王瑞瑶
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：内蒙古农业大学生命科学学院更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 双峰驼clusterin基因的克隆及功能分析
- 2015年
- 为了研究双峰驼clusterin基因真核表达载体的构建及其生理功能,试验采用深圳华大公司提供的clusterin基因片段序列设计PCR引物,以双峰驼肾脏RNA反转录获得的cDNA为模板进行PCR,结合RACE技术获得基因编码序列,将测序结果正确的序列连入pEGFP-N1框架载体以构建真核表达载体,转染海拉细胞。结果表明:PCR产物及酶切片段大小符合预期结果,测序结果与相应寡核苷酸序列一致并成功转染海拉细胞。说明双峰驼clusterin基因真核表达载体构建成功,并成功将骆驼clusterin基因转入海拉细胞,可用于进一步研究clusterin基因在体内的生理功能。
- 苏晓田邢燕平王瑞瑶王亚娟闫涛李浩天周欢敏
- 关键词：双峰驼CLUSTERINPEGFP-N1转染
- 可定点整合的无筛选标记拟蛛丝蛋白基因表达载体的构建与鉴定
- 2015年
- 为了构建可定点整合的无筛选标记的拟蛛丝蛋白基因表达载体,试验以p EGFP-N1为骨架载体,并采用PCR技术分别添加Loxp和att B片段,利用无缝克隆法将拟蛛丝蛋白基因(2s)连入质粒,经过转化、阳性克隆筛选、酶切及DNA测序鉴定。结果表明:PCR产物及酶切片段大小符合预期结果,测序结果与相应寡核苷酸序列一致。说明试验成功构建了可定点整合的无筛选标记拟蛛丝蛋白基因表达载体p EGFP-N1-2s,可用于无筛选标记的转基因供体细胞的构建。
- 王瑞瑶闫涛朱和平周欢敏
- 关键词：CRE/LOXP系统PEGFP-N1
- 无标记转Fat-1基因真核表达载体的构建及转基因绵羊细胞系的建立
- 2016年
- 为了建立无筛选标记基因的转Fat-1基因绵羊细胞系,本研究将PCR克隆得到的Fat-1基因,合成的attB、Loxp序列并克隆入pN1-EGFP框架载体,得到可删除筛选标记基因的pEGFP-N1-Fat-1真核表达载体。体外转录合成phiC31整合酶mRNA并与线性化的pEGFP-N1-Fat-1载体共转染绵羊胎儿皮肤成纤维细胞,G418筛选得到表达绿色荧光的单克隆,再利用pET-28a-His-NLS-TAT-Cre质粒诱导Cre重组蛋白表达,将纯化后的Cre穿膜肽转导表达绿色荧光的单克隆细胞,将荧光淬灭的细胞系扩繁,提取基因组DNA,进行PCR及测序鉴定,得到无标记转Fat-1基因绵羊胎儿皮肤成纤维细胞系,为生产无筛选标记基因的转基因绵羊奠定基础。
- 阿力玛朱和平王瑞瑶闫涛苏小虎李璐王丙萍那顺温都乐齐贵春周欢敏
- 关键词：真核表达载体
- 可定点整合的无筛选标记LacS基因表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2015年
- 试验旨在构建一个能够定点整合且无筛选标记基因的半乳糖苷酶基因LacS表达载体。本研究以pEGFP-N1质粒为原始框架,通过PCR及限制性酶切位点在pEGFP-N1质粒的标记基因两端添加两个同向LoxP序列,在多克隆位点上游添加能够定点整合的attB序列,最后再将目的基因BC promoter-LacS-PolyA通过限制性酶切位点插入多克隆位点。每一步都进行PCR、酶切及测序鉴定。PCR产物及酶切片段大小符合预期结果,测序结果也与相应寡核苷酸序列一致,证明各个基因片段正确地连接到载体相应位置。本试验成功构建了可定点整合的无筛选标记半乳糖苷酶基因表达载体pEGFP-N1-LacS。
- 闫涛王瑞瑶朱和平苏晓田王亚娟李浩天周欢敏
