胡晓星
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 供职机构：昆明理工大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 以主要流行EV71 VP1基因高度保守区为靶点的TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2016年
- 在我国,肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)C4型是引起手足口病的主要流行基因型。为建立EV71C4型TaqMan荧光定量PCR检测方法,在C4型EV71VP1基因的高保守区,设计合成引物和TaqMan探针,将包含此目的区段的基因片段克隆到pcDNA3.1载体中,通过体外转录获得标准品,并以梯度稀释的标准品为模板建立工作曲线,进而在优化反应条件的基础上建立TaqMan荧光实时定量PCR检测方法。实验中,所设计引物、探针的高度保守性保证了C4型EV71的高效扩增。经反应条件优化,引物和探针的最佳工作浓度分别为300 nmol/L和200 nmol/L,在1×10~301×10~3拷贝数检测范围内具有良好的线性关系(R^2=1),灵敏度可达到10~2 copies/μL。通过对该方法进行检验发现,批间和组间重复实验的变异系数均小于0.5%,且该方法对柯萨奇A16(coxsackievirus A16,CA16)柯萨奇B1(coxsackievirus B1,CB1)人轮状病毒(human rotavirus,HRV)单纯疱疹病毒2型(herpes Simplex virus type 2,HSV-2)均无交叉反应,对6份EV71阳性样本检出率为100%。以上数据表明,文中建立的TaqMan荧光定量PCR方法可为我国主要流行C4型EV71感染的快速诊断及疾病监控提供有效途径。
- 胡晓星彭杰冯悦刘丽张阿梅夏雪山
- 关键词：肠道病毒71型VP1基因TAQMAN探针荧光定量PCR
- EV71定量检测方法的建立及其对树鼩原代肾细胞感染特性研究
- 肠道病毒71型(Enterovirus 71, EV71)是引起手足口病的主要病原体之一,多感染5岁以下幼儿,主要通过亲密接触、呼吸道及消化道等途径传播,可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹和溃疡,个别患者可导致心肌炎、...
- 胡晓星
- 关键词：肠道病毒71型荧光定量PCR间接免疫荧光
- 文献传递
- 一种C型EV71病毒的TaqMan荧光实时定量PCR检测方法
- 本发明公开了一种C型EV71病毒的？TaqMan荧光实时定量PCR检测方法，以克隆EV71-2010FJLY008株型病毒VP1基因并体外转录成RNA为标准品，在此基础上建立TaqMan探针荧光定量PCR检测方法；该方法...
- 夏雪山胡晓星冯悦彭杰刘丽张阿梅
- 文献传递
- EV71病毒对树鼩原代肾上皮细胞感染模型的建立被引量：3
- 2017年
- 目的建立EV71对树鼩原代肾细胞的感染模型。方法胰蛋白酶消化法获得树鼩的原代肾细胞,用EV71感染树鼩肾细胞,测定1、2、4、6和8 d培养上清病毒滴度,分别用Western blot和间接免疫荧光法检测细胞中EV71病毒VP1蛋白的表达,以确定EV71病毒对树鼩原代肾细胞的感染性。结果对分离得到的树鼩原代肾细胞进行传代纯化和形态鉴别,建立以树鼩原代肾细胞为主的细胞培养。用EV71病毒感染树鼩原代肾细胞,感染后48~96 h病毒滴度可达到1.3×10~6TCID_(50)/m L,说明EV71病毒可有效感染树鼩原代肾细胞并有效增殖。Western blot检测发现,EV71病毒VP1蛋白可在感染后2~8 d的树鼩原代肾细胞中有效检出,间接免疫荧光法则在感染后2~6 d细胞的细胞质中检测到病毒VP1蛋白的分布。结论在成功建立树鼩原代肾细胞培养的基础上,确定了EV71病毒对树鼩原代肾细胞的感染性和病毒增殖特性,初步建立了EV71树鼩原代肾细胞感染模型。
- 杨铭胡晓星王文广张莉董书维冯悦代解杰夏雪山
- 关键词：病毒增殖VP1蛋白
- 一种A型轮状病毒的荧光定量PCR检测方法
- 本发明公开了一种A型轮状病毒的荧光定量PCR检测方法，以克隆轮状病毒VP6基因并体外转录形成RNA为标准品，在此基础上建立的TaqMan探针荧光定量PCR的检测方法；属于分子生物学领域；该方法包括以轮状病毒VP6基因为靶...
- 夏雪山彭杰冯悦胡晓星刘丽张阿梅
- 文献传递
- 人G1型轮状病毒TaqMan荧光定量检测方法的建立与应用被引量：1
- 2016年
- 目的本研究旨在建立一种快速准确定量检测人G1型轮状病毒的TaqMan探针荧光实时PCR检测方法。方法以轮状病毒VP6基因为靶基因,分别设计2对引物及其相应的TaqMan探针,扩增目的片段,将目的片段克隆于PCDNA3.1+载体上,体外转录获得RNA,系列稀释后为标准品,建立TaqMan探针荧光定量实时PCR检测方法并对该方法进行验证。结果设计实验找到最优条件下的引物浓度(250nmol/L)、探针浓度(300nmol/L);通过对引起腹泻的人柯萨奇病毒、呼肠孤病毒等进行检测,结果均为阴性,表明该方法具有很好的特异性。该方法的最低检测量为5copies/μL。对该方法进行重复性实验,发现变异率均小于1%,重复性好。用已建立的方法对4份粪便临床样品进行3次重复试验,病毒RNA的检出率为100%。结论本实验初步建立了人G1型轮状病毒TaqMan探针荧光实时PCR检测方法,为G1型轮状病毒的诊断、检测和分子流行病学研究提供了一种新的方法。
- 彭杰胡晓星冯悦甸子芩孙鷖牛华夏雪山
- 关键词：人轮状病毒VP6基因
