸的方法
- 本发明属于分子生物学技术领域，涉及核酸分析检测，具体涉及一种普适的利用核酸聚合酶5’-3’外切酶活性释放DNAzyme的PCR检测方法。在PCR体系中加入用DNAzyme标记或部分DNAzyme标记的寡核苷酸探针，用正反...
- 唐卓杜凤
- 文献传递
- 一种非改性探针及其在实时荧光PCR方法中的应用
- 本发明涉及一种非改性探针和用其进行实时荧光PCR检测的方法。本发明首次利用有机小分子硫磺素T来进行序列特异性的PCR检测，实现不开盖的实时荧光监测。本发明提供的非改性探针不需要任何额外的荧光标记，容易合成，合成成本比Ta...
- 唐卓杜凤何密鼓董娟黄鑫丁盛
- 文献传递
- 基于LAMP技术的动物源性成分快速检测方法
- 本发明属于动物源性成分真伪鉴定方法，具体地说是利用环介导等温扩增(LAMP)技术检测马源性成分DNA、牛源性成分DNA和羊源性成分DNA的方法。该方法根据马、牛、山羊的线粒体DNA设计了特异性的LAMP引物，并提供了配套...
- 唐卓王嘉钰董娟陈刚毅杜凤
- 文献传递
- 一种PCR终点可视化检测核酸的方法
- 本发明涉及一种基于硫磺素T和G‑四链体的不开盖就能实现现场可视化快速检测的PCR终点核酸检测方法。该方法可以准确检测核酸，特异性和灵敏度高、适用性广、检出限低，且不易污染。PCR完成后用实时蓝光观测仪进行肉眼观察，就能直...
- 唐卓杜凤何密鼓董娟黄鑫丁盛
- 文献传递
- 一种利用活性炭提取中药材DNA的方法
- 2019年
- 当前市场上中药材出现来源混乱、真假难辨的现象,因此近几年DNA分子诊断迅速成为了鉴定中药材的重要工具。要进行DNA检测,DNA的提取是其中非常重要的一个步骤。但是当前的DNA提取方法多有毒性大、操作繁琐、价格高、耗时长等缺点,所以开发一种低毒、简易、价低、省时的DNA提取方法尤为重要。我们选用150 mmol/L Na Cl作为裂解液,加入活性炭(Activated carbon,AC)后,藏红花、甘草、三七花等的DNA模板量都有很大程度的增加,尤其是藏红花的模板量增加了超过30倍,并且整个DNA提取过程不超过10 min。由此可见,这种简易提取中药材DNA的方法是极具潜力的。
- 卢雪陈蓉杜凤唐卓
- 关键词：中药材DNA提取活性炭
- 基于LAMP的病原菌一步等温可视化检测被引量：6
- 2019年
- 病原菌检测是环境监测、食品安全以及临床诊断中重要的研究手段,环介导等温扩增技术是病原菌等温检测的新兴技术,为实现病原菌的可视化检测,利用环介导的等温扩增技术结合灵敏的颜色指示剂对多种病原菌建立一步等温可视化检测.结果显示基于LAMP的实时荧光分析能够特异性地检测铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌、大肠杆菌O157:H7、阪崎肠杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌以及金黄色葡萄球菌.该方法的检测限低至能够检测体系中少于10个拷贝的菌样.其次,确定了以pH指示剂中性红作为可视化报告分子时的反应缓冲体系应含低于10 mmol/L Tris-HCl.通过将多种引物混合用于考察该方法在多重检测方面的可行性,结果表明该方法能够实现病原菌的五重检测.本研究建立了一种适合于现场检测的一步等温可视化病原菌检测体系,该方法较传统方法更加简单、价格低廉,能够通过肉眼对检测结果进行判断,对实际应用具有重要意义.
- 丁盛陈刚毅李美王嘉钰陈蓉陈蓉杜凤杜凤董娟黄鑫唐卓
- 关键词：病原菌环介导等温扩增
- 基于缺口酶的链置换等温扩增技术被引量：5
- 2015年
- 传统的链置换等温扩增技术中需要加入修饰的底物,为了解决这一技术难题,实现常规底物下的链置换等温扩增技术,采用缺口酶Nt.BstNBI代替传统链置换等温扩增技术中的限制性内切酶,通过优化两种酶的比例、反应温度、反应时间、两种原装buffer的比例、buffer中的离子浓度等反应条件和引物浓度、引物序列以及引物前端保护序列的长度,最终建立了一种新型的链置换等温扩增技术.该方法可以检测到2 pmol/L的质粒DNA.扩增反应在15-30 min即可完成,并且产物可通过琼脂糖凝胶电泳进行直接检测.本研究建立的基于缺口酶的链置换等温扩增技术较之传统方法更加简便、快捷、环保且价格低廉,具有非常强的实际应用潜力,特别适用于现场检测.
- 邓世琼董娟陈刚毅杜凤邹家尉唐卓
- 关键词：剪切
