马猛
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
- 供职机构：广州医科大学更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目广东省科技计划工业攻关项目广州市卫生局医药卫生科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- NT-3基因修饰的MSCs脑内移植对颞叶癫痫大鼠作用的研究被引量：1
- 2017年
- 目的观察神经营养素-3(Neurotrophin 3,NT-3)基因修饰的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)脑内移植对颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)的作用及其对大鼠海马苔藓纤维发芽(mossy fiber sprouting,MFS)的影响。方法将构建成功的LV-GFP-NT-3转染大鼠骨髓MSCs,检测转染后MSCs内NT-3的表达;建立海人酸(Kainic acid,KA)TLE大鼠模型;将NT-3基因修饰的MSCs移植至海人酸TLE大鼠侧脑室模型后,观察其对TLE大鼠行为学、脑电图的影响,并用Timm组织化学染色法观察海马结构MFS;Western blot检测细胞移植后大鼠海马组织中NT-3的表达。结果 LV-GFP-NT-3转染细胞后,MSCs中能够正确过表达NT-3;细胞移植后NT-3-MSCs组TLE大鼠的发作次数减少,发作级别减低;脑电图结果表明TLE发作痫波减少;NT-3-MSCs组大鼠海马CA3区内分子层及始层未见到或极少见到Timm染色颗粒,Timm染色颗粒较对照组和LV-MSCs组显著减少;Western blot检测结果显示NT-3-MSCs组大鼠海马组织中NT-3含量明显增高。结论 NT-3基因修饰的MSCs脑内移植对颞叶癫痫大鼠有明显的抑制作用。
- 王林杰谢柳马猛何嫣杜展鑫潘晓佳朱晓琴雷水生
- 关键词：神经营养素-3颞叶癫痫慢病毒载体
- 白细胞介素-1β对水通道蛋白4表达的影响及其在癫痫发作中的作用被引量：1
- 2016年
- 目的:观察白细胞介素-1β(IL-1β)和戊四氮致急性癫痫大鼠大脑海马水通道蛋白4(AQP4)表达变化,探讨IL-1β调节AQP4表达参与癫痫发病的作用机制。方法:将大鼠随机分为5组,对照组、IL-1β组、戊四氮组、IL-1ra(IL-1受体拮抗剂)+戊四氮组、地塞米松+戊四氮组。记录60 min内各组大鼠痫性发作级别。免疫组织化学、RT-q PCR检测6、12、24、36 h海马AQP4的表达。结果:IL-1β组和戊四氮组重度癫痫发作;地塞米松+戊四氮组和对照组无明显发作;IL-1ra+戊四氮组较戊四氮组发作减轻(P<0.05)。免疫组化和荧光定量PCR显示:戊四氮组与对照组相比12 h后AQP4表达明显升高(P<0.05),发作后24 h达到高峰(P<0.001),IL-1ra+戊四氮组12～36 h的AQP4表达都低于戊四氮组同时间点(P<0.05),地塞米松+戊四氮组与对照组相比无统计学意义(P>0.05)。结论:促炎因子IL-1β可能通过上调海马AQP4表达,影响脑内局部水平衡,增加细胞外兴奋性氨基酸或离子的浓度,促进神经元放电。
- 邓镇余涵赵元淑祁桂林马猛罗亚楠朱晓琴雷水生
- 关键词：癫痫水通道蛋白4白细胞介素-1Β白细胞介素-1受体拮抗剂地塞米松
- 乙酰唑胺对戊四氮致慢性癫痫大鼠海马水通道蛋白4表达的影响被引量：3
- 2015年
- 目的观察乙酰唑胺(acetazolamide,AZA)对戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)致慢性癫痫大鼠发作及海马水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)表达的影响,探讨其抗癫痫的可能机制。方法将实验大鼠随机分为4组:对照组(每日腹腔注射生理盐水)、致痫组[每日腹腔注射亚惊厥剂量PTZ 35mg/(kg·d)建立慢性癫痫大鼠模型]、乙酰唑胺干预组[每日先腹腔注射AZA 35mg/(kg·d)预处理,30min后再腹腔注射亚惊厥剂量PTZ]和乙酰唑胺对照组[每日单纯腹腔注射AZA]。各组采用以上注射方式连续给药28d,每次注射后1h内记录各组大鼠癫痫发作级别,统计各组每天平均发作级别,观察乙酰唑胺对大鼠慢性癫痫发作的影响;最后1次给药1d后,脑电图记录各组大鼠脑电的改变,免疫组化观察AQP4在海马内分布,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测AQP4mRNA和蛋白的表达。结果对照组和乙酰唑胺对照组无明显癫痫发作,乙酰唑胺干预组潜伏期为(23.5±2.4)d,而致痫组潜伏期为(18.2±1.7)d,乙酰唑胺干预可明显延长慢性癫痫大鼠点燃的潜伏期(P<0.05);脑电图结果对照组和乙酰唑胺对照组无明显痫样波,致痫组记录到棘波、尖波等痫样波,而乙酰唑胺干预组痫样波明显减弱;免疫组化结果显示:AQP4主要分布在海马CA3区血管周围;RT-qPCR和Western blot结果显示慢性致痫组AQP4 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05或P<0.01),乙酰唑胺干预组AQP4表达降低但仍高于对照组(P<0.05),乙酰唑胺对照组AQP4表达较对照组明显降低(P<0.05)。结论乙酰唑胺能够抑制癫痫的发作,延长慢性点燃潜伏期,并且抑制AQP4的表达,其作用机制可能是与乙酰唑胺抑制AQP4表达,改善慢性癫痫状态下脑内水和离子平衡有关。
- 陈丽余涵周玉波马猛王林杰胡景鑫雷水生朱晓琴
- 关键词：慢性癫痫水通道蛋白4乙酰唑胺戊四氮
- TGF-β_1对人输尿管平滑肌细胞增殖和迁移及α-SMA表达的影响被引量：3
- 2015年
- 目的探讨外源性转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)对人输尿管平滑肌细胞(USMCs)生物学功能的影响。方法取正常的输尿管平滑肌细胞分为4组:1对照组;2TGF-β_1组(10μg/L TGF-β_1处理);3TGF-β_1拮抗剂组(30μmol/L SB-431542处理);4TGF-β_1+TGF-β_1拮抗剂组(10μg/L TGF-β_1+30μmol/L SB-431542处理)。MTT法检测各组输尿管平滑肌细胞在处理0、24、48、72h的增殖情况;细胞划痕实验检测各组输尿管平滑肌细胞处理24h、48h时的迁移能力;各组细胞处理48h后分别应用RT-qPCR和Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化。结果MTT实验显示与对照组相比,TGF-β_1处理24h后USMCs增殖率增加(P<0.05),处理48h、72h后增殖最明显(P<0.01),拮抗剂组细胞生长明显受抑制(P<0.05或P<0.01),TGF-β_1联合SB-431542共同处理细胞后其增殖活性与对照组相比无明显差异;细胞划痕实验显示TGF-β_1组与对照组相比,各时间点细胞迁移距离明显增加(P<0.01),拮抗剂组24h和48h细胞迁移距离与对照组相比明显减小(P<0.01),TGF-β_1联合拮抗剂处理组迁移距离与对照组相比差异无统计学意义;RT-qPCR和Western blot结果显示:与对照组相比,经TGF-β_1处理组α-SMA mRNA和蛋白的表达明显增加(均P<0.01),TGF-β_1拮抗剂则明显下调α-SMA mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。结论 TGF-β_1能够明显上调输尿管平滑肌细胞中α-SMA mRNA和蛋白的表达,并能增强细胞增殖和迁移的生物活性,拮抗TGF-β_1信号路径可明显对α-SMA的表达及细胞增殖和迁移产生抑制效应。
- 徐桂彬余涵陈丽罗亚楠马猛王林杰何永忠彭晔李逊朱晓琴
- 关键词：Α-平滑肌肌动蛋白迁移
- 含GDNF基因真核载体的构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达
- 2015年
- 目的构建含GDNF基因真核表达载体,并分析其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达。方法从SD大鼠脑中提取总RNA,采用逆转录PCR法扩增GDNF基因,测序鉴定后将GDNF基因克隆入p CDNA3.1中,构建真核表达载体p CDNA3.1-GDNF;原代培养大鼠间充质干细胞,以脂质体介导法将构建好的真核表达载体p CDNA3.1-GDNF转染至间充质干细胞;RT-PCR、细胞免疫荧光、Western blot检测GDNF在间充质干细胞中的表达。结果扩增的大鼠GDNF基因序列与Gen Bbank的参考序列完全一致,GDNF基因已经正确克隆到真核表达载体p CDNA3.1中;转染骨髓间充质干细胞4 h后,GDNF的mRNA和蛋白能在细胞中正确表达。结论 p CDNA3.1-GDNF真核表达载体构建成功,并能在大鼠间充质干细胞中正确表达,这为下一步研究携带GDNF的骨髓间充质干细胞治疗癫痫奠定了实验基础。
- 马猛陈丽赵元淑邓镇王林杰冯雷罗亚楠雷水生朱晓琴
- 关键词：GDNF骨髓间充质干细胞癫痫
- 乙酰唑胺对慢性癫痫大鼠海马NF-κB p65、IL-1β、IL-6及TNF-α表达的影响被引量：7
- 2015年
- 目的观察戊四氮(Pentylenetetrazole,PTZ)致慢性癫痫大鼠发作以及应用AQP4抑制剂乙酰唑胺(Acetazolamide,AZA)干预后对海马核因子-κB p65(NF-κB p65)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达影响,探讨AQP4与炎症因子表达间的关系及乙酰唑胺抑制癫痫发作的可能机制。方法将50只健康成年SD大鼠随机分为对照组(每日腹腔注射生理盐水)、致痫组(每日腹腔注射亚惊厥剂量PTZ35 mg/(kg·d)建立慢性癫痫大鼠模型)、乙酰唑胺干预组[每日先腹腔注射AZA35 mg/(kg·d)预处理,30 min后再腹腔注射亚惊厥剂量PTZ]。连续注射28 d,每天记录大鼠的发作级别。最后一次给药1 d后处死所有大鼠以备实验,RT-q PCR和ELISA检测大鼠海马中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达;Western blot检测海马内NF-κB p65表达。结果对照组无明显癫痫发作,RT-q PCR和ELISA检测结果显示致痫组IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著高于对照组(P<0.001);乙酰唑胺干预组的三者水平明显低于致痫组(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05);Western blot结果显示致痫组海马组织NF-κB p65的表达与对照组相比显著升高(P<0.01),而乙酰唑胺干预组表达量与致痫组相比明显下降(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05)。结论乙酰唑胺抑制癫痫的发作的作用机制可能与乙酰唑胺抑制星形胶质细胞膜上AQP4的表达、改善星形胶质细胞水肿损伤状况、下调炎性因子表达有关。
- 余涵陈丽马猛周玉波王林杰罗亚楠朱晓琴雷水生
- 关键词：慢性癫痫乙酰唑胺水通道蛋白4NF-ΚBP65
- 大鼠GAD65基因慢病毒载体的构建及其在MSCs中的表达被引量：1
- 2015年
- 目的构建谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65,GAD65)重组慢病毒表达载体,感染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)并进行鉴定。方法 PCR法扩增GAD65基因,构建LV5-GFP-GAD65慢病毒载体;与包装质粒共转染293T细胞包装病毒;将慢病毒感染大鼠MSCs,荧光显微镜鉴定转染率,Western blot检测GAD65的表达。结果双酶切及测序结果表明LV5-GFP-GAD65慢病毒载体构建成功;包装病毒产生的病毒液滴度为5×107TU/ml;慢病毒感染大鼠MSCs的转染率高于90%,Western blot结果显示GAD65蛋白表达比对照组明显升高。结论 GAD65重组慢病毒载体构建成功,包装得到高浓度病毒液,感染大鼠MSCs能稳定过表达GAD65蛋白,为进一步探索侧脑室注射基因化的MSCs治疗癫痫奠定实验基础。
- 赵元淑邓镇陈丽周玉波马猛罗亚楠胡景鑫雷水生朱晓琴
- 关键词：慢病毒GAD65间充质干细胞癫痫
- 硫化氢对大鼠癫痫模型的抑制作用及机制研究
- 目的： 首先构建戊四氮（Pentylenetetrazole，PTZ）诱导的大鼠癫痫持续状态（status epilepticus,SE）模型，研究在SE模型后72 h内胱硫醚-β合成酶（Cystathionineβ-...
- 马猛
- 关键词：癫痫硫化氢炎症因子胱硫醚-Β合成酶P65蛋白
- 文献传递
- NT-3真核过表达载体的构建及其在大鼠MSCs中的表达
- 2016年
- 目的构建p CDNA3.1-NT-3真核过表达载体,鉴定其在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达。方法从SD大鼠脑中提取并扩增NT-3基因,并将其克隆入p CDNA3.1中,构建p CDNA3.1-NT-3真核载体;原代培养大鼠间充质干细胞,将p CDNA3.1-NT-3通过Lip2000介导转染至大鼠MSCs;用RT-PCR、免疫荧光法、Western blot法检测NT-3在MSCs中的表达。结果扩增的NT-3基因序列正确,并成功连接到真核载体p CDNA3.1中;转染MSCs后,RT-PCR、免疫荧光、Western blot结果显示MSCs中过表达NT-3的m RNA和蛋白。结论 p CDNA3.1-NT-3真核载体构建成功,转染MSCs后能在细胞中正确过表达,为进一步NT-3基因修饰的MSCs治疗癫痫的研究奠定了实验基础。
- 赵元淑邓镇马猛罗亚楠朱晓琴雷水生
- 关键词：NT-3骨髓间充质干细胞癫痫
