李忠奎
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：齐鲁工业大学食品与生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 响应面法优化大肠杆菌产海藻糖合酶发酵条件
- 响应面法对大肠杆菌(E Coli)产海藻糖合酶发酵条件进行了优化.根据单因素试验结果,利用Plackett-Burman进行两因素两水平设计对影响其产酶因素进行评估并筛选出具显著效应的3种因素:葡萄糖、酵母浸粉和K2HP...
- 刘红娟王腾飞李忠奎王瑞明
- 关键词：海藻糖合酶发酵工艺大肠杆菌参数优化
- 拟南芥硫酯酶基因在毕赤酵母中的表达被引量：6
- 2015年
- 硫酯酶在生物体内能催化水解脂酰酰基载体蛋白和饱和脂肪脂酰链,对中链脂肪酸(Medium chain fatty acids,MCFAs)的积累起着关键作用。为获得具有生产中链脂肪酸能力的工程菌,以拟南芥c DNA为模板,PCR扩增得到其脂酰-ACP硫酯酶基因At Fat A,经Eco RⅠ/XbaⅠ双酶切后连接至同样双酶切的质粒中,获得重组质粒p PICZαA-At Fat。将重组质粒电击转入毕赤酵母GS115中,通过Zeocin抗性筛选,挑选出阳性克隆子并摇瓶发酵诱导,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析获得明显目的蛋白条带,首次成功构建At Fat A的真菌表达系统。气质联用法检测发酵产物胞外游离脂肪酸,发现毕赤酵母At Fat A重组菌株比起始GS115菌株胞外游离MCFAs(主要是辛酸)产量增加51%,MCFAs产量占胞外总脂肪酸产量的28.7%,而野生菌中这一比例仅有18.1%,这为日后生产安全无毒害的MCFAs探索了一条新的途径。
- 郝昭程王腾飞李忠奎郝梓凯戴琨王瑞明
- 关键词：拟南芥毕赤酵母
- 海藻糖合酶基因在毕赤酵母中的克隆和表达
- 海藻糖因其独特的生物学功能使得其近年来在食品、医药、农业等行业中被广泛使用，而专一转化生产海藻糖的海藻糖合酶是一种分子内的葡糖苷转移酶，可以将麦芽糖中的α-1,4糖苷键转化成α-1,1糖苷键从而生成海藻糖，利用海藻糖合酶...
- 李忠奎
- 关键词：海藻糖合酶毕赤酵母PCR方法酶学活性
- 海藻糖合酶基因在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2013年
- 首次构建来源于恶臭假单胞菌海藻糖合酶基因(AE015451.1)的真核表达载体,探索在毕赤酵母中的表达。PCR扩增目的基因,经EcoRⅠ/XbaⅠ双酶切后连接至同样双酶切的pPICZaA中,经PCR检测和序列测定准确后,通过电击法将重组质粒转入毕赤酵母GS115中,利用含Zeocin的YPD平板筛选到阳性转化子,提取阳性转化子基因组并利用特异性引物PCR得到一条与目的基因大小相同的条带,说明目的基因转入成功,诱导重组蛋白表达并用SDS-PAGE检测可见一条约76 ku与目的蛋白大小预测相符合的蛋白条带,最后HPLC检测重组蛋白可将麦芽糖特异转化为海藻糖,说明外源表达的海藻糖合酶具有一定酶活。通过PCR、SDS-PAGE和HPLC结果说明成功构建重组pPICZaA-TreS质粒并整合到巴斯德毕赤酵母的基因组上,且海藻糖合酶基因得到预期的表达并具有活性,为下一步研究奠定基础。
- 王瑞明李忠奎王腾飞刘红娟李丕武
- 关键词：海藻糖海藻糖合酶毕赤酵母
