袁良玉
- 作品数：11 被引量：11H指数：2
- 供职机构：成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学文化科学经济管理更多>>
- 牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法的建立及验证
- 2014年
- 目的建立牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法,并进行验证。方法建立直接免疫荧光法检测牛血清中牛病毒,对细胞接种浓度和血清浓度、病毒接种量、荧光抗体浓度、染色温度及时间进行优化;对优化的方法进行重复性、特异性、灵敏度验证,并与细胞培养法的检测结果进行比较。结果优化的试验条件为：Vero和BT细胞的接种浓度分别为0.5×105和1.0×105个/ml,血清浓度为5%,病毒接种量为100~300 CCID50,荧光抗体1∶10稀释,4℃染色12 h以上,但不超过24 h。2名实验人员按建立的方对3批牛血清分别进行3次检测,均未检出6种牛病毒;每种病毒仅在相应抗体进行染色时出现荧光;该方法检测6种牛病毒的灵敏度较高。分别采用细胞培养法和直接免疫荧光法检测15批新生牛血清和5批胎牛血清,结果均未检出牛病毒。结论建立的牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法重复性好,特异性强,灵敏度高,操作简便,与细胞培养法的检测结果无差异,可应用于牛血清中牛病毒的检测。
- 袁良玉黄敏潘海龙吕冰凌王静谭昌耀朱文
- 关键词：牛血清直接免疫荧光法
- 一种细胞工厂管阀结构
- 本实用新型公开一种细胞工厂管阀结构，包括夹管阀头，所述夹管阀头内设有供软管穿过的贯通孔，软管活动设置在贯通孔内，夹管阀头的顶部安装有推杆电机，推杆电机的输出轴贯穿夹管阀头的顶壁与软管抵接，通过推杆电机的输出轴的伸出与收回...
- 金鹏李俊明郑亮宋超江莉袁良玉吕钢彭维廖海棠
- 不同细胞进行牛血清中牛源病毒检测的比较试验
- 2014年
- 对不同细胞进行牛血清中牛源病毒检测的比较实验,选出用于牛血清中病毒检测的最适合外源病毒增殖的细胞,从而提高血清中病毒的检出率,以确保用于疫苗生产的牛血清安全可靠。将牛腹泻病毒、牛腺病毒、牛细小病毒、牛副流感病毒、呼肠孤病毒和狂犬病毒接种到培养好的MDBK细胞、VERO细胞、BT细胞中,逐日观察细胞的病变情况,待观察到10%细胞出现病变或者培养7 d后,进行免疫荧光染色,选出适合用于六种病毒增殖的细胞系。结果显示,BT细胞对所有病毒敏感,VERO细胞对BAV、BVDV病毒不敏感,MDBK对REO、BVDV、RV三种病毒不敏感。综合比较后,选择BT细胞为BPIV、BPV、BAV、BVDV的增殖及实验用细胞,VERO细胞为REO、RV的增殖及实验用细胞。
- 袁良玉黄敏户美玲吕冰凌潘海龙孟丽
- 关键词：细胞病毒增殖
- 吸附无细胞百白破联合疫苗中白喉类毒素的质量分析被引量：3
- 2015年
- 目的:对成都生物制品研究所有限责任公司2007-2013年生产的吸附无细胞百白破联合疫苗中白喉类毒素的原液和成品的关键质量属性进行分析。方法:建立了白喉类毒素趋势分析和实验室间对比分析的方法。结果:及时发现了白喉类毒素的质量和生产过程中发生的问题及偏差,确定了产生问题和偏差的影响因素。结论:证明了成都公司白喉类毒素生产和检定过程的稳定性,白喉类毒素的质量是稳定的。
- 曲芙莲晁哲吴杰朱小农袁良玉马霄潘海龙谭亚军
- 关键词：白喉类毒素
- 乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2全基因组序列测定及基因遗传稳定性
- 2017年
- 目的对乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2株进行全基因组序列测定和分析,并观察该生产株在疫苗制备过程中的基因遗传稳定性。方法根据DNA序列数据库(Gen Bank)公布的SA14-14-2株的序列,设计合成7对引物,提取疫苗生产株SA14-14-2及其工作种子批生产的3批原液、3批成品疫苗的病毒RNA,通过RT-PCR方法扩增SA14-14-2株的cDNA片段,分别克隆到pGEM-T载体,转化至大肠埃希菌DH5α中,挑取阳性菌落克隆、鉴定后测定全序列并对序列进行比较分析,观察毒株在传代的过程中病毒滴度的稳定性。结果乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2株基因组全长10 976 bp,编码3 433个氨基酸。3批原液和3批成品疫苗的基因组全长为10 977 bp,比较分析发现,在3'端非编码区10 701处多一个G核苷酸的插入。与DNA序列数据库(Genbank)登录号为D90195的全长序列同源性分别是99.9%、99.9%、99.9%、99.9%、99.8%、99.9%、99.8%,其中E蛋白的同源性均为100%。SA14-14-2生产株的病毒滴度为7.22 lg PFU/mL,原液和成品疫苗的滴度分别为7.32、7.23、7.32、6.86、6.92、6.70 lg PFU/mL。结论乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2基因稳定,具有良好的一致性,为乙型脑炎减毒活疫苗的质量的稳定性提供了可靠依据。
- 黄敏袁良玉吕冰凌潘海龙卓金蓉
- 关键词：乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2株全基因组序列E蛋白
- ELISA检测庆大霉素残留量数据拟合模型的探讨
- 2022年
- 目的探讨ELISA检测乙型脑炎减毒活疫苗中庆大霉素残留量的数据拟合模型,以验证和优化定量检测系统。方法采用商品化庆大霉素残留酶联免疫检测试剂盒对乙型脑炎减毒活疫苗进行庆大霉素残留量检测,通过二次多项式模型、对数线性模型和四参数logistic模型对实验数据进行拟合处理,分析比较各模型的决定系数(R2)、实验点分布、回收率等指标。结果二次多项式模型、对数线性模型和四参数logistic模型的变量显著性检验均有统计学意义(P<0.05),R2均值分别为0.9970、0.9944、0.9993,二次多项式模型和四参数logistic模型拟合优度较好;各拟合模型的标准品实验点在标准曲线两侧的分布都较为均匀,四参数logistic模型最佳,尤其是在中、低浓度范围(0.1~0.9 ng/ml);各拟合模型在0.1~8.1 ng/ml浓度范围的标准品回收率均达到中国药典要求,且差异无统计学意义。结论二次多项式模型、对数线性模型和四参数logistic模型均适用于ELISA检测庆大霉素残留量的数据分析,其中二次多项式模型和四参数logistic模型拟合较好,这对持续优化该项定量检测具有重要指导意义。
- 江莉吕冰凌陈守彬罗静罗珊曾昭萍袁良玉刘菊
- 一种细胞工厂管路系统
- 本实用新型公开一种细胞工厂管路系统，包括主管道，所述主管道一端连通第一储液罐，另一端连通废液桶，主管道靠近第一储液罐一端设有进液泵，靠近废液桶一端设有出液泵，主管道上在进液泵与出液泵之间设有多根支管道，支管道连通细胞工厂...
- 金鹏郑亮李俊明宋超江莉袁良玉吕钢彭维廖海棠
- 乙型脑炎减毒活疫苗中猪圆环病毒PCR检测方法的建立及验证被引量：4
- 2016年
- 目的建立乙型脑炎减毒活疫苗中猪圆环病毒1型(porcine circovirus 1,PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法参照Gen Bank中登录的PCV1(AY193712)及PCV2序列(AY181946)设计引物,以提取的PCV1和PCV2基因组DNA为模板,分别经PCR扩增726 bp的PCV1片段和433 bp的PCV2片段,并对PCR反应中的退火温度、引物浓度、Mg2+浓度参数进行优化。将PCR扩增产物分别与p MD18-T载体连接,连接产物转化感受态大肠埃希菌DH5α,挑取阳性克隆,测序并进行同源性分析。对优化的PCR方法进行灵敏度和特异性验证,并用该方法检测3批乙型脑炎减毒活疫苗工作种子批、4批明胶和10批胰蛋白酶中的PCV1和PCV2。结果确定PCR反应的退火温度为54℃,引物浓度为10μmol/L,Mg2+浓度为10 mmol∕L。扩增的目的基因测序结果与Gen Bank中发布的PCV1及PCV2序列的同源性均为100%。建立的PCR方法最低可检出10 pg的目的基因;该方法只对PCV1和PCV2基因组DNA能扩增出特异性条带。用该方法检测乙型脑炎减毒活疫苗工作种子批、明胶和胰蛋白酶,均未检出PCV1和PCV2。结论成功建立了乙型脑炎减毒活疫苗中PCV1和PCV2的PCR检测方法,该方法具有较高的灵敏度和较强的特异性,可用于乙型脑炎减毒活疫苗工作种子批及两种猪源性原材料的PCV1和PCV2污染检测。
- 黄敏吕冰凌袁良玉易维维吴朔华曲芙莲潘海龙
- 关键词：乙型脑炎减毒活疫苗猪圆环病毒1型猪圆环病毒2型
- 乙型脑炎减毒活疫苗外源病毒因子检查法阳性对照的选择
- 2016年
- 目的 选择合适的阳性对照供乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗外源病毒因子检查法（细胞培养法）使用.方法 细胞病变试验中,将乙脑病毒稀释成不同浓度,分别接种3种细胞,培养2～3 d,观察培养期末细胞病变.病变较典型时对应的病毒浓度即为本试验细胞病变阳性对照浓度.血吸附试验中,将植物血凝素经0.5％鸡、豚鼠红细胞悬液稀释成不同浓度,分别加入3种细胞中,置2～8℃或20～25℃0.5h,观察血吸附情况.血吸附较典型的植物血凝素浓度即为本试验血吸附阳性对照浓度.结果 乙脑病毒浓度为3～4 lg噬斑形成单位/ml时可引起20％～50％细胞病变,植物血凝素浓度为30～40 mg/L时可导致20％～50％细胞血吸附.结论 适当浓度的乙脑病毒和植物血凝素可作为外源病毒因子检查法的试验阳性对照.
- 易维维杨锣袁良玉黄敏汪小磊卓金蓉
- 关键词：微生物污染阳性对照
- 牛血清白蛋白残留量检测试剂盒内部参考品的制备及标定被引量：2
- 2019年
- 目的制备牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)残留量检测试剂盒的内部参考品,用于考察试剂盒的稳定性.方法首先对乙型脑炎减毒活疫苗生产过程中的3种工作液(病毒稀释液、病毒浸泡液、细胞上清液)进行BSA残留量检测.然后选择BSA含量适宜的工作液,适当稀释后制成内部参考品.由2名实验人员同时选取3个不同批号的试剂盒,在不同的日期进行3次检测,对内部参考品进行标定,并根据标定结果确定其赋值范围.分别采用方差分析和t检验对不同批号试剂盒和不同实验人员的检测结果进行比较.标定后连续8个月共20次使用该参考品考察试剂盒的稳定性.结果根据BSA残留量检测结果,选择病毒浸泡液,以疫苗冻干保护剂3倍稀释后制成内部参考品.2名实验人员的108次检测均值为33.46 ng/ml,标准差为2.15 ng/ml,变异系数为6.40%.根据标定结果,确定内部参考品的赋值范围为27.01~39.91 ng/ml.不同批号试剂盒检测结果的差异有统计学意义(F=11.497,P<0.01),不同实验人员检测结果的差异无统计学意义(t=0.500,P>0.05).采用5个批号试剂盒总共对该参考品进行20次检测,BSA残留量均在30.00~36.63 ng/ml范围内,均值为33.14 ng/ml,标准差为1.73 ng/ml,变异系数为5.20%,不同批号试剂盒检测结果的差异无统计学意义(F=0.997,P>0.05).结论制备的BSA残留量检测试剂盒内部参考品可用于试剂盒的稳定性考察.
- 袁良玉江莉周扬巫涛罗静吕冰凌卓金蓉刘菊
- 关键词：血清白蛋白试剂盒
