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大肠杆菌表达几丁质酶对不同底物的酶学性质及其降解产物分析被引量：3: 2015年; 采用重组大肠杆菌大量表达几丁质酶LICHI18A,经Ni-NTA柱纯化后,对不同底物的酶学性质进行了研究,以Lineweaver-Burk双倒数作图法测定米氏常数,采用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对降解产物进行分析。结果表明,该几丁质酶分子量为54 k Da,对水溶性壳聚糖的Km和Vmax分别为4.04 mg/m L和222.2μmol/(min·mg);对水溶性壳聚糖的反应最适温度和p H分别为60℃和7.0;对胶体几丁质的Km和Vmax分别为2.913 mg/m L和2.836μmol/(min·mg),反应最适温度和p H分别为40℃和5.0。Ni2+、Mg2+、Ca2+、Zn2+对胶体几丁质的降解有明显的促进作用,但对水溶性壳聚糖的降解没有促进作用,且Ni2+和Zn2+有一定的抑制作用。Tween-80对降解胶体几丁质起一定的促进作用,而不同浓度的SDS有抑制酶活作用,且浓度越高抑制作用越强。TLC和HPLC分析结果表明,该酶降解胶体几丁质的产物主要为几丁二糖和单糖,而水溶性壳聚糖的降解产物较为复杂,主要有单糖、几丁二糖和甲壳寡糖。; 吕梦圆石佳仙夏祥林建国蔡俊胡瑛; 关键词：几丁质酶大肠杆菌纯化酶学性质酶解产物

产壳聚糖酶/甲壳素酶菌株的选育、发酵及壳聚糖酶分离纯化与酶学性质研究: 甲壳素是N-乙酰氨基葡萄糖残基经过β-1,4-糖苷键聚合而成的天然多糖，是自然界中仅次于纤维素的第二大可再生资源，也是许多真菌细胞壁的重要组成部分。壳聚糖是甲壳素部分或者全部脱乙酰化的产物，同时也是自然界中唯一大量存在的...; 夏祥; 关键词：壳聚糖酶甲壳素酶菌株选育分离纯化酶学性质; 文献传递

大肠杆菌重组几丁质酶的表达、包涵体复性及酶学性质研究被引量：6: 2015年; 通过研究重组几丁质酶在大肠杆菌表达系统中诱导表达的浓度、时间和温度,获得表达的最佳条件。表达产物除了可溶性目的蛋白以外,仍存在于包涵体中。采用透析复性和Ni-NTA亲和层析柱上复性两种方法对包涵体中的目的蛋白进行复性,并比较对目的蛋白产率和比酶活的影响。并考察了亲和层析柱上复性时的上样量、洗脱速率和温度对酶活的影响。结果发现,表达的几丁质酶可以采用透析和亲和层析柱上复性,亲和层析柱上复性的比酶活为1347.7 U/mg,明显高于透析复性,但产率明显低于透析复性。对1 m L的Ni-NTA亲和层析柱,较低浓度的蛋白复性液在0.4 m L·min-1洗脱速率下,降低上样量和温度,可以提高复性效率。复性后的几丁质酶对荧光底物具有较高活性,反应的最适温度为37℃,最适p H为3.8。; 吕梦圆吕永玲夏祥林建国王常高蔡俊胡瑛; 关键词：几丁质酶重组蛋白包涵体复性

产甲壳素酶菌株的筛选与诱变被引量：1: 2015年; 以胶体甲壳素作为惟一碳源,从自然界微生物中筛选并诱导到一株产甲壳素酶活性较高的菌株,经16S r DNA鉴定为Aeromonas sp.。并以该菌株作为出发菌株,经过一次紫外诱变,酶活是初筛菌株的1.48倍。再经过二次紫外诱变或者紫外-Li Cl复合诱变,酶活分别是初筛菌株的3.16和3.87倍,最高酶活达到3.48 U/m L。最后通过连续传代培养,确定了菌株HMX-16经过紫外和复合诱变后突变性状稳定性良好。; 夏祥吕梦圆罗玲蔡俊胡瑛; 关键词：甲壳素酶紫外诱变

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夏祥