杜伟立
- 作品数：16 被引量：36H指数：3
- 供职机构：陕西理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：陕西省教育厅科研计划项目国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 略阳乌鸡抗病毒蛋白基因Mx多态性研究被引量：1
- 2016年
- 鸡抗病毒蛋白Mx(myxovirus resistance protein)具有抵抗流感病毒等多种病毒感染的能力。Mx蛋白631位氨基酸决定其抗病毒活性。为了揭示地方特色品种略阳乌鸡Mx蛋白631位氨基酸多态性和抗病毒能力,本研究采用PCR特异性扩增Mx基因,通过引物3'末端区分编码631位氨基酸密码子的A/G多态位点,测序PCR产物鉴定Mx基因多态位点。结果显示,138只略阳乌鸡的抗病毒蛋白Mx编码基因有AA、AG和GG三种基因型,其中病毒强抗性AA型公鸡6只,母鸡15只,共21只,比例为15.2%;敏感性GG型34只,比例24.6%,其中10只公鸡和24只母鸡;杂合AG型83只,公鸡31只,母鸡52只,比例高达60.1%。研究结果解析了略阳乌鸡Mx基因多态性,从DNA水平阐释了略阳乌鸡抗病毒能力低的原因,为后续培育强抗病毒能力的乌鸡个体和种质资源保存提供参考。
- 王令郭熠洁张涛路宏朝尹亚军杜伟立
- 关键词：略阳乌鸡基因多态性
- 维生素D受体（VDR）调控雄性生殖相关基因表达及其互作蛋白筛选研究
- 维生素D受体(Vitamin D Receptor,VDR)作为核转录因子,广泛分布于多种组织细胞。VDR通过参与AKT、Wnt/β-Catenin及NF-κB等关键信号通路,调节体内钙盐离子平衡、抑制细胞增殖以及刺激细...
- 杜伟立
- 关键词：维生素D受体转录组测序酵母双杂交雄性生殖
- 文献传递
- 小鼠CYP2J5基因组织差异表达及蛋白质结构与功能分析被引量：1
- 2020年
- 为探讨小鼠CYP2J5的结构特征及生物学功能,首先通过实时荧光定量PCR分析了小鼠CYP2J5基因组织差异表达,然后采用生物信息学工具进行了CYP2J5蛋白质结构与功能的预测和分析;为进一步探索和验证CYP2J5生物学功能及对脂代谢和性激素合成的影响,基于基因工程技术构建CYP2J5基因的超表达载体,并通过Western Blot确认构建的载体能正确表达CYP2J5基因。最终将构建的CYP2J5超表达载体导入小鼠TM3细胞,通过qPCR分析了脂代谢和性激素合成相关基因表达。结果显示,小鼠CYP2J5基因在肝脏和肾脏中高水平表达,该基因属可溶性胞质蛋白质,蛋白质二、三级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,有信号肽存在并在第13~35及75~97个氨基酸之间存在跨膜区,其主要功能是参与细胞脂代谢和脂肪酸代谢等生物调节过程。在TM3细胞中超表达CYP2J5基因后,脂代谢与性激素通路关键基因有显著变化。结果为CYP2J5基因功能的研究与开发利用提供了生物信息学和分子生物学方面的基础数据。
- 白皓路宏朝王令王珊珊杜伟立张涛
- 关键词：生物信息学
- H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白的原核表达被引量：1
- 2018年
- 血凝素(hemagglutinin,HA)是禽流感病毒的主要抗原之一,原核表达HA是该抗原特性研究和疫苗制备的关键。利用分子生物学方法构建H5N1亚型的禽流感病毒HA基因原核表达载体,转化至大肠埃希菌Rosetta菌株,用不同IPTG浓度和时间诱导HA表达,检测蛋白表达量,分析不同诱导条件对HA表达效率的影响,以确定最佳诱导条件。重组表达载体pET32a-HA经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定,获得预期大小的DNA片段,说明HA基因成功插入质粒pET32a。Western blot检测结果表明,IPTG诱导重组菌株成功表达HA蛋白,当诱导浓度为0.1mmol/L,诱导时间为6h时,HA蛋白表达量最高。研究结果为HA抗原制备及禽流感疫苗的研究奠定基础。
- 杨理凯郭苗苗杜伟立丁锐王令张涛路宏朝
- 关键词：禽流感病毒血凝素原核表达
- 汉中黑稻花青素合成酶基因克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2017年
- 花青素合成酶(Anthocyanidin Synthase,ANS)是植物花青苷生物合成途径末端的关键酶,催化无色花色素到有色花色素的转变。为研究汉中黑稻的ANS多样性及起源,采用克隆测序的方法对汉中7种品种黑稻的ANS基因序列进行分析。采用生物信息学方法,对该基因序列进行对比,并构建系统进化树和同源树,对其编码蛋白从基本理化性质、亚细胞定位、跨膜结构域、信号肽、导肽、二级结构和三级结构等方面进行预测和分析。结果表明7种汉中黑稻存在黑稻1、黑稻2两种基因序列,开放阅读框均为1 128bp,编码375个氨基酸。进化树表明黑稻1和黑稻2与籼稻、粳稻、浦竹仔、小麦等禾本科植物较近的亲缘关系,同源性分析表明黑稻1和黑稻2与籼稻等植物的ANS具有高度的同源性。氨基酸序列比对发现黑稻1和黑稻2仅有326位氨基酸不同。黑稻1的ANS蛋白含有2OG-FeⅡ_Oxy加氧酶的保守结构域。ANS蛋白三级结构预测,发现黑稻1和籼稻存在差异,推测ANS可能是花青苷合成中起重要作用的关键酶。这些结果表明ANS基因是一个古老的基因,可以作为种属鉴定的参考基因,可能是影响黑稻花青苷生物合成的主要基因之一。
- 尹亚军张涛王令路宏朝杜伟立
- 关键词：基因克隆生物信息学分析
- 温敏类弹性蛋白多肽的基因设计及重组克隆表达被引量：7
- 2019年
- 温敏类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptides, ELPs)作为新型的药物载体,在肿瘤治疗中具有广阔的应用前景。本研究根据大肠杆菌密码子的偏好性和简并性,将高度连续重复氨基酸的多种遗传密码引入基因序列中,利用依次插入单体基因和递归定向连接技术,成功构建了以缬氨酸为客座氨基酸的ELPs基因的表达质粒库,即p ET28-ELP-V_5～pET28-ELP-V_(50)。将pET28-V_(50)转化至表达宿主Escherichia coli BL21(DE3)中,经重组菌的培养和IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示ELP-V_(50)在大肠杆菌中成功获得了可溶性表达,与预期分子量大小一致。本研究为进一步构建不同分子量的ELPs基因库提供了新的思路,并为重组表达获得特定相变特性的多肽分子奠定了基础。
- 任艳艳庄嘉楠荣娜孙薇杜伟立王珊珊
- 关键词：基因设计克隆表达
- 略阳乌鸡内源性逆转录病毒鉴定及表达分析被引量：2
- 2018年
- 内源性禽白血病病毒等以多种逆转录病毒基因组稳定存在鸡染色体中,其致病性低或无致病性,但是内源性病毒的基因表达降低了鸡抵抗外源病毒感染的能力。本研究以略阳乌鸡为研究对象,利用多重PCR鉴定鸡基因组中禽内源性病毒EAV-HP和禽白血病病毒E亚群（ALV-E）,分析ALV-E的env基因表达情况。结果表明,30只略阳乌鸡的基因组中均携带EAV-HP病毒序列,其中28只携带ALV-E序列。通过MEGA和NETWORK软件对ALV-E的gp85基因分析表明,略阳乌鸡与江苏绿壳蛋鸡聚在同一分支,两者同源性高达99.1%。此研究也为后续略阳乌鸡遗传背景分析和选育抗病毒感染优良品种提供基础数据。
- 杨理凯郭苗苗杜伟立尹亚军王令路宏朝张涛刁乐
- 关键词：略阳乌鸡内源性逆转录病毒基因表达分析
- 略阳乌鸡线粒体DNA控制区(D-loop)的遗传多样性分析被引量：8
- 2017年
- 为了研究略阳乌鸡线粒体DNA控制区(mtDNA D-loop)的遗传多样性和起源,本研究对30只略阳乌鸡样品的mtDNA D-loop全序列进行了PCR扩增和测序,结合GenBank中公布的其他鸡的D-loop区序列,分析略阳乌鸡线粒体多态性及其起源。结果表明,略阳乌鸡mtDNA D-loop区全序列中,A、C、G、T平均含量分别为26.6%、26.6%、13.4%和33.4%,26个核苷酸多态位点均为转换位点,核苷酸多样度(Pi)为0.00705,单倍型变异度(Hd)为1.000,中性检验Tajima’s D值为-0.47272。通过群体构建的系统进化树发现,略阳乌鸡样品在系统进化树上聚为4大分支。研究结果表明,略阳乌鸡群体内个体序列变异程度较大,遗传多样性丰富,揭示略阳乌鸡在遗传组成上具有4个母系来源。
- 尹亚军杜伟立王令张涛
- 关键词：略阳乌鸡线粒体DNAD-LOOP
- 酵母双杂交筛选与小鼠维生素D受体互作的蛋白被引量：1
- 2018年
- 通过酵母双杂交实验技术筛选小鼠VDR相互作用的蛋白质,评价不同蛋白与VDR的结合活性,以期获得基于互作影响雄性生殖能力基因。扩增小鼠VDR完整CDS序列,克隆至诱铒表达载体pGBKT7,经菌落PCR、DNA测序鉴定,获得重组载体pGBKT7-VDR。随后将重组载体转化至酿酒酵母AH109,并进行毒性和自激活检测;然后与含小鼠cDNA文库的Y187酵母杂交,获得阳性克隆,经HindⅢ酶切,测序分析VDR互作候选蛋白的核酸序列,再检测β-半乳糖苷酶活性,评价候选蛋白与VDR作用力的强弱。结果表明,从小鼠cDNA文库中获得12个与VDR互作的候选蛋白。初步检测到12个蛋白可能与VDR互作,其中3个蛋白因子可能与VDR结合并调控蛋白激酶磷酸化或去磷酸化以影响精子形成、发育和精子活力。
- 张涛白皓王令路宏朝杜伟立刘欢杨理凯
- 关键词：维生素D受体酵母双杂交雄性生殖
- 表达鸡α干扰素重组酿酒酵母菌的构建与鉴定被引量：1
- 2017年
- 通过构建鸡α干扰素真核表达载体,以获得能够表达鸡α干扰素的酵母工程菌株。首先根据GenBank公布的鸡α干扰素基因序列设计上、下游引物,以略阳乌鸡基因组DNA为模板,PCR扩增鸡α干扰素基因片段。然后,利用基因重组技术将鸡α-干扰素基因插入真核表达载体,通过菌落PCR和DNA测序确定目标载体,构建成功后转化至酿酒酵母AH109,再通过营养缺陷培养、质粒提取和PCR鉴定带JMB440-ChIFN-α载体的重组酵母菌株。最终通过酵母培养、总蛋白收集、SDS-PAGE电泳和Western blot等,确定鸡α干扰素基因能够与酵母菌株重组,并表达α干扰素,蛋白条带大小约为23ku,与预期结果一致,表明成功构建了表达鸡干扰素基因的工程酵母菌株。
- 杜伟立尹美辰杨理凯张涛王令路宏朝
- 关键词：略阳乌鸡真核表达载体酿酒酵母
