江荣香
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
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- 重组卤醇脱卤酶的表达优化及纯化被引量：2
- 2010年
- 卤醇脱卤酶可以催化合成具有光学纯的环氧化物及β-取代醇等一类高价值手性药物中间体。卤醇脱卤酶的高效重组表达及纯化可以更好地促进该酶的应用。通过PCR扩增,将编码卤醇脱卤酶的基因克隆至pBAD表达载体中,经测序鉴定后,将其转入大肠杆菌TOP10中,对其重组表达条件进行优化,以提高蛋白表达量。同时,对该酶在已构建好的T7表达体系中的表达条件也进行了优化。经酶活测定及SDS-PAGE分析,选择最优条件进行500ml摇瓶的表达,在两种表达体系中,可溶性目的蛋白的含量均大大提高,占总蛋白含量35%左右。采用Q-Sepharose阴离子交换层析技术一步纯化,分别获得纯度为90%的卤醇脱卤酶34mg和41mg。同时,pBADHheC表达体系的构建为卤醇脱卤酶的生物催化特性改造奠定了基础。
- 李阳汤丽霞郑楷王雄江荣香
- 关键词：纯化
- 富集培养及高质量DNA提取有利于从土壤宏基因组中获取新卤醇脱卤酶基因被引量：3
- 2010年
- 目的:宏基因组技术作为一种不依赖于微生物纯培养的新方法,在挖掘新基因方面具有极大的潜力。本研究旨在建立一种从土壤中高效获取卤醇脱卤酶新基因的策略。方法:通过对现有DNA提取方法进行改进,同时结合富集培养途径以提高土壤宏基因组DNA质量和特异性;在此基础上,应用T-Coffee及CDEHOP程序设计特异引物并对目的基因进行扩增,同时采用正交法设计优化扩增条件,以提高获得卤醇脱卤酶基因的效率。结果:应用改进法提取的DNA质量较改进前有大幅度提高,其D260nm/D280nm及D260nm/D230nm值均大于1.8,且可以不经纯化直接用于PCR和相关酶切实验;PCR扩增目标基因的特异性增强,其中用经富集培养后所得DNA为模板扩增目标基因的特异性最强,TA克隆测序阳性结果比例最高。结论:富集培养和高质量DNA的获得有助于基于宏基因组途径获取新基因。
- 聂洪丽汤丽霞张诗海江荣香
- 卤醇脱卤酶HheA表达优化及定向进化
- 在目前已知序列的六种卤醇脱卤酶中，根据它们的氨基酸序列相似性把它们分为A，B和C三种。其中来源于放射性土壤杆菌的卤醇脱卤酶HheC已被深入研究，而对于A类和B类的了解甚少。鉴于HheA和HheC底物特异性和立体选择性上的...
- 江荣香
- 关键词：定向进化突变体催化活性氨基酸序列
- 文献传递
