孙达权
- 作品数：23 被引量：54H指数：4
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
- 发文基金：贵州省科学技术基金国家自然科学基金贵阳市科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程电子电信更多>>
- 一种具有肿瘤细胞抑制功能的多核苷酸
- 本发明涉及一种具有肿瘤细胞抑制功能的多核苷酸。首次发现来自C/EBPβ基因的3’非翻译区的多核苷酸片段能够独立地行使抑制肿瘤细胞的功能，且这一抑制功能的发挥不需要C/EBPβmRNA的其它部分的参与。本发明的多核苷酸在新...
- 刘定干孙达权王莹
- 文献传递
- 一种具有肿瘤细胞抑制功能的多核苷酸
- 本发明涉及一种具有肿瘤细胞抑制功能的多核苷酸。首次发现来自C/EBPβ基因的3’非翻译区的多核苷酸片段能够独立地行使抑制肿瘤细胞的功能，且这一抑制功能的发挥不需要C/EBPβmRNA的其它部分的参与。本发明的多核苷酸在新...
- 刘定干孙达权王莹
- 文献传递
- 人TIMP-2基因的克隆及其原核表达被引量：1
- 2016年
- 目的构建人TIMP-2重组表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。方法提取人肝癌细胞(Hep G2)总RNA后,经RT-PCR扩增获得目的片段,插入克隆载体pMD18-T;酶切鉴定和测序后将TIMP-2导入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒pGEX-TIMP-2。将重组质粒转化至大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,IPTG诱导融合蛋白表达后用SDS-PAGE电泳检测并用western blot验证(蛋白质印迹法)。结果成功构建原核重组表达载体pGEX-TIMP-2,并在原核宿主BL21中大量表达融合蛋白GST-TIMP-2。结论克隆人TIMP-2基因并在原核生物中大量表达。
- 徐国强王伟孙达权黄小琼陈腾祥
- 关键词：PGEX-4T-1原核表达肝癌
- 一种细菌RNase E截短体及其应用
- 本发明公开了一种细菌RNase E截短体及其应用，细菌RNase E截短体的蛋白序列如SEQ ID NO.1所示，本发明利用RNase E的N端(氨基酸残基1～529)可降解RNA的功能域，体外合成该截短体(REt)的核...
- 孙达权石静余畅陈相屹石松徐莹莹胡桐张钦真
- 文献传递
- 人Spsb1基因慢病毒干扰载体的构建及病毒包装
- 2017年
- 目的:构建人Spsb1基因的shRNA慢病毒干扰载体,为研究该基因在肝癌细胞生长、增殖、转移和浸润中的作用打下前期基础。方法:根据shRNA的设计原则设计一段shRNA和阴性对照shRNA,化学合成DNA双链中的两条单链,通过退火和配对后与慢病毒干扰载体LV-3(p GLVH1/GFP+Puro)连接,阳性克隆子LV3-Spsb1测序鉴定;将LV3-Spsb1和辅助质粒p CMV-delta8.91/p CMV-VSVG共转染HEK293T细胞,转染后24 h在荧光显微镜下观察细胞转染效率;用转染后收集到的病毒液感染肝癌细胞SMMC-7721,荧光显微镜下观察细胞荧光;用1 mg/L嘌呤霉素杀死未感染的细胞,Western blot检测细胞内源性Spsb1基因表达量。结果:测序鉴定证明获得的LV3-Spsb1质粒是所需要的目的慢病毒shRNA干扰载体;通过与辅助质粒共转染HEK293T细胞后,细胞在荧光显微镜下发出明亮的绿色荧光,提示细胞转染效率较高;病毒液感染SMMC-7721后,细胞内出现绿色荧光,证明共转染系统可以成功包装shRNA-Spsb1重组慢病毒颗粒;Western blot结果显示shRNA-Spsb1重组慢病毒能够抑制细胞内Spsb1基因表达,证明shRNA-Spsb1的确可以降低肝癌细胞内源性Spsb1基因表达,可用于后期的基因功能研究。结论:成功构建人Spsb1基因的慢病毒shRNA干扰载体LV3-Spsb1并包装出其慢病毒颗粒。
- 孙达权石松徐莹莹雷霆雯莫晓川王筑婷李红梅徐国强
- 关键词：肝肿瘤脂质体转染
- 核不均一核糖核蛋白C2基因克隆及其对肝癌细胞生长的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨人核不均一核糖核蛋白C2(RNPC2)基因在肝癌细胞生长增殖中的作用。方法:采用RTPCR方法扩增肝癌细胞SMMC-7721 RNA中RNPC2基因编码区的目的片段,构建真核表达载体p EGFP-RNPC2并进行细胞转染;采用G418抗生素筛选稳转细胞,SDS-PAGE和Western blot法测定稳转细胞内RNPC2蛋白表达,CCK-8法测定稳转细胞的增殖能力。结果:从培养的肝癌细胞SMMC-7721中抽提总RNA并反转录成c DNA,通过RNPC特异性引物扩增出RNPC2基因;测序鉴定获得双酶切分离纯化目的片段后,插入真核表达载体p EGFP-C1中,成功构建真核表达载体p EGFP-RNPC2;通过细胞稳定转染、G418药物筛选和荧光显微术获得表达外源融合蛋白GFP-RNPC2的稳转细胞株,并用Western blot验证及CCK-8分析证明GFP-RNPC2稳转细胞的生长增殖速率增加。结论:RNPC2可以促进肝癌细胞生长增殖。
- 孙达权石松徐莹莹雷霆雯莫晓川王筑婷李红梅徐国强
- 关键词：细胞真核表达脂质体转染
- Mmp2基因克隆及其对肝癌细胞的作用被引量：1
- 2019年
- 克隆人基质金属蛋白酶-2基因(Mmp2)编码区并构建重组真核表达载体pEYFP-Mmp2,研究其在肝癌细胞中的作用。以肝癌细胞Hep G2的总RNA为模板,通过RT-PCR获得cDNA,并通过PCR获得Mmp2基因编码区。经TA克隆和测序鉴定将无任何突变的Mmp2基因编码区插入到真核表达载体pEYFPN1中,构建p EYFP-Mmp2重组真核表达载体并进行酶切鉴定和测序鉴定。pEYFP-Mmp2稳定性转染肝癌细胞,经G418筛选获得Mmp2稳转单克隆细胞株,并用Western blotting分析鉴定。用实时无标记细胞增殖分析技术(RTCA)分析Mmp2基因对肝癌细胞生长增殖的作用,细胞划痕愈合实验分析Mmp2基因对肝癌细胞迁移的作用。结果证明成功构建重组真核表达载体pEYFP-Mmp2,Western Blotting证实稳转株中高表达外源融合蛋白MMP2-YFP。细胞增殖和迁移结果表明,Mmp2基因可以抑制肝癌细胞增殖但能够促进肝癌细胞迁移。以上研究表明,Mmp2基因能够促进肝癌细胞迁移。
- 孙达权孙达权周莉莉刘恺烜石松薛殿婷徐国强
- 关键词：肝癌细胞细胞增殖细胞迁移
- 一种细菌源性的抗肿瘤PNPase基因及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种细菌源性的抗肿瘤PNPase基因及其制备方法与应用，抗肿瘤PNPase基因为PNPase基因序列3'末端添加SV40核定位信号序列的核苷酸片段，抗肿瘤PNPase基因DNA序列如SEQ ID NO.1所示...
- 孙达权石静徐国强薛殿婷石松余畅何淼
- 文献传递
- 一种获得高保真且3’末端加“A”产物的PCR法
- 本发明公开了一种获得高保真且3’末端加“A”产物的PCR法，该方法为：首先在PCR反应体系中加入各反应组分与高保真Taq DNA polymerase，然后按如下反应程序进行PCR扩增：(1)95℃预变性2min；(2)...
- 孙达权石静周莉莉张欣胡桐张钦真
- 肝星形细胞分泌的趋化因子CXCL1在肝癌转归中的作用被引量：1
- 2015年
- 该文探讨了人肝星形细胞(hepatic stellate cells,HSC)对肝癌细胞(Hep G2、SMMC-7721)的迁移、侵袭能力和上皮–间质转化(epithelial-msenchymal transition,EMT)的影响及其机制。采用条件培养法培养肝癌细胞,利用细胞划痕和Transwell实验分析肝星形细胞对肝癌细胞的迁移和侵袭作用。Western blot分析肝星形细胞自身及其分泌到培养液中趋化因子CXCL1[chemokine(C-X-C motif)ligand 1]和肝癌细胞的CXCL1受体2—CXCR2(CXCL1 receptor 2)的表达量,以及条件培养下肝癌细胞中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β和Snail的表达变化。激光共聚焦显微术和Western blot检测肝癌细胞上皮标志物E-cadherin、间质标志物N-cadherin和Vimentin的表达变化。结果显示,在HSC中大量表达并分泌趋化因子CXCL1,而肝癌细胞Hep G2、SMMC-7721中高表达CXCR2。肝癌细胞通过条件培养后,细胞形态改变,细胞黏附下降,细胞迁移和侵袭能力增强,上皮标志物E-cadherin蛋白表达下调、间质标志物N-cadherin蛋白和Vimentin蛋白表达上调,PI3K/AKT信号通路中的关键成员PI3K和AKT磷酸化水平上调,p-GSK-3β和转录因子Snail表达上调。在肝癌细胞条件培养下加入CXCR2受体的特异性抑制剂(SB265610)后,肝癌细胞上皮标志物E-cadherin蛋白表达上调、间质标志物N-cadherin蛋白和Vimentin蛋白表达下调,p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β和Snail的表达下调。以上结果说明,肝星形细胞可能通过CXCL1/CXCR2轴活化PI3K/AKT信号通路并最终促进肝癌细胞上皮–间质转化。
- 黄小琼王伟孙达权陈腾祥王晋星一徐国强
- 关键词：肝癌肝星形细胞
