刘永相
- 作品数：10 被引量：26H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目国家重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 珍珠鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株的分离及其VP2基因的分子遗传特征被引量：3
- 2015年
- 为了确诊某动物园珍禽的疑似传染性法氏囊病(IBD)疫情,通过RT-PCR和病毒分离的方法对采集的病料进行鉴定,并对病毒的VP2基因进行分子和遗传分析。结果显示,分离到了1株传染性法氏囊病病毒(IBDV),其VP2基因与荷兰株D6948的亲缘关系最近,达到98.8%,同属于超强毒株分支;VP2蛋白关键氨基酸位点及七肽基序均符合超强毒的分子特征,从分子水平上证实此次珍禽疫情是由超强IBDV感染导致的;同时本试验首次发现IBDV导致白鹇和孔雀的发病死亡,说明IBDV的感染谱正在不断拓宽。结果表明,加强野生禽类IBD的分子流行病学研究,对IBD的防控具有重要意义。
- 刘永相刘春国刘大飞李秀云刘鑫蒋艳妹郭冬春田进仇铮邹希明曲连东
- 关键词：传染性法氏囊病病毒超强毒株VP2基因分子特征
- 猫疱疹病毒1型HR-1毒株的分离鉴定及致病性分析被引量：3
- 2019年
- 从哈尔滨市某宠物医院疑似感染1型猫疱疹病毒发病猫的眼、鼻拭子中分离到1株病毒,经过电镜观察、分子生物学、血清学和动物回归试验鉴定,分离到的病毒为猫疱疹病毒1型,命名为HR-1株。HR-1可在猫肾细胞(CRFK)上产生典型细胞病变,病毒滴度可达到108 TCID50/mL。提取病毒基因组DNA经过gD引物扩增后,得到1条1 125 bp大小的特异性条带,经测序表明其与C-27毒株gD基因序列相似性达100%。间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,接种HR-1的单层CRFK细胞出现特异性荧光。电镜观察可见圆形、有囊膜、直径约为150 nm的病毒颗粒。为了解该毒株的毒力及致病性,通过感染中国家猫进行致病性试验。结果表明,HR-1为强毒株,对家猫的致死率为100%;HR-1感染家猫后主要表现为眼结膜炎和鼻气管炎;通过实时荧光定量PCR能从感染家猫的眼、鼻拭子中检测到病毒粒子核酸,并且于感染后4~6 d病毒核酸达到最高峰。本试验为猫疱疹病毒的诊断和致病机制的研究提供了参考价值.
- 刘晓晓刘永相张继凯程晨曦黄佳培田进曲连东
- 关键词：GD基因
- 猫杯状病毒VP1衣壳蛋白的截短表达及其抗原性分析被引量：1
- 2016年
- 为筛选猫杯状病毒(FCV)VP1衣壳蛋白特异性优势抗原片段,利用生物信息学软件DNAStar对毒株2280的VP1衣壳蛋白各分区的抗原性进行了预测。在此基础上,以FCV 2280株cDNA为模板,RTPCR扩增VP1基因的A、B、CD、E和F共5个区段,构建重组表达质粒,5个基因片段在大肠杆菌中均获得高效可溶性表达。Western-blot试验证明,截短蛋白B、E、F均可与FCV阳性质控血清发生特异性反应,截短蛋白A和CD的信号弱。截短蛋白A、B、CD、E、F等量包被ELISA板,其中截短蛋白F与FCV阳性质控血清反应的D450,S/D450,N值最高,与其他蛋白之间差异显著(P<0.05)。结果表明,截短蛋白F为FCV VP1优势抗原片段,具备开发成FCV的血清学诊断试剂和新型疫苗的潜力。
- 蒋艳妹刘家森刘永相倪宏波曲连东
- 关键词：VP1蛋白抗原性
- 东北虎源消化道病毒宏基因组学分析
- 病毒是地球上最丰富的物种之一，很多病毒严重威胁着人类和动物的安全，近年来，新发、突发病毒性传染病陆续出现，鉴于其高度的不可知性，突发性，传播迅速，病死率高，危害大的特点，极易引起群体性恐慌和影响社会稳定。近年来兴起的病毒...
- 刘永相
- 关键词：东北虎宏基因组学
- 文献传递
- 猫杯状病毒感染抑制Ⅰ型干扰素信号通路的分子机制
- 固有免疫是宿主抵抗病原微生物入侵的第一道防线，宿主的模式识别受体能够对病原相关分子模式进行识别，进而激活固有免疫系统，最终释放干扰素和炎症因子等一系列细胞因子通过抗病毒或参与炎症反应等发挥作用。Ⅰ型干扰素可以通过JAK/...
- 刘永相
- 关键词：蛋白质组学抗宿主反应抗病毒反应
- 虎源细小病毒的分离鉴定及其VP2基因分析被引量：6
- 2015年
- 为研究虎源细小病毒的分子遗传特征,本研究从东北虎腹泻粪便样品中分离到一株虎源细小病毒(HRB-T2014)。对该分离株的VP2基因进行克隆测序分析,结果表明,HRB-T2014与虎源细小病毒FJ405225和HT-374的相似性最高,达到99.9%,而与犬源细小病毒相似性最低,仅为98.1%。VP2基因核苷酸序列系统发育树分析结果显示,HRB-T2014与虎源中国分离株位于同一进化分支,并与猫和貂细小病毒共处于猫细小病毒分支,而与犬细小病毒处于不同的进化分支。以上结果表明,HRB-T2014与猫源细小病毒具有共同的遗传起源。
- 刘永相李秀云刘鑫蒋艳妹郭冬春田进仇铮邹希明曲连东
- 关键词：细小病毒VP2基因
- 嵌合猫杯状病毒F9株感染性克隆的构建及病毒拯救被引量：1
- 2019年
- 为构建猫杯状病毒(FCV)弱毒株F9的感染性克隆,本研究利经PCR分段扩增了FCV各基因片段,并拼接出FCVF9全基因组序列。经测序显示,其1823位多出一个碱基造成该序列存在移码突变,经替换为pOK-2280(已构建出的FCV强毒株的感染性克隆)相应序列并对差异氨基酸逐个突变,最终获得嵌合FCVF9全基因组的重组质粒pOK-F9H。将线性化的pOK-F9H体外转录,获得的加帽RNA转染F81细胞,得到了拯救病毒rFCVF9。经过对拯救病毒与亲本病毒的蚀斑形成能力、CPE形成能力和多步生长曲线分析,结果显示rFCVF9与亲本株在复制能力和体外生长能力方面基本一致,表明构建了嵌合FCVF9株的感染性克隆并拯救出重组病毒。本研究构建的嵌合FCVF9株感染性克隆可以为FCV的基因功能研究以及新型FCV疫苗的研发奠定基础。
- 左智敏康洪涛吴红霞祖少坡田进刘永相倪宏波曲连东
- 关键词：感染性克隆病毒拯救
- 猫杯状病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定被引量：2
- 2017年
- 为制备抗猫杯状病毒(FCV)衣壳蛋白VP1的单克隆抗体(MAb)及鉴定其表位,本研究以原核表达的重组VP1-E蛋白(aa427~aa524)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合制备杂交瘤细胞;以纯化的FCV-2280病毒粒子作为检测抗原,采用间接ELISA检测方法筛选杂交瘤细胞株,分析杂交瘤细胞所分泌的抗体亚型、中和活性及所识别的抗原表位等。结果表明,获得两株稳定分泌抗FCV VP1-E MAbs的杂交瘤细胞E2F1和E2F6,抗体均为IgG1亚型,轻链为κ链。杂交瘤细胞分泌的抗体无中和活性。Western blot结果显示,两种抗体可以特异性识别FCV-2280,表明其针对的抗原表位为线性表位。两株MAb识别VP1-E序列均为^(467)YICGSLQRAWG^(477)。生物信息学分析显示该抗原表位在FCV VP1蛋白中相对保守。该MAb为建立特异性强、灵敏度高的FCV的检测方法奠定基础。
- 程晨曦刘家森胡晓亮刘永相蒋艳妹刘晓晓曲连东
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- 水貂杯状病毒SD1株的分离鉴定及序列分析
- 2020年
- 为分析水貂杯状病毒中国分离株的遗传特征,本研究于2018年在山东地区某水貂养殖场内感染圆环病毒死亡的水貂中分离到1株水貂杯状病毒(mink calicivirus,MCV),命名为SD1株,本研究对其进行了PCR鉴定、电镜观察和遗传演化分析。结果显示,SD1株可在MDCK细胞上产生明显细胞病变。电镜观察可见病毒粒子表面成楔形杯状样凹陷,无囊膜,具有杯状病毒的形态特征。遗传演化分析显示,SD1株与2007年国内2株MCV的同源性分别为92.0%和91.2%,为水疮性病毒属新成员;RdRp基因编码的氨基酸序列比对分析显示其相对保守,蛋白变异不大,而vp1基因推导的氨基酸序列比对分析显示其变异较大,与国内分离株(MF677852)相比存在47处替换,该变异是否会引起病毒致病力的改变有待进一步解析。本研究为MCV流行株病原学研究提供参考,同时提示需重视MCV在水貂病毒感染中的作用。
- 黄佳培康洪涛刘晓晓刘永相张继凯李志杰田进曲连东
- 关键词：遗传演化分析
- 猫杯状病毒的分离鉴定及超变区基因序列分析被引量：4
- 2015年
- 为了解猫杯状病毒(FCV)的生物学特性,本研究对猫体内分离到的一株FCV HRB-SS株进行了病毒学、分子生物学鉴定和遗传学分析。结果显示该分离株能够在猫肾细胞系(CRFK)中产生明显的细胞病变,形成蚀斑。FCV的VP1基因超变区核苷酸序列分析结果显示,HRB-SS分离株与疫苗株CVXPOLYCAP同源性最高,为78.2%,而与中国分离株CH-JL和GD的同源性最低,仅为67.9%和68.8%;推导氨基酸序列分析结果显示,HRB-SS分离株与12Q087-5、UTCVM-NH12和FCLF4的同源性最高,为86.7%,而与中国分离株的同源性仅为73.9%。系统发育树分析结果显示,HRB-SS分离株与中国分离株亲缘关系较远。本研究结果表明,FCV HRB-SS与我国FCV具有不同的遗传起源。
- 刘春国刘永相刘大飞郭东春田进仇铮刘鑫蒋艳妹刘家森彭永刚李岩刘明曲连东
