李国利
- 作品数：5 被引量：38H指数：2
- 供职机构：中国人民解放军第三○九医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项解放军总后勤部卫生部科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌临床分离株利福平耐药表型及rpoB基因型分析被引量：13
- 2011年
- 目的分析结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)临床分离株利福平(rifampin,RFP)耐药表型及rpoB基因突变关系,阐明MTB RFP耐药株rpoB基因突变特征。方法采用改良罗氏培养基比例法检测387株MTB临床分离株对RFP敏感性,并进行rpoB基因测序。对经测序rpoB基因511位和533位密码子突变株进行RFP最小抑菌浓度(MIC)检测。结果比例法检测387株MTB临床分离株中1,98株RFP耐药株,189株RFP敏感株。rpoB基因测序结果表明1,98株比例法RFP耐药株中1,92株(96.97%)发生rpoB基因突变,涉及16种单位点和24种双位点密码子联合突变类型,单位点和双位点密码子联合突变率分别为84.34%(167/198)和12.63%(25/198),其中发现1种单位点和21种双位点密码子联合突变新类型。最常见的突变位点为531位(51.01%)、526位(21.21%)和516位(7.07%)密码子。6株(3.03%)耐药株在rpoB测序范围内未见突变。189株比例法RFP敏感株中,174株(92.06%)在rpoB基因测序范围内未见突变1,5株(7.94%)发生突变,其中7株CTG511CCG(Leu→Pro)突变和6株CTG533CCG(Leu→Pro)突变。511位和533位密码子突变株MIC检测结果提示其突变与低度耐RFP相关。结论所得数据及一些新的发现为进一步研究MTB RFP耐药机制、研制快速新型分子药敏试验方法提供理论和实际应用依据。
- 李国利张灵霞王倩李邦印陈澎赵雁林
- 关键词：结核分枝杆菌利福平耐药表型RPOB基因
- 结核分枝杆菌组合蛋白的表达及血清学诊断价值的评价被引量：2
- 2013年
- 目的取得能用于结核病血清学诊断的敏感性、高特异性强的组合蛋白。方法用DNA双链全合成的方法合成ESAT6,MPT64,38KD,Ag85B等结核分枝杆菌特异性抗原的抗原表位基因,用PCR法将这些基因片段连接起来成为新型抗原的编码基因。将该编码基因克隆于pET24b载体,经测序鉴定后转化于大肠杆菌BL21菌株用IPTG进行诱导表达。组合蛋白经镍柱纯化后用Western印迹法和酶联免疫实验(ELISA)对其抗原性和特异性进行检测。结果携带重组质粒的菌株经IPTG诱导后以包涵体的形式大量表达组合蛋白,经镍柱纯化后蛋白质浓度达到0.5 mg/ml,western实验表明:该组合蛋白能与结核病人血清特异性结合,而不与健康人血清结合。以该组合蛋白为包被抗原采用ELISA法检测结核抗体的灵敏度为61%,特异性为97.3%。PPD检测的灵敏度和特异性分别为73.7%和91.8%。该组合蛋白检测卡介苗接种阳转血清的阳性率为2.1%,特异性为97.9%,而PPD检测卡介苗接种阳转血清的阳性率为22.3%,特异性为79.7%。结论该组合蛋白用于结核病血清学诊断具有较高的灵敏度和特异性,能够为结核病的临床诊断提供一定的指导。
- 张灵霞李国利陈彭王倩
- 关键词：抗原决定簇克隆表达
- 聚合酶链式反应检测结核杆菌的研究被引量：1
- 1992年
- 以人型结核杆菌基因组 DNA 为模板,合成二段引物各20个碱基进行聚合酶链式反应(PCR)。经琼脂糖凝胶电泳证实,获得一条245bp 扩增带。PCR 检测的敏感性染色体基因组DNA 为1pg,菌悬液为13个活菌/ml。在特异性试验中,人型结核杆菌、牛型结核杆菌、BCG可见此扩增带。被试的其它14种抗酸菌以及变铅青链霉菌、大肠杆菌质粒 PUC19、星状诺卡氏菌、红球菌均未见该扩增带。54例肺结核痰标本3种方法检查的阳性率分别为:萋尼氏抗酸染色16.7%,培养法14.8%,PCR 37.0%。前2种检查方法分别与 PCR 比较,经统计学处理均有显著性差异(P<0.01)。12例非结核性肺部疾患痰标本抗酸染色和 PCR 均为阴性。结果表明,PCR 技术是快速、敏感、特异诊断结核病的方法。
- 庄玉辉吴雪琼张小刚李国利
- 关键词：肺结核结核杆菌聚合酶链反应
- 荧光PCR熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌异烟肼耐药突变
- 目的：评估荧光PCR熔解曲线法对结核分枝杆菌异烟肼耐药突变的诊断价值。方法：检测1096株结核临床分离株，并与比例法药敏试验比较，评估荧光PCR熔解曲线法的临床灵敏度和临床特异性。结果：荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆...
- 胡思玉李辉李国利刘小立牛建军王峰权胜卯许晔李庆阁
- 关键词：结核分枝杆菌异烟肼耐药突变
- 聚合酶链反应技术诊断泌尿系结核被引量：22
- 1995年
- 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测尿中结核杆菌，诊断泌尿系结核；同时对尿标本进行涂片抗酸染色，将病理诊断作为黄金标准，并比较其结果。表明：ＰＣＲ法灵敏度为５０．０％，特异性为８６．０％，两者均高于涂片法（Ｐ＜０．０１）。说明ＰＣＲ检测尿中结核杆菌以诊断泌尿系结核为一先进、可靠、特异、灵敏的诊断手段。对该法临床应用的局限性也进行了初步探讨。
- 廖利民石炳毅梁春泉蔡明庄玉辉张晓刚吴雪琼李国利
- 关键词：泌尿系结核聚合酶链反应
