董晴晴
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向抑制KIAA1199基因的表达对人结肠癌细胞SW620生长的影响被引量：2
- 2017年
- 目的探讨靶向沉默KIAA1199基因的表达对人结肠癌SW620细胞生长能力的影响。方法运用RNA干扰(shRNA)技术构建携带靶向抑制KIAA1199分子的慢病毒载体LV3-KIAA1199-shRNA并感染人结肠癌细胞株SW620为实验组(shKIAA1199),携带无义序列的对照慢病毒载体LV3-NC-shRNA为阴性对照组(shNC),未转染的细胞为空白对照组(MOCK)。72 h后用荧光显微镜观察慢病毒的感染效率,RT-PCR法验证慢病毒感染后KIAA1199 mRNA在MOCK、shNC和shKIAA1199各组细胞中的表达水平,并用嘌呤霉素筛选KIAA1199静默和阴性对照的稳转细胞。用MTT法检测MOCK、shNC和shKIAA1199各组细胞活力,流式细胞仪分别检测三组细胞的凋亡率和细胞周期的变化。结果携带靶向干扰KIAA1199基因的慢病毒感染人结肠癌细胞株SW620后,能有效下调KIAA1199在细胞内的表达水平并成功筛选KIAA1199静默的SW620稳转细胞;与MOCK和shNC组比较,shKIAA1199组细胞活力减少(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),处于细胞周期中G1期的细胞数量比例明显下降(P<0.05),G2/M期细胞比例增加(P<0.05)。结论下调KIAA1199基因的表达可抑制SW620细胞的增殖,促进该细胞的凋亡,使该肿瘤细胞的生长周期受到阻滞。
- 董晴晴许慈蔡懿婷王碧君戴强朱黎明
- 关键词：RNA干扰结肠肿瘤凋亡
- 靶向抑制磷脂酰肌醇3-激酶110β因子的表达对人胃癌细胞生长影响的实验研究被引量：1
- 2016年
- 目的探讨沉默磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p110β因子的表达对人胃癌细胞生长的影响。方法运用RNA干扰技术,合成靶向抑制PI3Kp110β的小干扰RNA(si RNA)序列并分别瞬时转染人胃癌细胞株AGS、SGC7901和MKN45(si-PI3Kp110β),作为实验组,未转染的细胞为空白对照组(Con),转染无义序列的si RNA为阴性对照组(si-NC)。采用RT-PCR和Western Blot方法验证瞬时转染后PI3Kp110β mRNA和蛋白在空白对照组(Con)、阴性对照组(si-NC)和实验组(si-PI3Kp110β)细胞中的表达水平,并通过MTT法检测细胞增殖及Annexin V-FITC/PI双染法检测AGS细胞凋亡率的情况。结果小分子干扰RNA(si RNA)瞬时转染人胃癌细胞株AGS、SGC7901和MKN45后,能有效下调PI3Kp110β在细胞内的表达水平。与阴性对照组(si-NC)比较,静默PI3Kp110β因子可减少AGS细胞的增殖(P<0.05),并明显增加AGS细胞的凋亡率(P<0.01)。结论小分子干扰RNA可有效下调PI3Kp在人胃癌细胞中的表达,沉默PI3Kp110β因子可有效抑制胃癌肿瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡,提示针对PI3Kp110β蛋白的干预治疗有可能成为抑制胃癌细胞生长的一个新的治疗方法。
- 许慈蔡懿婷董晴晴王碧君戴强朱黎明
- 关键词：RNA干扰胃肿瘤凋亡
- RNA干扰抑制磷脂酰肌醇3-激酶p110β的表达增加氟尿嘧啶诱导人胃癌细胞凋亡的能力被引量：2
- 2016年
- 目的探讨沉默磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p110β因子的表达增加氟尿嘧啶(FU)诱导人胃癌细胞凋亡的能力。方法运用RNA干扰(shRNA)技术构建携带靶向抑制PI3Kp110β分子的慢病毒载体LV-sh PI3Kp110β并感染人胃癌细胞株AGS(sh PI3Kp110β组),未转染的细胞为空白对照组(Con组),转染无义序列的对照慢病毒载体LV-shRNA为阴性对照组(sh NC组),荧光显微镜观察慢病毒的感染效率,RT-PCR和Western blot方法验证慢病毒感染后PI3Kp110β mRNA和蛋白在Con、shNC和shPI3Kp110β各组细胞中的表达水平,并用嘌呤霉素筛选PI3Kp110β静默的稳转细胞。在稳转细胞中和对照细胞中加入不同浓度FU分别作用24、48和72 h,通过MTT法检测Con、shNC和shPI3Kp110β各组细胞在加入氟尿嘧啶后细胞增殖的情况,并用Western blot方法检测可能涉及的凋亡相关信号分子的变化。结果慢病毒干扰RNA(shRNA)感染人胃癌细胞株AGS后,能有效下调PI3Kp110β在细胞内的表达水平并成功筛选PI3Kp110β静默的AGS稳转细胞;FU可抑制AGS细胞的增殖,其作用呈现浓度的依赖性;在该细胞中下调PI3Kp110β的表达可增加该细胞对FU抑制细胞生长的敏感性;下调胃癌细胞AGS内shPI3Kp110β分子的表达可显著增加FU诱导凋亡相关蛋白PARP的裂解,抑制Bcl-2蛋白的表达,从而促进胃癌细胞的凋亡。结论 PI3Kp110β shRNA转染人胃癌细胞AGS可有效下调该细胞中PI3Kp110β的表达,增加5-Fu抑制人胃癌细胞生长及促进其凋亡的敏感性,促进凋亡信号通路相关蛋白的活化。
- 许慈蔡懿婷董晴晴王碧君戴强朱黎明
- 关键词：RNA干扰胃肿瘤凋亡
- KIAA1199基因重组慢病毒载体的构建及在人胃肿瘤细胞MKN28中的表达被引量：1
- 2016年
- 目的构建KIAA1199基因过表达的重组慢病毒载体,感染人胃癌细胞MKN28并使KIAA1199基因有效表达。方法将慢病毒载体GV367和KIAA1199基因序列用Age I和Nhe I双酶切、连接、筛选及测序获得重组慢病毒质粒GV367-KIAA1199。将测序正确的GV367-KIAA1199重组载体和辅助质粒Help1.0和Help2.0用Lipofectamine2000共转染293T细胞,得到重组慢病毒载体LV-KIAA1199。予荧光稀释法和药物筛选法测定重组慢病毒的感染滴度。以携带空白基因片段的慢病毒载体LV-NC为病毒对照组。将LV-KIAA1199和LV-NC以相同的病毒感染复数(MOI)分别感染人胃癌细胞株MKN28;荧光显微镜观察EGFP在细胞中的表达;实时定量PCR检测KIAA1199的m RNA在细胞中的表达水平。结果重组慢病毒载体LV-KIAA1199构建成功,LV-KIAA1199感染胃癌细胞后,荧光显微镜下可见细胞中呈现绿色荧光;KIAA1199的m RNA的表达均显著高于对照病毒组。结论重组慢病毒载体LV-KIAA1199可携带KIAA1199基因在人胃癌细胞株MKN28中进行有效过表达。
- 蔡懿婷许慈董晴晴王碧君戴强朱黎明
- 关键词：慢病毒载体胃肿瘤
- KIAA1199基因在消化系统肿瘤中的作用被引量：1
- 2019年
- KIAA1199基因是HUGE数据库中的重要成员之一,通过表观遗传学等机制参与细胞内信号通路的转导,调控细胞生长、分化、凋亡、迁移等活动。近年研究发现,KIAA1199基因与肿瘤的发生、发展关系密切,在人类多种肿瘤尤其是消化系统肿瘤中的表达均异常升高,具有促进肿瘤细胞增殖、黏附、侵袭、迁移等作用。本文就KIAA1199基因在消化系统肿瘤中的作用作一综述。
- 董晴晴邹慧敏朱黎明
- 关键词：消化系统肿瘤细胞增殖细胞迁移
