孙万菊
- 作品数：5 被引量：13H指数：3
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- 幽门螺杆菌临床分离株HsP60分子特征及其对IL-8诱生作用的研究
- 目的：分析幽门螺杆菌（Helicobacter pylori, Hp）临床分离株热休克蛋白60 （heat shock protein 60, Hsp60）基因编码区序列特征,并通过定点突变及构建原核表达系统制备野生型与...
- 孙万菊
- 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白60炎症细胞因子
- 文献传递
- 幽门螺杆菌热休克蛋白60基因的定点突变及其原核表达被引量：5
- 2013年
- 目的定点突变幽门螺杆菌标准菌株ATCC26695 hsp60基因的1398、1399位点,并获得基因突变后hsp60基因的原核表达蛋白。方法采用Primer Premier5.0软件设计hsp60基因的2对引物,引入2个突变位点,通过重叠延伸PCR法进行3次扩增,获得突变型hsp60基因,克隆至原核表达载体pEASY-E1,重组质粒转化至E. coli BL21(DE3),对其进行测序验证,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE电泳检测表达产物。结果将幽门螺杆菌hsp60基因1398、1399位点AG突变为GC,构建了突变型hsp60基因的表达载体,转化大肠埃希菌后高效表达可溶性hsp60蛋白。结论构建了突变型hsp60基因表达载体,并能表达可溶性目的蛋白,为对其功能研究奠定了基础。
- 孙万菊杜东龙蒋宏张珍杜镇镇李波清
- 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白60定点突变原核表达
- 幽门螺杆菌临床分离株热休克蛋白60基因序列分析被引量：3
- 2014年
- 目的分析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床分离株热休克蛋白60基因编码区序列特征。方法对分离自我国不同地区、患有不同胃肠疾病患者的63株Hp提取基因组DNA并设计hsp60特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增hsp60基因,经1%琼脂糖凝胶电泳后切胶回收、纯化PCR产物并测序,用DNAstar 5.0软件中的Clustal W程序对hsp60基因序列及由该序列翻译的氨基酸序列进行比较分析。结果成功特异性扩增并纯化到hsp60全基因序列。经序列比对,发现不同胃肠疾病来源的hsp60基因核苷酸序列在877、1 399以及1 579位点处存在单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)。其中来源于非胃癌患者的Hp在以上三位点处分别有8株(8/48,16.67%)G→A置换,9株(9/48,18.75%)C→G置换,7株(7/48,14.58%)A→G置换;胃癌患者来源的Hp在以上三位点处分别有3株(3/18,16.67%)G→A置换,1株(1/18,5.55%)C→G置换,2株(2/18,11.11%)A→G置换。将核苷酸序列翻译为氨基酸序列后,在以上三位点所对应的氨基酸序列,即293、467以及527位点处分别发生了由缬氨酸(V)到异亮氨基酸(I)、谷氨酰胺(Q)到谷氨酸(E)以及苏氨酸(T)到丙氨酸(A)的改变。结论我国Hp临床分离株热休克蛋白60基因序列存在单核苷酸多态性位点。
- 孙万菊杜东龙孙辉周秀芝张珍李波清
- 关键词：幽门螺杆菌单核苷酸多态性
- 威海地区幽门螺杆菌cagA基因3′端多态性分析被引量：2
- 2014年
- 目的研究威海地区幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床分离株cagA基因的3′端多态性。方法采用PCR法扩增Hp临床分离株的cagA基因3′端并测序,用DNAStar 5.0软件对其进行编码氨基酸序列的比对分析。结果 63株Hp临床分离株均cagA阳性(cagA+),其中93.7%(59/63)为东亚型(EPIYYA-ABD),6.3%(4/63)为西方型(EPIYYA-ABC)。3.4%(2/59)的东亚型菌株EPIYA-B突变为ESIYA-B,4株西方型型均突变为EPIYT-B。胃癌患者分离株中88.9%(16/18)为东亚型,11.1%(2/18)为西方型;非胃癌分离株中95.6%(43/45)为东亚型,4.4%(2/45)为西方型。2株分离自胃癌患者的西方型Hp EPIYA-A后的第一个氨基酸残基由赖氨酸(K)突变为谷氨酸(E)。结论威海地区Hp cagA基因以东亚型为主,但东、西方亚型Hp的致病性无显著差别,两型都存在cagA基因3′端编码氨基酸序列的改变。
- 杜东龙孙万菊孙辉刘岩红李波清
- 关键词：幽门螺杆菌CAGA多态性
- 65株临床分离MRSA的SCCmec基因分型及耐药性研究被引量：5
- 2013年
- 目的了解临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的葡萄球菌盒染色体(SCCmec)基因型分布特点及耐药状况。方法多重聚合酶链反应(PCR)对MRSA进行SCCmec基因分型;普通PCR对MRSA进行4种耐药基因扩增;应用纸片扩散法测试MRSA对19种抗菌药物的敏感性。结果 SCCmec分型显示60株受试MRSA为SCCmecⅢ型菌株,4株为SCCmecⅣa型菌株,1株未分型。65株MRSA临床株对多种抗菌药物耐药,对氯霉素耐药率(4.62%)相对较低,对利奈唑胺、奎奴普丁/达福普汀、万古霉素、替考拉宁均敏感。4种耐药基因的阳性率分别为aac(6')/aph(2'')93.85%、aph(3')Ⅲ52.31%、tetM 92.31%、ant(4')9.23%。结论临床分离的MRSA SCCmec基因型以Ⅲ型为主,且具有多重耐药的特征,对氨基糖苷类、四环素类耐药基因有较高的携带率,多重PCR可以有效地用于大批量临床分离的MRSA SCCmec分型研究。
- 王爱玲纪冰孙万菊孟玮安新业宿振国王连文张玉梅
- 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性聚合酶链反应
