叶飞
- 作品数：17 被引量：23H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 基于CRISPR-Cas9的痘苗病毒高效重组体系的建立被引量：1
- 2021年
- 目的利用规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)-CRISPR相关蛋白9(CRISPR associated protein 9,Cas9)技术对痘苗病毒(vaccinia virus, VACV)胸腺激酶(thymidine kinase,TK)区进行定向重组,建立高效的痘苗病毒靶基因插入重组技术。方法设计合成靶向TK区的引导RNA(guide RNA, gRNA)对应的2条互补寡核苷酸,磷酸化修饰后变性退火,克隆到去除核定位信号的PX458载体上,同时改造原有TK区重组质粒。将gRNA及Cas9共表达质粒转染293T细胞,介导VACV与TK区重组质粒进行同源重组,然后通过蓝白斑的出现率评估病毒重组率。结果本研究中设计并合成的gRNA序列介导的重组效率大于1%,高于经典的同源重组方法10倍以上。结论本研究利用CRISPR/Cas9技术建立了高效痘苗病毒TK区重组体系,为新发突发传染病的疫苗或多价研究以及肿瘤治疗等提供临床前研究技术支持。
- 吴雅彬赵莉任皎袁航张鹏叶飞田厚文王文玲谭文杰
- 关键词：痘苗病毒
- 一种灭活型样本保存液在新型冠状病毒核酸快速检测中的应用评价
- 2022年
- 目的评价含表面活性剂Triton X-100及NP40的灭活型样本保存液对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的灭活效果及其对核酸快速检测的影响。方法通过测定灭活型样本保存液对SARS-CoV-2灭活前后病毒滴度变化,评价保存液的灭活效果;用灭活型样本保存液洗脱含有SARSCoV-2模拟病毒的咽拭子样本,评价样本保存液对SARS-CoV-2核酸快速检测最低检测限和精密度的影响,并将SARS-CoV-2在灭活型样本保存液中保存不同时间以评价保存液对SARS-CoV-2核酸检测的影响。结果灭活型样本保存液在5 min内可使SARS-CoV-2滴度至少下降2.76×105倍;灭活型样本保存液对SARS-CoV-2核酸检测的灵敏度无影响,对SARS-CoV-2核酸检测Ct值的CV小于5%;SARS-CoV-2在灭活型样本保存液中于25℃或2℃~8℃条件下可至少稳定保存4 d。结论含表面活性剂Triton X-100及NP40的灭活型样本保存液可有效灭活SARS-CoV-2病毒,且灭活后病毒核酸检测不受影响,适用于核酸快速检测。
- 赵莉陆柔剑叶飞黄保英王慧娟谭文杰
- 关键词：冠状病毒科器官保存液核酸类
- 连花清瘟颗粒等8种中药体外抗新型冠状病毒活性以及细胞毒性研究被引量：5
- 2022年
- 为了评估连花清瘟颗粒等中药(Traditional Chinese Medicines,TCMs)体外的抗新型冠状病毒作用。采用Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测药物对Vero细胞的毒性,确定药物的细胞毒性。再以Vero细胞为模型,设置药物组、瑞德西韦对照组、病毒对照组,用新型冠状病毒感染细胞,药物作用48 h,提取核酸,用荧光定量PCR法检测新型冠状病毒RNA拷贝数,评估药物的抗病毒作用。细胞活性结果和病毒RNA拷贝数变化的结果显示,连花清瘟等8种药物中,连花清瘟抗新型冠状病毒活性较好,半数抑制浓度达到了0.43 mg/mL,药物六神丸和藿香正气水的细胞毒性较大,其他5种药物的抗新型冠状病毒活性较低。本研究揭示了莲花清瘟等8种药物体外的抗新型冠状病毒效果,为进一步的研究奠定了基础。
- 叶飞黄保英赵莉陆柔剑邓瑶王文任皎阿茹罕王文玲谭文杰
- 关键词：VERO细胞连花清瘟颗粒抗病毒活性细胞毒性
- 紫云英苷在制备抗流感病毒药物中的应用
- 本发明提供了紫云英苷在制备抗流感病毒药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明选用无毒性浓度的紫云英苷进行抗流感病毒药物的应用研究，通过空斑抑制实验发现紫云英苷能在体外有效抑制甲型流感病毒A/PuertoRico/8/1...
- 谭文杰朱娜黄保英毕铭轩叶飞
- 新型冠状病毒抗体检测结果的标准化和平行比较
- 2022年
- 目的通过世界卫生组织(world health organization,WHO)新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)抗体国际标准品(international standard,IS)(G样本)、抗体参考盘(样本E、F、H、I、J)的应用降低SARS-CoV-2抗体检测结果差异、提高检测结果一致性。方法利用基于SARS-CoV-2活病毒的微量中和试验、假病毒中和试验以及商品化的ELISA试剂盒对WHO的SARS-CoV-2抗体IS和参考盘等共10个样本(A~J)分别进行检测,对检测结果进行分析比较。结果以IS为参考品确定其他样本的相对浓度,降低了检测结果之间的差异。假病毒中和试验、ELISA检测血清抗体参考盘结果与基于SARS-CoV-2 HB02株的中和试验基本一致,个别试剂可检测弱阳性样本。结论SARS-CoV-2抗体IS的使用促进了血清学检测方法的标准化,抗体参考盘适用于基于SARS-CoV-2原型株的所有检测方法,假病毒中和试验、ELISA等在一定程度上可作为活病毒中和试验的替代方法。
- 王文玲王慧娟黄保英邓瑶赵莉叶飞王文任皎谭文杰
- 关键词：新型冠状病毒中和抗体酶联免疫吸附试验
- 中国HCV3b型包膜蛋白编码基因的克隆分析与假病毒制备
- 2017年
- 从中国丙型肝炎病毒(HCV)3b亚型感染者克隆分析包膜蛋白编码基因,并用于HCV 3b亚型假病毒制备。本研究从中国HCV感染血清中筛选克隆到2个3b亚型包膜蛋白编码基因,序列分析后构建表达质粒,以1b(Con1)作为对照,体外转染293T细胞后分析不同包膜蛋白表达水平,并制备了HCV 3b亚型假病毒(HCVpp),比较不同HCVpp感染效率。结果表明:2个3b亚型包膜蛋白编码基因(C27与C30)与国际3b参考株TrKj的进化关系较近。C27与C30核苷酸与氨基酸同源性较高(分别为98.5%与98.2%),包膜蛋白编码区存在10个氨基酸位点差异,且C27包膜蛋白体外表达水平明显高于C30,其中C27可制备出高感染效率的HCV 3b型假病毒,其感染效率明显高于C30与HCV 1型(Con1)制备的HCVpp。本研究分析了2个HCV 3b亚型感染者包膜蛋白编码基因序列及表达特性,并首次获得了高感染效率的HCV 3b亚型假病毒,为HCV研究及疫苗与药物研发提供了有效工具。
- 陶格斯叶飞邓瑶张玲卢莎博晓真李从力沈晓玲谭文杰
- 关键词：丙型肝炎病毒包膜蛋白
- 表达分泌荧光素酶的重组流感病毒构建及体外生物学特性研究
- 2023年
- 目的采用不同的流感病毒骨架构建表达分泌荧光素酶(Gaussia luciferase,Gluc)的重组流感病毒,同时研究其生长特性、遗传稳定性、Gluc表达水平、体外抗流感药物活性。方法在PR8NA的C端插入猪捷申病毒2A肽(porcine teschovirus-2A autocleavage peptide,P2A)自剪切位点及Gluc编码基因,其余7个质粒分别来源于A/Puerto Rico/8/34(PR8)(H1N1)和A/WSN/1933(WSN)(H1N1),通过流感病毒反向遗传学8质粒系统拯救重组病毒,分别命名为PR8NAGluc/PR8和PR8NAGluc/WSN。检测重组病毒遗传稳定性;对比PR8NAGluc/PR8和PR8NAGluc/WSN的荧光强度;检测重组病毒的生长动力学;同时测定PR8NAGluc/WSN荧光强度与半数组织培养感染剂量(median tissue culture infective dose,TCID_(50))的相关性及对奥司他韦、法匹拉韦和莲花清瘟的体外抗流感药物活性。结果通过反向遗传学成功拯救出以PR8和WSN为骨架表达Gluc的重组病毒。相对于PR8骨架,以WSN为骨架明显提高了Gluc的表达且遗传稳定,复制动力学比野生型稍低。PR8NAGluc/WSN荧光强度与TCID_(50)有较好的相关性,其对奥司他韦、法匹拉韦和莲花清瘟具有良好的敏感性。结论以WSN为骨架的重组病毒荧光表达强度比PR8骨架高,为高通量筛选抗流感病毒药物及研发流感病毒载体疫苗提供参考。
- 王东红邓瑶叶飞周剑芳王文黄保英王梦微孟昕谭文杰
- 关键词：反向遗传学荧光素酶重组病毒
- 基于RAA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法的建立
- 2023年
- 目的建立一种基于RAA-CRISPR/Cas12a的特异性强、灵敏度高的猴痘病毒核酸检测方法。方法根据已知猴痘病毒基因保守区设计合成重组酶介导等温核酸扩增(recombinase-aided amplification,RAA)引物和成簇规律间隔的短回文重复序列RNA(clustered regularly interspaced short palindromic repeats RNA,CRISPR RNA,crRNA),利用荧光检测技术筛选特异crRNA,通过荧光计数读取CRISPR/Cas12a检测结果,同时对所建立方法的灵敏性和特异性进行评价。结果建立了基于RAA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法,其灵敏度为2.5拷贝/反应,且与鼠痘病毒、痘苗病毒无交叉反应,具有高特异性。结论建立了基于RAA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法,为高效、快速、特异性检测猴痘病毒感染提供了有力工具。
- 罗美惠赵莉吴长城陆柔剑阿茹罕黄保英邓瑶任皎王慧娟叶飞王文田厚文王文玲谭文杰
- 关键词：猴痘病毒核酸检测
- 新型冠状病毒反向遗传学技术应用进展研究
- 2022年
- 冠状病毒是有包膜的、单股正链RNA病毒,基因组长约26~32 kb。人类冠状病毒感染通常引起上呼吸道与下呼吸道疾病,严重程度从普通感冒到严重急性呼吸综合征不等。SARS-CoV-2是2019年开始在全球范围内暴发流行的冠状病毒,通过反向遗传技术对人冠状病毒cDNA进行操作,构建感染性克隆,有助于对冠状病毒基因组分与功能进行深入研究,并应用于疫苗与药物研发。因此当前SARS-CoV-2反向遗传学技术的建立与应用研究尤为重要。本文讨论了人冠状病毒反向遗传技术及应用,对SARS-CoV-2感染性克隆构建技术与应用进展进行了综述。
- 王娜叶飞翟德胜谭文杰赵营
- 关键词：反向遗传技术普通感冒严重急性呼吸综合征感染性克隆下呼吸道疾病
- 猴痘病毒感染血清抗体ELISA检测方法的建立被引量：8
- 2018年
- 目的建立猴痘病毒感染血清IgG抗体检测方法。方法采用合成的猴痘病毒B21R蛋白上的2条混合多肽作为包被抗原,建立猴痘病毒感染人血清IgG抗体间接ELISA检测方法。选取正常成人血清、无关病毒感染血清和猴痘病毒感染者血清标本对多肽抗原特异性进行评价,并优化反应参数。结果猴痘病毒B21R蛋白上的二肽混合抗原与正常血清和无关病毒感染血清均无明显交叉反应,具有较好的抗原特异性。经优化后,混合二肽抗原的最佳包被浓度均为50ng/孔,二抗稀释度为1∶20000。在此条件下塞拉利昂猴痘患者血清在12d和55d的猴痘病毒IgG抗体滴度均为1∶6400。结论初步建立了猴痘病毒感染血清IgG抗体间接ELISA检测方法,为我国应对可能出现的猴痘输入病例提供技术储备。
- 任皎叶飞赵莉管茜茜赵颖宋敬东田厚文谭文杰
- 关键词：猴痘病毒IGG抗体
