李英英
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪源粪肠球菌Ace蛋白间接ELISA方法的建立与应用被引量：3
- 2014年
- 根据GenBank已发表粪肠球菌Ace基因(AF260879)的核苷酸序列设计1对引物,通过PCR扩增Ace基因保守序列A片段部分序列,将其克隆到pET-32a(+)裁体中,构建了原核表达载体pET-32a(+)-Ace,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,成功表达并纯化了重组蛋白;以此重组蛋白作为抗原建立了检测粪肠球菌Ace抗体的间接ELISA方法。经反复试验,确定该间接ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1mg/L,被检血清稀释度为1∶800,1%BSA为封闭液,血清和二抗的作用时间均为60min,底物TMB反应时间为15min,反应的阳性判定值为0.126。交叉试验、批内重复和批间重复试验证明,所建立的间接ELISA方法具有特异性高、重复性好的特点,可用于粪肠球菌Ace蛋白血清抗体的检测。
- 陈丽颖张祥李晓博李英英邵刘云胡慧王亚宾
- 关键词：粪肠球菌ELISA
- 粪肠球菌毒力基因ace敲除及其对细菌黏附与生物被膜形成的影响
- 肠球菌是一类球形或卵圆形，呈对或短链存在，广泛存在于水、土壤等环境中，是人和动物体胃肠道正常菌群之一。肠球菌对人和动物致病主要通过黏附，侵袭以及组织损伤实现。通过黏附和肠黏膜的上皮细胞以及胞外基质结合起来，占位定植，进而...
- 李英英
- 关键词：肠球菌黏附活性生物膜形成细菌黏附毒力因子
- 文献传递
- 粪肠球菌ace基因缺失突变株的构建
- 2016年
- 本研究旨在构建粪肠球菌胶原蛋白黏附素基因(ace)缺失突变株,为进一步探讨该基因编码的毒力因子Ace的功能奠定基础。利用pK18mobSacB质粒作为基因敲除载体,构建粪肠球菌ace基因重组自杀质粒pK001,通过体内同源重组筛选成功敲除ace基因的突变株,然后对突变株细菌黏附体外培养猪肠上皮细胞IPEC-J2及其细菌生物被膜形成的情况进行了检测。结果显示,同源重组后,经过卡那霉素抗性筛选、PCR及Southern blot鉴定,成功获得了ace基因缺失突变株肠球菌△ace。细菌生长曲线测定试验表明,ace基因敲除对细菌的生长繁殖并无明显影响,但体外生物被膜测定试验显示基因缺失突变株肠球菌△ace的生物被膜形成能力有所降低。本研究证实了毒力因子Ace对猪源粪肠球菌与宿主黏附的重要作用,该基因缺失突变株的构建为进一步的理论研究和疫苗研发奠定基础。
- 陈丽颖李英英刘肖张秀方张留君胡慧王亚宾
- 关键词：粪肠球菌基因敲除生物被膜
- 生鲜猪肉中致病性球菌的双重PCR检测方法的建立与应用被引量：1
- 2014年
- 以金黄色葡萄球菌clfa基因和溶血性链球菌sdy基因为靶基因设计引物.通过对单个基因PCR和多重基因PCR扩增进行特异性、敏感性试验以及优化反应体系,建立了快速检测溶血性链球菌和金黄色葡萄球菌的双重PCR方法.在郑州市不同地区随机抽检126份生鲜猪肉样品,分别进行了双重PCR检测和常规微生物学检验.结果表明,建立的双重PCR方法特异性好,抗干扰能力强,灵敏度可达到102ng·L-1.在126个样品中检测出溶血性链球菌的样品数为7份,检出率为5.55%;检出金黄色葡萄球菌阳性的样品数为8份,检出率为6.35%.
- 李英英邵刘云刘肖张秀方胡慧王亚宾陈丽颖
- 关键词：金黄色葡萄球菌溶血性链球菌猪肉双重PCR
- 毒力因子ace基因敲除突变株的构建及对细菌黏附与生物被膜形成的影响
- 引言 肠球菌是一种能引发家畜家禽等多种动物的致病的革兰氏阳性的兼性厌氧类球菌.近几年,临床有关肠球菌的报道较多,由于临床药物的滥用,粪肠球菌耐药菌株也越来越多,这对养猪业的发展带来巨大损失.肠球菌菌体内部的毒力因子是引发...
- 武二丽李英英张秀芳刘肖王亚宾绍刘云陈丽颖
