杨梅
- 作品数：45 被引量：112H指数：7
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局科研项目教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 多房棘球绦虫重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗对小鼠脾细胞凋亡的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:检测多房棘球绦虫重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗对原头蚴攻击小鼠脾细胞凋亡的影响。方法:用重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗分别通过皮下注射和鼻腔粘膜接种免疫BALB/C小鼠8周后,用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击,攻击感染后18周剖杀小鼠,分离脾细胞,用ConA刺激培养16～18h,然后用Annexin V-FITC染色法检测脾细胞凋亡。结果:小鼠脾细胞原液组和ConA刺激组细胞凋亡发生率均显著低于PBS对照组(P<0.05或P<0.01);每个ConA刺激组脾细胞凋亡发生率显著高于相应的原液组(P<0.05或P<0.01);鼻腔粘膜接种组脾细胞凋亡率显著低于皮下注射组(P<0.01)。结论:多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗可抑制感染小鼠脾细胞发生凋亡,增加CD4+T细胞亚群的数量,加强宿主抗多房棘球绦虫感染的保护性免疫反应。
- 杨梅李文桂
- 关键词：多房棘球绦虫脾细胞凋亡
- 多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗的构建及鉴定被引量：20
- 2007年
- 目的构建和鉴定多房棘球绦虫(Em)重组双歧杆菌(Bb)-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗。方法通过PCR扩增EmⅡ/3和Em14-3-3抗原编码基因,然后采用基因拼接法(geneSOEing)剪接EmⅡ/3和Em14-3-3,得到EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3;用电穿孔法将该质粒导入Bb,构建多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗。结果PCR成功扩增出2554bp的EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;双酶切证实EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因成功插入pGEX-1λT中;PCR证实rBb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗构建成功。结论成功构建了多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗,为该疫苗的开发和利用打下了坚实的实验基础。
- 杨梅李文桂朱佑明
- 关键词：多房棘球绦虫
- 细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的动态观察被引量：2
- 2010年
- 目的动态观察细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化。方法将5×108克隆形成单位(CFU)和5×105CFU疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔内接种免疫BALB/c鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周各剖杀4只小鼠,取脾,分离脾细胞,用流式细胞术(FCM)检测免疫小鼠脾CD4+和CD8+T细胞亚群的百分比,同时设双歧杆菌液体培养基(MRS)对照。结果口服灌胃组的脾CD4+T细胞亚群在免疫后4~10周升高,免疫后6周达最高水平,CD8+T细胞亚群无明显变化;鼻腔内接种组脾CD4+T细胞亚群在免疫后4~8周升高,免疫后6周达最高水平,CD8+T细胞亚群无明显变化。结论 CD4+T细胞亚群在细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导的小鼠免疫应答中起关键作用。
- 周必英陈雅棠李文桂杨梅
- 关键词：细粒棘球绦虫重组BB-EG95-EGA31疫苗脾细胞亚群流式细胞术
- 细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后脾细胞增殖的动态观察被引量：1
- 2009年
- 目的动态观察细粒棘球绦虫（Eg）重组双歧杆菌（Bb）-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后脾淋巴细胞增殖的变化。方法将5×108克隆形成单位（CFU）和5×105CFU疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔内接种方法免疫BALB/c鼠,免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周各剖杀4只小鼠,取脾,分离脾细胞,用Eg粗抗原（EgAg）或刀豆素A（ConA）刺激培养,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应,同时设有MRS对照。结果口服灌胃组脾淋巴细胞增殖水平在免疫后410周升高,在免疫后6周达最高水平;鼻腔内接种组脾淋巴细胞增殖水平在免疫后48周升高,在免疫后6周达最高水平。结论细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗可诱导小鼠脾淋巴细胞增殖。
- 周必英陈雅棠李文桂杨梅
- 关键词：细粒棘球绦虫重组BB-EG95-EGA31疫苗脾淋巴细胞增殖MTT法
- 多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ//3-Em14-3-3疫苗构建及其免疫机制研究
- 目的
构建多房棘球绦虫rBb-EmⅡ//3-Em14-3-3疫苗;分析重组质粒pGEX-EmⅡ//3-Em14-3-3在大肠杆菌BL21/(DE3/)中的表达效率;动态观察rBb-EmⅡ//3-Em14-3-3...
- 杨梅
- 关键词：多房棘球绦虫免疫机制
- 文献传递
- 细粒棘球绦虫重组Bb—Eg95疫苗的构建及鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的构建和鉴定细粒棘球绦虫（珞）重组双歧杆菌（rBb）-Eg95疫苗。方法自行设计引物，从细粒棘球蚴包囊中分离原头节，超声粉碎后提取总RNA为模板，通过RT—PCR扩增获得Eg95抗原编码基因．采用BamH I和Eco RI双酶切，定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌（E．coli—Bb）穿梭表达载体pGEX—IλT中．转化E．coli BL21（DE3）感受态细胞，构建重组质粒pGEX—Eg95。抽提质粒进行双酶切鉴定后，电穿孔转化到B6中，构建细粒棘球绦虫rBb—Eg95疫苗，抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果RT—PCR扩增出471bp的Eg95抗原编码基因；重组质粒用双酶切鉴定可切出4947bp的载体片段和471bp的目的基因片段；以具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提的质粒为模板进行PCR扩增可得到471bp的Eg95基因片段。结论成功构建了细粒棘球绦虫rBb—Eg95疫苗，为该疫苗的开发利用奠定了理论基础。
- 周必英陈雅棠李文桂杨梅
- 关键词：细粒棘球绦虫疫苗DNA
- 多房棘球绦虫重组质粒pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3在大肠埃希菌BL21(DE3)表达效率的研究被引量：7
- 2007年
- 目的研究多房棘球绦虫(Em)重组质粒pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达效率。方法通过PCR扩增EmⅡ/3和Em14-3-3抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接EmⅡ/3和Em14-3-3,得到EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;将该融合基因定向克隆于含有谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因的高效原核表达载体pGEX-1λT,经酶切鉴定后以IPTG诱导表达EmⅡ/3-Em14-3-3/GST融合蛋白;SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行鉴定。结果PCR成功扩增出2 554 bp的EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;双酶切证实EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因插入pGEX-1λT中,成功构建了pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3重组质粒;SDS-PAGE及Western blot分析显示重组质粒转化宿主菌在IPTG诱导下高效表达了能被活动性泡球蚴病鼠血清识别的EmⅡ/3-Em14-3-3/GST融合蛋白,分子质量单位119 ku。结论多房棘球绦虫EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因在大肠埃希菌中获得了高效融合表达,表达出的EmⅡ/3-Em14-3-3重组蛋白具有特异的抗原性。
- 杨梅李文桂朱佑明
- 关键词：多房棘球绦虫大肠埃希菌基因表达
- CKD Ⅳ-Ⅴ期的2型糖尿病患者的临床特征分析
- 杨梅杜晓刚
- 多烯磷脂酰胆碱治疗慢性乙型肝炎63例效果观察被引量：3
- 2014年
- 目的观察多烯磷脂酰胆碱治疗慢性乙型肝炎的疗效及安全性。方法观察多烯磷脂酰胆碱治疗慢性乙型肝炎63例治疗前、治疗1个月、停药后2周患者的症状、体征及常规生化指标的变化。结果多烯磷脂酰胆碱治疗1个月后,丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、γ谷氨酰胺转肽酶、总胆红素的水平均明显改善(P<0.05),停药后2周时仍较治疗1个月时有显着改善(P<0.05)。结论经临床研究结果表明,使用多烯磷脂酰胆碱能够对肝组织炎症进行抑制,对肝细胞进行了保护,延迟了肝纤维化的出现,对于治疗慢性乙型肝炎能取得较为满意的疗效,未见明显不良反应。
- 谈理杨洪光杨梅杨晓瑜陈光明
- 关键词：慢性乙型肝炎多烯磷脂酰胆碱
- 细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠脾细胞亚群变化的研究被引量：4
- 2010年
- 目的探讨细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫和Eg原头节攻击后小鼠的囊重抑制率及脾细胞亚群的变化。方法将细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗分别采用皮下注射、肌肉注射、鼻腔内接种和口服灌胃4种途径免疫BALB/c小鼠,免疫后8周每鼠用50个Eg原头节攻击感染,感染后25周剖杀小鼠,分离细粒棘球蚴包囊并称重,计算囊重抑制率;取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T细胞亚群的百分比,同时设有空载体、Bb和MRS对照。结果以上4种疫苗接种组小鼠的囊重抑制率分别为45.33%、41.33%、70.67%和62.67%;疫苗接种组的脾CD4+和CD8+T细胞亚群显著增加,鼻腔内接种和口服免疫组的的CD4+T细胞亚群和CD4+/CD8+比值显著高于皮下和肌肉注射组。结论CD4+和CD8+T细胞亚群在疫苗诱导的保护力中起重要作用。疫苗鼻腔内接种和口服免疫是两种较好的免疫途径。
- 周必英陈雅棠李文桂杨梅
- 关键词：细粒棘球绦虫脾细胞亚群
