徐国强
- 作品数：12 被引量：34H指数：3
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
- 发文基金：贵州省科学技术基金贵阳市科学技术计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人TIMP-2基因的克隆及其原核表达被引量：1
- 2016年
- 目的构建人TIMP-2重组表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。方法提取人肝癌细胞(Hep G2)总RNA后,经RT-PCR扩增获得目的片段,插入克隆载体pMD18-T;酶切鉴定和测序后将TIMP-2导入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒pGEX-TIMP-2。将重组质粒转化至大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,IPTG诱导融合蛋白表达后用SDS-PAGE电泳检测并用western blot验证(蛋白质印迹法)。结果成功构建原核重组表达载体pGEX-TIMP-2,并在原核宿主BL21中大量表达融合蛋白GST-TIMP-2。结论克隆人TIMP-2基因并在原核生物中大量表达。
- 徐国强王伟孙达权黄小琼陈腾祥
- 关键词：PGEX-4T-1原核表达肝癌
- 人Spsb1基因慢病毒干扰载体的构建及病毒包装
- 2017年
- 目的:构建人Spsb1基因的shRNA慢病毒干扰载体,为研究该基因在肝癌细胞生长、增殖、转移和浸润中的作用打下前期基础。方法:根据shRNA的设计原则设计一段shRNA和阴性对照shRNA,化学合成DNA双链中的两条单链,通过退火和配对后与慢病毒干扰载体LV-3(p GLVH1/GFP+Puro)连接,阳性克隆子LV3-Spsb1测序鉴定;将LV3-Spsb1和辅助质粒p CMV-delta8.91/p CMV-VSVG共转染HEK293T细胞,转染后24 h在荧光显微镜下观察细胞转染效率;用转染后收集到的病毒液感染肝癌细胞SMMC-7721,荧光显微镜下观察细胞荧光;用1 mg/L嘌呤霉素杀死未感染的细胞,Western blot检测细胞内源性Spsb1基因表达量。结果:测序鉴定证明获得的LV3-Spsb1质粒是所需要的目的慢病毒shRNA干扰载体;通过与辅助质粒共转染HEK293T细胞后,细胞在荧光显微镜下发出明亮的绿色荧光,提示细胞转染效率较高;病毒液感染SMMC-7721后,细胞内出现绿色荧光,证明共转染系统可以成功包装shRNA-Spsb1重组慢病毒颗粒;Western blot结果显示shRNA-Spsb1重组慢病毒能够抑制细胞内Spsb1基因表达,证明shRNA-Spsb1的确可以降低肝癌细胞内源性Spsb1基因表达,可用于后期的基因功能研究。结论:成功构建人Spsb1基因的慢病毒shRNA干扰载体LV3-Spsb1并包装出其慢病毒颗粒。
- 孙达权石松徐莹莹雷霆雯莫晓川王筑婷李红梅徐国强
- 关键词：肝肿瘤脂质体转染
- 缺碘性疾病学习记忆低下的神经机制研究
- 杨勤庄宗杰徐国强蔡春程昊马启玲郭兵杨里福
- 该研究组在过去26年研究碘缺乏疾病的基础上，对碘缺乏性学习记忆低下的神经机制进行了一系列的研究。用当时神经电生理的先进技术，对与学习记忆关系最为密切的神经结构——海马、尾的神经元电活动；乙酰胆大事递质、谷氨酸递质对放电活...
- 关键词：
- 关键词：碘缺乏学习记忆神经电生理
- HuR基因的慢病毒干扰载体构建及其病毒包装被引量：2
- 2017年
- 目的构建人HuR基因慢病毒干扰载体和基因敲低细胞株,为揭示C/EBPβ3’UTR RNA与HuR蛋白相互作用抑制肝癌细胞增殖的分子机制奠定基础。方法根据shRNA设计原则设计人HuR基因的shRNA序列,用化学合成法合成shDNA序列,以LV10(pGLVU6/RFP/Puro)为载体骨架,构建慢病毒干扰载体LV10-HuR,并与慢病毒包装辅助载体(pLP1、pLP2和pLP/VSVG)共转染HEK293T细胞,收集病毒液纯化后感染SMMC-7721细胞并用嘌呤霉素杀死未感染的肝癌细胞,荧光显微镜下挑取单克隆红色荧光细胞集落,扩大培养后通过Western blot验证肝癌细胞内源性HuR蛋白表达。结果经DNA测序鉴定,LV10-HuR正是所需的慢病毒干扰载体。通过共转染获得的重组慢病毒颗粒感染的肝癌细胞在荧光显微镜下显示红色荧光。嘌呤霉素筛选和单克隆细胞集落挑取获得显示红色荧光细胞株,western blot证明稳转细胞内源性HuR基因表达下降,证明LV10-HuR慢病毒干扰载体可以抑制肝癌细胞内源性HuR基因表达。结论成功构建慢病毒干扰载体LV10-HuR,包装出有活性的重组慢病毒颗粒,建立HuR基因敲低肝癌细胞株。
- 孙达权罗福丽廖美石松薛殿婷徐莹莹秦龙燕徐国强
- 关键词：RNAI脂质体转染肝癌细胞
- 核不均一核糖核蛋白C2基因克隆及其对肝癌细胞生长的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨人核不均一核糖核蛋白C2(RNPC2)基因在肝癌细胞生长增殖中的作用。方法:采用RTPCR方法扩增肝癌细胞SMMC-7721 RNA中RNPC2基因编码区的目的片段,构建真核表达载体p EGFP-RNPC2并进行细胞转染;采用G418抗生素筛选稳转细胞,SDS-PAGE和Western blot法测定稳转细胞内RNPC2蛋白表达,CCK-8法测定稳转细胞的增殖能力。结果:从培养的肝癌细胞SMMC-7721中抽提总RNA并反转录成c DNA,通过RNPC特异性引物扩增出RNPC2基因;测序鉴定获得双酶切分离纯化目的片段后,插入真核表达载体p EGFP-C1中,成功构建真核表达载体p EGFP-RNPC2;通过细胞稳定转染、G418药物筛选和荧光显微术获得表达外源融合蛋白GFP-RNPC2的稳转细胞株,并用Western blot验证及CCK-8分析证明GFP-RNPC2稳转细胞的生长增殖速率增加。结论:RNPC2可以促进肝癌细胞生长增殖。
- 孙达权石松徐莹莹雷霆雯莫晓川王筑婷李红梅徐国强
- 关键词：细胞真核表达脂质体转染
- 亚砷酸钠对SH-SY5Y细胞生长和3MST表达的影响被引量：4
- 2016年
- 神经母细胞瘤是儿童最常见的恶性肿瘤之一。因其恶性程度高，手术加化疗的方案对于侵润性的神经母细胞瘤效果不佳。砷，俗名砒霜，很早被用来治疗急性粒性白血病。现在发现砷对神经母细胞瘤、胶质瘤，以及来源于肝脏、前列腺、肾脏、子宫颈和胆囊等固体肿瘤也有效［1］。然而，其作用机制尚未完全明了。有报道，肿瘤细胞H2 S合成酶表达上调［2］。那么，砷是否可通过下调H2 S合成酶的表达发挥抗癌作用？本实验采用SH－SY5Y细胞和亚砷酸钠（ NaAsO2）对此问题进行了探讨。
- 聂杨王念徐国强潘际刚
- 关键词：亚砷酸钠神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞
- 一种细菌源性的抗肿瘤PNPase基因及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种细菌源性的抗肿瘤PNPase基因及其制备方法与应用，抗肿瘤PNPase基因为PNPase基因序列3'末端添加SV40核定位信号序列的核苷酸片段，抗肿瘤PNPase基因DNA序列如SEQ ID NO.1所示...
- 孙达权石静徐国强薛殿婷石松余畅何淼
- 文献传递
- 海洛因成瘾对大鼠学习与记忆的影响及中枢机制探讨
- 潘贵书徐国强李淑芳刘家骝孙发
- 该课题研究在建立海洛因成瘾大鼠模型的基础上，观察了海洛因成瘾对大鼠生长发育、痛阈和回避性条件反射活动的影响，特别是利用下班微电极技术，记录大鼠尾核头部神经元单位自发放电活动的改变，以期探讨海洛因成瘾对学习和记忆的影响及其...
- 关键词：
- 关键词：海洛因成瘾
- 人TIMP-2蛋白在肝癌细胞迁移与侵袭中的作用被引量：2
- 2016年
- 目的通过原核表达获取人TIMP-2蛋白,探讨TIMP-2在肝癌细胞迁移及侵袭中的作用。方法以SM M C-7721肝癌细胞总RNA为模板,用RT-PCR技术扩增出人TIM P-2基因c DNA,通过基因重组技术构建原核表达载体p GEX-TIMP-2并在大肠杆菌Origami(DE3)中诱导表达人TIMP-2重组蛋白。采用亲和层析法纯化表达产物,并用Western blotting鉴定;用RNAi技术和添加外源蛋白方法分析TIMP-2蛋白对肝癌细胞迁移和侵袭的作用;荧光定量PCR、Western blotting检测siRNA-TIMP-2转染细胞后肝癌细胞内源性TIMP-2的mRNA及蛋白表达水平。结果外源添加的TIMP-2蛋白抑制肝癌细胞迁移及侵袭的能力,而RNAi技术能抑制内源的TIMP-2蛋白增强肝癌细胞迁移及侵袭的能力;肝星状细胞的条件培养液能够促进肝癌细胞迁移和侵袭,而这种作用能够被TIMP-2蛋白抑制。结论肝癌微环境中的TIMP-2蛋白水平与肝癌细胞的迁移和浸润密切相关。
- 王伟曹煜姗孙达权黄小琼徐国强
- 关键词：肝细胞癌
- PI3K/Akt通路在肝癌细胞迁移和侵袭中的作用被引量：17
- 2018年
- 目的探讨PI3K/Akt信号通路中3-磷酸肌醇-依赖性激酶1(PDK1)、10号染色体上的磷酸酶和张力蛋白同源蛋白(PTEN)、蛋白激酶B(Akt)表达对肝癌细胞迁移和侵袭的作用。方法常规培养肝癌SMMC-7721细胞,将细胞分为对照组、PDK1抑制剂组、Akt激动剂组、PTEN抑制剂组。对照组加入RPMI-1640培养基,PDK1抑制剂组加入PDK1的特异性抑制剂OSU03012,Akt激动剂组加入Akt特异性激动剂SC79,PTEN抑制剂组加入PTEN特异性抑制剂VO-Ohpic。采用细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测PDK1基因相关蛋白PDK1、p-PDK1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及PTEN、Akt蛋白表达。结果与对照组比较,PDK1抑制剂组细胞迁移率减少,Akt激动剂组和PTEN抑制剂组细胞迁移率增加(P<0.05或<0.01)。与对照组比较,PDK1抑制剂组穿膜细胞数减少,Akt激动剂组和PTEN抑制剂组穿膜细胞数增加(P均<0.01)。与对照组比较,PDK1抑制剂组PDK1、p-PDK1表达降低,E-cadherin表达升高,Vimentin表达降低;Akt激动剂组Akt表达升高,PTEN表达降低;PTEN抑制剂组PTEN表达降低,Akt表达升高(P<0.05或<0.01)。结论抑制PI3K/Akt信号通路中PDK1表达可以抑制肝癌细胞迁移和侵袭,促进Akt和抑制PTEN表达可以促进肝癌细胞迁移和侵袭。
- 曹煜姗孙达权夏庆彭明兵徐国强
