张俊华
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：北京医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 经修饰的苯丙氨酸氧化酶酶原及其用途
- 本申请提供一种经修饰的苯丙氨酸氧化酶酶原，以及其用于蛋白酶活性检测的用途。在该用途中，各待测蛋白酶浓度信号得到有效的放大，提高了检测的灵敏度，实现了体内蛋白酶活性的特异、灵敏、快捷检测。
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- 文献传递
- 脑钠肽的重组表达、纯化及其在临床检验质控中的应用
- 2023年
- [目的]制备脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)重组蛋白,为临床实验室检测BNP提供稳定可靠、方便快捷的质控品或参考品原料。[方法]优化BNP编码密码子,与麦芽糖结合蛋白(maltose-binding protein,MBP)编码基因及FXa识别序列一并克隆至表达载体pRSFDuet-1,在大肠杆菌工程菌BL21(DE3)中诱导表达,可溶性表达产物MBP-BNP经纯化、丝氨酸蛋白酶FXa切除MBP后,获得具有生物活性的BNP蛋白。[结果]将NPPB(natriuretic peptide precursor B,NPPB)基因参考序列内26%的罕见密码子全部替换成了大肠杆菌常用密码子,成功构建了重组表达质粒MBP-BNP-pRSFDuet-1,酶切、测序鉴定正确后转入BL21(DE3)获得可溶性高表达MBP-BNP融合蛋白的工程菌株。用镍柱和交联葡聚糖G50分子筛纯化后获得250 mg/L的MBP-BNP融合蛋白,经FXa切除MBP后得到1.65 mg/L的BNP蛋白,比临床实验室常规BNP检测区间上限高出约50倍。[结论]与传统的参考品制备方法相比,运用基因工程技术可在大肠杆菌中稳定可溶性表达浓度较高的BNP蛋白,可为临床实验室提供更方便快捷、质优价廉的质控品或标准品原材料,提供了理论基础和技术保障。
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- 关键词：脑钠肽基因重组标准品质控
- 西格列汀及胰高血糖素样肽1对脐静脉内皮细胞铁代谢相关基因的调控作用被引量：3
- 2017年
- 目的 观察西格列汀及胰高血糖素样肽1（GLP-1）对正常糖浓度（正糖）及高糖条件下人脐静脉内皮细胞（HUVECs）铁代谢相关共济蛋白（FXN）及顺乌头酸梅1（ACO1）蛋白表达的影响.方法 用西格列汀（1μmol/L）和（或）GLP-1（100 nmol/L）处理HUVECs,正糖（5.5 mmol/L）及高糖（30.0 mmol/L）状态下分别设相应对照组、GLP-1处理组、西格列汀处理组以及GLP-1＋西格列汀联合处理组.检测药物对正常状态下HUVECs细胞增殖的影响,用实时定量逆转录PCR和Western blotting法分别于24 h及48 h后检测HUVECs内FXN和ACO1的mRNA及蛋白表达水平.多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较使用Bonferroni检验（满足方差齐性检验时）或Dunnett T3检验（不满足方差齐性检验时）.结果 （1）正糖下经西格列汀和（或）GLP-1处理24 h后,与对照组（表达水平设为1）相比,各组的HUVECs细胞增殖水平均无明显变化（分别为0.99±0.04、1.07±0.08、1.06±0.05,F=4.059,均P〉0.05）;而各加药组的FXN mRNA表达均呈下降趋势,其中,西格列汀＋GLP-1组FXN的mRNA表达水平降低为0.68±0.18（t=3.59,P〈0.05）;西格列汀单独或联合GLP-1组ACO1的mRNA表达水平也明显降低（分别为0.49±0.13、0.59±0.15,F=10.802,均P〈0.05）;各加药组的FXN及ACO1的蛋白水平均低于对照组,但差异无统计学意义（均P〉0.05）.（2）高糖下经西格列汀和（或）GLP-1处理48 h后,与对照组（表达水平设为1）相比,西格列汀＋GLP-1组FXN mRNA表达升高（1.75±0.26,t=-5.71,P〈0.05）;但各组的ACO1 mRNA表达变化均不明显且差异无统计学意义（均P〉0.05）.结论 西格列汀和GLP-1可在不影响正常状态内皮细胞增殖的条件下,通过调节正常或高糖状态下HUVECs中FXN及ACO1的表达水平影响细胞内的铁代谢.
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- 关键词：胰高血糖素样肽1人脐静脉内皮细胞
- 经修饰的苯丙氨酸氧化酶酶原及其用途
- 本申请提供一种经修饰的苯丙氨酸氧化酶酶原，以及其用于蛋白酶活性检测的用途。在该用途中，各待测蛋白酶浓度信号得到有效的放大，提高了检测的灵敏度，实现了体内蛋白酶活性的特异、灵敏、快捷检测。
- 王辰肖飞张俊华许小毛邹丽辉李传保王萌苏斐
- 文献传递
