黄海
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 基于miRNA-155结构的人工miRNA表达载体的构建与评价被引量：3
- 2012年
- 目的:建立一种适用于人工miRNA(amiRNA)表达研究的克隆载体。方法:基于实验室构建的短发夹RNA(shRNA)表达载体pshOK-basic,将鼠源miRNA-155的侧翼序列插入合适的酶切位点构建得到amiRNA重组表达载体pOK-basic;应用本载体分别构建靶向萤火虫荧光素酶(luc2)和红色荧光蛋白(mCherry)基因的amiRNA并检测其沉默效果。结果:应用此载体能快速高效地构建amiRNA,靶向luc2和mCherry报告基因的amiRNA能较好地抑制靶基因的表达。结论:构建了一种能高效表达amiRNA的克隆载体,为amiRNA的进一步研究及应用奠定了基础。
- 李英谢佩雯黄海张秀娟胡伟王学军王升启
- 关键词：RNA干扰
- Gaussia分泌型萤光素酶的研究进展及其应用被引量：2
- 2013年
- Gaussia分泌型萤光素酶是近年发现的一种来源于海洋桡脚类动物Gaussia princeps的新型分泌型萤光素酶,是目前已知的可自然分泌的最小萤光素酶,因其分子小、灵敏度高、半衰期短和可高效分泌,而成为一种理想的报告基因,广泛应用于体内外研究。我们就Gaussia分泌型萤光素酶的发光原理、荧光特性及其应用等进行简要综述。
- 张秀娟黄海谢佩雯王学军王升启
- 关键词：报告基因荧光特性
- 利用Gaussia萤光素酶建立乳腺癌实时定量检测动物模型
- 2013年
- 目的:建立一种基于分泌型萤光素酶的实时定量检测实验动物体内肿瘤大小的方法。方法:以分泌型Gaussia萤光素酶(Gluc)为报告基因,以嘌呤霉素为筛选基因,将两者用T2A元件连接后克隆到慢病毒载体,包装慢病毒后感染乳腺癌MCF-7细胞,经嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞MCF-7-Gluc,并检测细胞上清中Gluc活性随时间和细胞数目的变化;将MCF-7-Gluc扩大培养后经皮下注射到雌性BALB/c裸鼠前肢腋下,待肿瘤形成后,检测外周血液中Gluc活性与肿瘤体积的相关性。结果:体外实验显示稳定转染细胞MCF-7-Gluc分泌到细胞上清的Gluc活性与时间和细胞数量在一定范围内均呈现良好的线性关系,体内实验显示裸鼠血液中的Gluc活性与肿瘤体积呈正相关。结论:Gluc技术可作为一种灵活、方便、实时定量检测活体动物体内肿瘤大小的有效工具。
- 张秀娟黄海谢佩雯王学军王升启
- 关键词：乳腺癌动物模型
- 靶向c-Raf-1基因的反义核酸抗乙型肝炎病毒活性研究
- 2013年
- 目的:通过体内外实验验证靶向c-Raf-1基因的反义核酸是否具有抑制乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法:设计靶向c-Raf-1基因的反义核酸,并在细胞水平进行体外抗HBV活性筛选,通过RT-PCR检测c-Raf-1基因mRNA水平的变化,通过体内药效学实验进一步验证反义核酸的抗HBV效果。结果:经体外筛选,靶向c-Raf-1基因的反义核酸Raf-3145具有相对明显的抑制HBV表面抗原(HBsAg)的作用,并可剂量依赖性地抑制c-Raf-1基因的表达;体内药效学结果显示,反义核酸Raf-3145在30 mg/kg剂量下对HBsAg的表达具有一定的抑制作用。结论:经体内外活性评价,初步确定了靶向宿主基因c-Raf-1的反义核酸具有一定的抑制HBsAg表达的活性,也进一步验证了c-Raf-1基因可以作为抗HBV药物设计的候选靶点。
- 黄海张秀娟谢佩雯王学军王升启
- 关键词：乙型肝炎病毒反义核酸
- 利用人工miRNA技术建立甲胎蛋白稳定沉默肝癌细胞及沉默效果评价被引量：2
- 2013年
- 目的通过建立靶向甲胎蛋白(AFP)基因的人工microRNA(amiRNA)稳定表达HepG2细胞来评价AFP-amiRNA的沉默效果。方法构建靶向AFP基因的amiRNA慢病毒表达质粒,将其转入HEK293T细胞包装为慢病毒并感染HepG2细胞,嘌呤霉素筛选2周后采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、间接免疫荧光及AFP定量试剂盒检测amiRNA对AFP的抑制效果。结果成功构建靶向AFP的amiRNA慢病毒表达质粒,并建立稳定表达AFP-amiRNA的HepG2细胞,RT-PCR、间接免疫荧光与上清AFP定量结果显示稳转细胞AFP表达水平显著降低。结论高效稳定表达AFP-amiRNA的HepG2细胞株建立成功,并能有效抑制AFP的表达。
- 谢佩雯张秀娟黄海王学军王升启
- 关键词：甲胎蛋白慢病毒HEPG2细胞
