殷悦
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- ERK5信号通路调控小鼠巨噬细胞破骨分化的实验研究
- 2015年
- [目的]探讨ERK5信号通路在RANKL诱导小鼠巨噬细胞分化为破骨细胞过程中的作用。[方法]体外构建RANKL诱导小鼠巨噬细胞分化成破骨细胞的实验模型,采用western blot检测不同时间点p-erk5表达量(0、15、30min,1、2、6 h);免疫荧光观察p-erk5蛋白向细胞核内转位情况;CCK-8确定药物组添加ERK 5抑制剂BIX02189的不同浓度;不同浓度BIX02189(0.3μmol/L、1.0μmol/L、3.0μmol/L)与RANKL诱导的RAW 264.7细胞共培养6 d,采用PCR检测TRAP的基因表达量。[结果]Western blot检测结果:加入RANKL 15 min后pERK5表达量开始增加,30 min后达到高峰(P<0.01),之后慢慢下降,且磷酸化的ERK5蛋白逐渐开始出现向细胞核内转位;CCK-8检测细胞增殖率结果显示,浓度在3.0μmol/L以下的BIX02189对小鼠巨噬细胞正常增殖不构成影响;不同浓度的BIX02189对破骨细胞特异性基因TRAP表达量,较对照组有较明显抑制作用,且TRAP的基因表达随着浓度的增加有不同程度的减少(P<0.05)。[结论]RANKL能够激活RAW264.7细胞的ERK5信号通路,且抑制ERK5通路后,能够一定程度减少巨噬细胞向破骨细胞分化。
- 殷悦郭开今李超吴继彬张新珠
- 关键词：ERK5核因子-ΚB受体活化因子配体小鼠巨噬细胞
- Fisetin经c－Fos／NFATc1信号通路抑制小鼠巨噬细胞分化为破骨细胞的研究
- 2015年
- 目的：探讨Fisetin阻断c－Fos／NFATc1信号通路对钛颗粒诱导小鼠巨噬细胞向破骨细胞分化的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264．7，根据处理条件不同分为5组：A组（空白对照组）、B组（钛颗粒对照组）、C组（1．25μmol／L Fisetin＋钛颗粒）、D组（2．5μmol／L Fisetin＋钛颗粒）、E组（5μmol／L Fisetin＋钛颗粒）。采用CCK－8法检测各组RAW264．7细胞增殖活性。培养6天后，抗酒石酸酸性磷酸酶（ TRAP）染色检测各组细胞破骨细胞（细胞核≥3）数目，免疫印迹法检测各组细胞中c－Fos／NFATcl蛋白表达，RT－PCR法检测c－Fos／NFATc1的基因表达。结果 CCK－8法检测结果显示各组RAW264．7细胞增殖能力差异无统计学意义（P＞0．05）。 TRAP染色结果显示各组细胞均有TRAP阳性多核细胞生成，B组TRAP阳性多核细胞数目最高，C、D、E组呈现逐渐减少趋势，A组最少。 RT－PCR和Western blot检测表明，B组c－Fos／NFATc1表达最高，C、D、E组表达逐渐减少，与B组比较差异具有统计学意义（ P＜0．05）。结论 Fisetin可通过c－Fos／NFATc1信号通路抑制钛颗粒作用下小鼠巨噬细胞向破骨细胞的分化，其抑制程度与Fisetin药物浓度有关。
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- 关键词：小鼠巨噬细胞抗酒石酸酸性磷酸酶C-FOS
