李家冬
- 作品数：4 被引量：18H指数：2
- 供职机构：华南农业大学食品学院更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 重组家蚕乙酰胆碱酯酶底物识别特性的研究
- 为了研究家蚕乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)活性中心峡谷的瓶颈位置关键氨基酸对酶活性的影响,采用同源建模和分子对接等手段分析,确定Y398为关键氨基酸,进而对该位置进行了三个突变.结果表...
- 蔡俊王弘李家冬陈子键王炳峰
- 关键词：家蚕乙酰胆碱酯酶酶活性
- 重组蛋白正确折叠与修饰的提高策略被引量：11
- 2017年
- 随着分子生物学的研究和不断发展,基因表达技术有了很大的进步。到目前为止,人们已经研究出多种表达系统用以生产重组蛋白,但没有一种表达系统能够完全满足当前需要,各种活性肽和蛋白质类药物的需求逐年攀升,不仅对表达量有要求,更需要正确的翻译后折叠、修饰,使表达蛋白和天然构象更加接近,具有更高的活性和稳定性。结合目前的研究工作从表达系统与宿主、分泌表达、共表达、融合表达和培养条件等方面综述了其对重组蛋白正确折叠以及翻译后修饰的影响,并提出可能改进的策略。
- 李家冬王弘
- 关键词：重组蛋白折叠翻译后修饰
- 抗克百威单链抗体的可溶性表达、纯化与鉴定被引量：1
- 2017年
- 在前期获得了抗克百威单链抗体基因的基础上,为进一步研究克百威单链抗体的性质,本文构建了两种抗克百威单链抗体可溶表达载体,p ET22b(+)-C-6His-CBF-sc Fv和p ET22b(+)-N-6His-CBF-sc Fv。比较His标签处于不同位置时,目的蛋白与Ni结合作用,发现His标签处于N端的目的蛋白与Ni结合作用比His标签处于C端时要强。对影响N-6His-CBF-sc Fv可溶性表达的条件进行优化,进而对其进行纯化。结果表明,当选用LB培养基,表达温度18℃,表达时间为16 h,IPTG浓度为1 mmol/L时可溶表达效果最好,可溶表达的目的蛋白量占总目的蛋白量从优化前的10%增加到50%。优化表达后的N-6His-CBF-sc Fv破壁上清经Ni Sepharose HP金属螯合亲和层析及阳离子交换层析两步纯化,纯化后纯度达90%。经ic ELISA鉴定,抗克百威单链抗体保持抗原结合活性,IC_(50)值为63.80 ng/m L。获得的抗克百威单链抗体可用于后续特性研究。
- 詹屋强黄宇婷张瑾如李家冬刘姚沈兴王弘
- 关键词：克百威单链抗体分泌表达纯化
- 对硫磷纳米抗体筛选及分子识别机制研究被引量：6
- 2019年
- 对硫磷是一种广谱的有机磷酸酯类杀虫、杀螨剂,毒性极强,可对环境和人类健康造成严重危害。尽管我国已禁止使用对硫磷,但仍存在违禁使用现象,加强对其监测十分必要。纳米抗体是已知最小的与抗原结合的片段(15 kDa),来源于骆驼科动物体内重链抗体的可变区,具有稳定性强、灵敏度高、易表达、水溶性好等特性。本研究基于噬菌体展示技术构建了抗对硫磷纳米抗体库,其库容为2.41×10^7 cfu/mL,经抗原-抗体固相亲和筛选及噬菌体酶联免疫法(Phage ELISA)鉴定,获得5种抗对硫磷纳米抗体VHH1、VHH6、VHH13、VHH21和VHH24。以结合能力最强的VHH1为基础,采用同源建模和分子对接技术探讨VHH1与对硫磷分子的识别机制,发现VHH1与对硫磷存在氢键和疏水间分子作用力,关键氨基酸是Ser60、Lys104、Phe105、Gly106和Arg107。本研究为抗体的进化改造和半抗原的设计提供了新思路。
- 张玉琪张瑾如王锋李家冬司睿吕丽珊沈玉栋王弘HAMMOCK Bruce D孙远明
- 关键词：对硫磷噬菌体展示分子模拟
