张灵
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 测定谷胱甘肽-S-转硫酶动力学参数的变化表征其抑制剂被引量：3
- 2011年
- 目的:测定谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione-S-transferases,GST)动力学参数变化,建立表征其抑制剂的方法。方法:从猪肝经阴离子交换层析和亲和层析制备GST酸性同工酶,用还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)和1-氯-2,4-二硝基苯(1,-chloro-2,4-dinitrobenzene,CDNB)合成S-(2,4-二硝基苯基)-谷胱甘肽(GS-DNB)为候选抑制剂,以GSH与CDNB为底物测定GST在GS-DNB作用下的米氏常数(Km)和最大反应速度(Vm),从而确定GS-DNB对GST的抑制常数(Ki)。结果:此GST被纯化146倍以上,活性总收率近30%。该GST对GSH和CDNB的Km分别为42μmol/L和0.86 mmol/L,属于随机双底物动力学模型。GS-DNB对CDNB竞争性Ki为(21±1)μmol/L(n=2);对GSH竞争性Ki为(17±1)μmol/L(n=2)。结论:产物GS-DNB是GST的高亲和力竞争性抑制剂;测定GST动力学参数随抑制剂浓度的变化可筛选其抑制剂。
- 张灵杨晓兰白婧廖娟刘红博廖飞
- 关键词：谷胱甘肽-S-转移酶抑制剂还原型谷胱甘肽
- 谷胱甘肽-S-转移酶抑制剂设计、合成及筛选
- 谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferases，GST)主要存在于哺乳动物体内，是由相同亚基构成的二聚体;每个亚基有一个活性中心，包含谷胱甘肽结合位点(G-site)和相邻疏水底物结合位点(H...
- 张灵
- 关键词：酶促动力学抗肿瘤药物
- 融合标签谷胱甘肽S-转硫酶高亲和配体的设计与筛选被引量：3
- 2012年
- 目的:设计与筛选融合标签血吸虫谷胱甘肽S-转硫酶(Glutathione S-transferase,GST)的高亲和配体。方法:将原核融合表达载体pGST-MOLUC转入大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷低温诱导GST标签表达,用Glutathione Sepharose 4B亲和纯化此标签GST。初速度法测定GST对底物1-氯-2,4-二硝基苯(1-chloro-2,4-dinitrobenzene,CDNB)和还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的Km;测定GST产物S-(2,4-二硝基苯基)-谷胱甘肽(GS-DNB)、3,5-二甲基苯甲酸、对丁基苯甲酸、依他尼酸及3者对应的对称双酰丁二胺对标签GST的抑制作用。结果:纯化标签GST对GSH和CDNB顺序结合且Km都高于0.10mmol/L;GS-DNB相对CDNB的竞争性抑制常数约5μmol/L,相对GSH的非竞争性抑制常数约33μmol/L。3,5-二甲基苯甲酸、对丁基苯甲酸、依他尼酸对此GST抑制常数都大于0.20 mmol/L;N,N’-双依他尼酰-1,4-丁二胺和N,N’-双对丁基苯甲酰-1,4-丁二胺都为GST相对GSH的强竞争性抑制,抑制常数分别为31 nmol/L和(0.61±0.43)μmol/L(n=3)。结论:将标签GST低亲和力芳香羧酸用柔性短链连成对称结构,可获得结合于单个活性中心的高亲和力标签GST抑制剂。
- 杨宪峰张灵杨晓兰龙高波张奕廖飞
- 关键词：抑制剂配体
