陈民佳
- 作品数：12 被引量：40H指数：4
- 供职机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划烧伤与复合伤国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生环境科学与工程更多>>
- SDF-1/CXCR4信号通路介导的低浓度过氧化氢对间充质干细胞促增殖、迁移作用及其机制被引量：3
- 2018年
- 该文探讨了低浓度过氧化氢(H_2O_2)对骨髓间充质干细胞增殖、迁移及其相关信号通路的影响,阐明了低浓度H_2O_2发挥生物学效应的分子机制,为临床应用提供了可靠的实验证据。通过差速贴壁分离培养小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)。流式细胞术鉴定第三代BMSCs表面标志物。采用随机数字表法分组,以不同低浓度H_2O_2(0、25、50、100、150、200μmol/L)处理BMSCs 24 h,应用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测干细胞表面标志物以及凋亡率,划痕实验和Transwell实验检测H_2O_2对细胞迁移能力的影响。Western blot检测细胞老化相关蛋白质p16和Cyclin D1、基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)与其受体CXCR4(CXC chomekine receptor 4)的表达以及相关下游信号通路PI3K/AKT/mTOR关键蛋白质的表达。流式细胞术检测结果显示,BMSCs细胞表面分化抗原CD29、CD44为阳性,CD34、CD45为阴性。MTT检测结果显示,与对照组相比,25和50μmol/L H_2O_2能有效促进BMSCs增殖(P<0.05)。划痕实验和Transwell实验检结果显示,50μmol/L H_2O_2处理细胞能促进其迁移能力。流式细胞术检测显示,25、50和100μmol/L H_2O_2对干细胞凋亡无影响,150和200μmol/L H_2O_2则显著促进细胞凋亡(P<0.01);25和50μmol/L低浓度H_2O_2处理干细胞能抑制老化相关蛋白质p16表达下降(P<0.05,P<0.01),相反,细胞周期蛋白Cyclin D1表达则显著升高(P<0.05,P<0.01),H_2O_2为200μmol/L时,p16表达上调(P<0.01),而Cyclin D1下调(P<0.01);同样,25~100μmol/L H_2O_2能增强细胞SDF-1和CXCR4的表达(P<0.05)以及上调下游信号通路关键蛋白质PI3K、AKT、mTOR的磷酸化水平(P<0.05)。结果表明,低浓H_2O_2度通过活化干细胞SDF-1/CXCR4信号轴,活化其下游PI3K/Akt/mTOR信号通路,促进干细胞增殖和迁移。
- 陈民佳张娅安天琛邱伟陈科锦杜鹃孙剑会文大林蒋建新黄宏
- 关键词：间充质干细胞过氧化氢增殖SDF-1/CXCR4PI3K/AKT/MTOR
- 干细胞预处理及其保护机制的研究进展被引量：1
- 2017年
- 干细胞移植治疗为临床疾病治疗开辟了新的天地,极具前景和希望,并取得了不错进展,然而,目前这一技术的应用却面临两大瓶颈问题:移植干细胞靶向性差和到达损伤部位存活率低下,严重阻碍了这一技术在临床广泛应用。而干细胞预处理为解决这两大难题带来了新希望,研究证实通过预处理干细胞可以明显改善其迁移、归巢和存活能力,为此,本文将对其相关研究作一综述。
- 黄宏邱伟陈民佳张娅安天琛朱明朱方强
- 关键词：干细胞预处理
- 大鼠急性肺损伤的肺功能及病理变化特点被引量：5
- 2018年
- 目的探讨无创性气管内注射脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）肺功能及其病理变化特点，为进一步研究ALI机制提供实验依据。方法将25只SD雄性大鼠按随机数字表法分为对照组（5只）、ALI组（20只）。ACI组采用气管内注射LPS（4．5mg／kg）制作大鼠ALI模型。对照组注射150μl等渗盐水。分别在伤后12，24，48，72h，应用Buxco小动物用力肺功能检测系统进行肺功能检测，包括动态肺顺应性（Cdyn）、用力肺活量（FVC）、功能残气量（FRC）、准静态顺应性（Cchord）、第100毫秒呼气容积（FEV100）、气道阻力（RI）；同时收集大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF），检测总蛋白含量和肿瘤坏死因子（TNF-α）浓度，并观察肺脏大体变化和HE染色肺组织病理学改变。结果与对照组比较，ALI组Cdyn、FVC、FRC及FEV100在伤后各时相点均显著降低（P〈0．05或0．01）；而R1在伤后24h和48h明显升高（P〈0．01）；Cchord在各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。伤后12—72h，ALI组BALF的总蛋白含量和TNF—α浓度均显著增高（P〈0．05或0．01）。与对照组比较，伤后12hALI组整个肺脏呈暗红色，肺门区出血最为严重，可见单个或多个大小不等的出血灶，肺脏表面多见大小不等点状和灶状出血，以肺门为中心呈放射分布，至72h肺脏组织颜色逐渐恢复正常。光镜下可见伤后12h肺间质水肿、炎性细胞浸润、肺血管淤血和灶性肺出血等，呈典型的ALI病理改变，24h变化最为显著，至72h病理改变明显减轻。结论一次性气管内注射LPS可诱导典型的ALI病理学改变，其肺功能指标与肺病理学特点及BALF总蛋白、TNF-α水平存在相似的变化趋势，提示肺功能检测参数如Cdyn、FVC、FRC和FEV100的下降及R1的增加可为ALI评价提供参考依据。
- 杜娟陈民佳文大林王旭陆红祥孙剑会蒋建新黄宏
- 关键词：脂多糖急性肺损伤呼吸功能试验肿瘤坏死因子-Α
- 不同组合CD3、CD28抗体对CIK细胞诱导培养的探索研究被引量：1
- 2015年
- 目的探索利用CD3、CD28抗体对人外周血单个核细胞(PBMC)体外激活转化增强作用,采用不同包被方法及抗体浓度,以期获得一种更有效的包被方法。方法利用人外周血单个核细胞分离技术、体外细胞培养技术及流式细胞术(FMC),以CD3抗体固相包被、CD28抗体不同浓度固相包被或悬浮加入,计算经12d培养获得成熟CIK细胞的数量,测定不同包被方法刺激培养后的细胞表型的变化。结果培养后C组中CD4+细胞百分比明显低于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。C组中CD8+细胞所占比例高于A、B组(P<0.05)。C组的T4/T8比值与A、B组差异有统计学意义(P<0.05)。B组NK细胞含量与C组差异有统计学意义(P<0.05)。CD25+细胞在C组中所占比例低于A组(P<0.01)。结论 CD3抗体固相包被及CD28抗体悬浮加入组合对人外周血细胞的刺激增强作用强于CD3抗体固相包被CD28+抗体固相包被组合。
- 孙志亚何静陈民佳赵宗林
- 关键词：流式细胞术CIK细胞
- 急性肺损伤模型制作及不同时间点伤情变化规律被引量：4
- 2019年
- 目的建立简便可行的急性肺损伤模型,观察不同时间点伤情变化规律。方法10~12周龄C57BL/6雄鼠36只,采用随机数字表法分为生理盐水组6只和脂多糖(LPS)损伤组30只,LPS损伤组又分为损伤后3d(LPS-d3)、5d(LPS-d5)、7d(LPS-d7)、9d(LPS-d9)、11d(LPS-d11)5组,每组6只小鼠。利用鼻饲法滴注LPS,伤后3、5、7、9、11d取材,通过肺大体观察、计算肺体指数、苏木素-伊红染色(HE染色)病理评分,评估不同时间点急性肺损伤伤情变化情况。结果肺大体观察伤情变化规律表现为LPS-d3伤情最重,肝样变区域占全肺面积35%,LPS-d5、LPS-d7逐渐修复,肝样变区域占全肺面积分别为20%、9%,LPS-d9基本完全修复,双肺无块状肝样变,仅肺门处有红色块状充血,LPS-d11双肺未见明显出血改变,损伤恢复完全。肺体指数:生理盐水组(0.6±0.056),LPS-d3(1.0±0.292),LPS-d5(0.8±0.121),LPS-d7(0.8±0.153),LPS-d9(0.8±0.146),LPS-d11(0.8±0.133);病理评分:生理盐水组(0.2±0.192)分,LPS-d3(20.7±0.577)分,LPS-d5(12.3±2.646)分,LPS-d7(12.4±3.863)分,LPS-d9(3.6±1.678)分,LPS-d11(3.3±2.404)分。LPS损伤组损伤后3d肺体指数、生理盐水组与LPS损伤组损伤后不同天数病理评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论利用C57BL/6小鼠通过鼻饲法滴注LPS建立急性肺损伤模型简便可行,急性肺损伤模型,伤情表现为损伤后第3天伤情最重,后逐渐恢复,损伤后第11天基本恢复。
- 胡陈孙剑会甘乐彬刘迪张安强黄宏杜娟文大林陈民佳陆红祥曾灵张华才蒋建新
- 关键词：肺损伤鼻饲法
- 低浓度H_2O_2预处理增强小鼠BMSCs抗氧化应激损伤能力被引量：2
- 2017年
- 目的探讨PI3K/Akt/m TOR信号通路介导的低浓度过氧化氢(H_2O_2)预处理增强骨髓间充质干细胞(BMSCs)抗氧化应激损伤的作用及机制。方法通过差速贴壁法分离培养小鼠BMSCs。BMSCs经或不经低浓度(50μmol/L)H_2O_2预处理12 h,再暴露于不同高浓度H_2O_2(200、250、300和500μmol/L)刺激24 h后,流式细胞术检测BMSCs凋亡;低浓度H_2O_2预处理12 h再暴露于300μmol/L H_2O_224 h后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和cleaved-caspase-3的表达以及对PI3K/Akt/m TOR信号通路的影响。结果 H_2O_2呈浓度依赖性诱导BMSCs凋亡,50μmol/L H_2O_2预处理可降低200~500μmol/L诱导的BMSCs凋亡率,以及能降低300μmol/L诱导的促凋亡蛋白Bax和cleaved-caspase-3的上调和抗凋亡蛋白Bcl-2及磷酸化Akt和m TOR蛋白的表达的下调(P<0.05,P<0.01);PI3K抑制剂LY294002可明显地阻断H_2O_2预处理引起的上述变化。结论低浓度H_2O_2预处理通过活化PI3K/Akt/m TOR信号通路增强骨髓间充质干细胞的抗氧化应激损伤能力。
- 宋昱庆陈民佳李战朱明邱伟黄宏徐祥
- 关键词：骨髓间充质干细胞氧化应激损伤预处理
- Akt/mTOR信号通路介导低浓度过氧化氢对小鼠表皮干细胞的促增殖作用
- 2015年
- 目的:探讨低浓度过氧化氢(H_2O_2)对小鼠表皮干细胞(mESCs)体外促增殖作用及其机制。方法:以酶消化法分离培养mESCs。免疫荧光技术鉴定第3代mESCsβ1整合素和角蛋白19(K19)表达,流式细胞术鉴定CD34的表达;以不同低浓度H_2O_2(0、25、50、100、150和200μmol/L)处理mESCs 48 h和72h。同时,另一组实验中在用不同浓度H_2O_2刺激的同时加入或不加入雷帕霉素(50 ng/ml)培养48 h。甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Western Blot法检测H_2O_2刺激小鼠mESCs 48 h Akt/mTOR信号通路关键蛋白mTOR、Akt、P70s6k、e IF4E、4E-BP1、p-mTOR、p-Akt、p-P70s6k、p-eIF4E、p-4E-BP1和细胞增殖相关蛋白Cyclin D1、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:免疫荧光技术检测分离培养的mESCs细胞100%表达β1整合素和K19;流式细胞术检测99.8%的mESCs表达CD34;MTT检测结果显示,48 h和72 h时25μmol/L和50μmol/L的H_2O_2可以有效地促进mESCs的增殖(P<0.05),而雷帕霉素能拮抗这一效应;但当H_2O_2浓度为200μmol/L时,则显著抑制mESCs增殖(P<0.05);免疫印迹结果显示低浓度H_2O_2处理mESCs 48 h后,Akt/mTOR信号通路关键蛋白mTOR、Akt、eIF4E、4E-BP1水平及其磷酸化水平(p-mTOR、p-eIF4E、p-4E-BP1)显著增加(P<0.05或P<0.01),当H_2O_2浓度为200μmol/L时则抑制其表达(P<0.05或P<0.01)。此外,50μmol/L的H_2O_2能上调细胞周期蛋白Cyclin D1和PCNA的表达,而雷帕霉素能拮抗这一作用。结论:低浓度的H_2O_2对mESCs有明显的促增殖作用,并且能激活Akt/mTOR通路。而低浓度H_2O_2对mESCs的促增殖作用至少部分是通过活化Akt/mTOR信号通路介导的。
- 亓俊华聂刚吴梅刘晓萍陈民佳朱明袁培松张娅宋昱庆郭韡邢伟李向云罗东林黄宏徐祥
- 关键词：表皮干细胞过氧化氢
- 姜黄素抗肾纤维化的分子生物学机制实验研究被引量：8
- 2016年
- 目的探讨姜黄素抗肾纤维化的分子生物学机制，为临床治疗提供可靠的实验依据。方法以人肾小管上皮细胞（HKC）为研究对象，采用不同浓度的姜黄素（0、0．780、1．563、3．125、6．250、12．500、25．000、50．000和100．000p．mol／L）刺激HKC72h，倒置相差显微镜下观察细胞形态变化，并应用MTT比色法检测姜黄素对HKC生长的影响；应用不同浓度TGF-β1（0、1、5、10ng／mL）单独或联合姜黄素（6．250、12．500、25．000、50．000μmol／L和100．000μmol／L）共同刺激HKC细胞72h，观察细胞形态变化，应用逆转录PCR（RT-PCR）检测TGF-β1、骨形态发生蛋白-7（BMP-7）和Ⅰ型胶原基因表达变化。结果HKC贴壁生长，呈铺路石样外观。姜黄素刺激对细胞形态无影响；TGF-β1刺激能明显促进细胞由上皮样形态向纤维样细胞形态转化，且发生形态转变的细胞数量和TGF-β1基因表达呈TGF-β1浓度依赖性增加（P〈0．05，P〈0．01）；MTT结果显示：姜黄素在3．125-25．000μmol／L浓度范围内，能显著促进HKC增殖（P〈0．05，P〈0．01）；姜黄素能对抗TGF-β1诱导的细胞形态转变，以12．500-50．000μmol／L的姜黄素作用最明显，同时，下调TGF-β1基因和蛋白的表达，相反上调BMP-7基因和蛋白表达，并伴随着Ⅰ型胶原基因和蛋白的表达下降（P〈0．05，P〈0．01）。结论姜黄素能促进HKC增殖并维持其表型，能对抗TGF-β1诱导的HKc向梭形细胞转化，抑制细胞上皮TGF-β1和Ⅰ型胶原的表达，而促进BMP-7表达。
- 朱方强陈民佳朱明徐祥赵洪雯刘宏余荣杰吴雄飞黄宏
- 关键词：肾疾病姜黄素骨形态发生蛋白-7
- 蛋白激酶B／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路关键蛋白在糖尿病大鼠皮肤组织和创面组织中的表达研究被引量：2
- 2016年
- 目的探讨糖尿病大鼠皮肤组织和创面组织中蛋白激酶B／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（Akt／mTOR）信号通路关键蛋白的表达变化，并探讨相关机制。方法选取7～8周龄SD大鼠78只，按照随机数字表法分为糖尿病组和非糖尿病组，每组39只。糖尿病组大鼠一次性快速腹腔注射20mg／mL链脲佐菌素液（65mg／kg，采用柠檬酸缓冲液配制），建立糖尿病模型；非糖尿病组大鼠同法注射等量的柠檬酸缓冲液。于注射后1～8周2组每周各取3只大鼠，于背部切取约1．0cm×1．0cm的全层皮肤，行HE染色观测表皮厚度。注射后1周，2组各取15只大鼠同前取皮造成全层皮肤缺损，于伤后即刻及1、3、5、7d每组各取3只大鼠处死，伤后即刻每只大鼠沿创缘切取1块皮肤组织、伤后1～7d每只大鼠切取创面组织，取一部分组织采用蛋白质印迹法检测皮肤组织及创面组织中的Akt、磷酸化Akt、mTOR、磷酸化mTOR的蛋白表达水平；取剩余组织行免疫荧光染色，观察皮肤组织及创面组织中的磷酸化Akt与波形蛋白表达。对数据行析因设计方差分析、多重t检验。结果（1）注射后1、2周，2组大鼠表皮厚度相似（t值分别为0．25、1．33，P值均大于0．05）；与非糖尿病组比较，注射后3周起糖尿病组大鼠表皮厚度明显变薄（t值为4．44～9．71，P〈0．05或P〈0．01）。（2）与伤后即刻皮肤组织比较，非糖尿病组大鼠伤后1～7d创面组织Akt、磷酸化Akt、roTOR（伤后3d除外）及磷酸化mTOR蛋白表达水平明显升高，t值为3．75～21．44，P〈0．05或P〈0．01。与伤后即刻皮肤组织比较，糖尿病组大鼠伤后1～7d创面组织中Akt、roTOR蛋白表达水平（伤后ldmTOR除外）无明显变化（t值为0．03～2．32，P值均大于0．05）；伤后1～7d创面组织中磷酸化Akt（伤后1d除外）、磷酸化roTOR蛋白表达水平均明显升高（t值为3．79～8．11，P〈0．
- 黄宏邱伟朱明张娅崔文慧邢伟李向云安天琛陈民佳郭韡徐祥
- 关键词：皮肤
- 低浓度H2O2预处理增强骨髓间充质干细胞活力
- 目的：探讨过氧化氢(H2O2)预处理增强骨髓间充质干细胞(BMSCs)存活和抗凋亡能力的作用及机制.方法：分离、培养、鉴定小鼠BMSCs.观察不同低浓度H2O2 处理BMSCs 48 h 后细胞的增殖,以及SDF-1 及...
- 黄宏朱明邢伟陈民佳徐祥邱伟郭韡
- 关键词：骨髓间充质干细胞过氧化氢细胞保护
