刘欢
- 作品数：11 被引量：11H指数：2
- 供职机构：陕西理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省教育厅科研计划项目陕西省科技厅农业攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 高分子聚合物对两种细胞转染效率的研究
- 2016年
- 比较纳米材料和阳离子多聚物转染试剂携带增强绿色荧光蛋白基因对C2C12细胞和DF-1细胞的转染效率,筛选适合的基因载体。采用Entranster TM-D纳米材料和3种阳离子多聚物(Superfect、Fect、Neofect)转染试剂介导p CDH-EGFP-puro质粒分别转染C2C12细胞和DF-1细胞,24 h后用实时荧光定量核酸扩增检测系统检测转染细胞中增强绿色荧光蛋白基因的mRNA表达水平,48 h后观察并计数阳性细胞率。结果发现4种试剂分别转染的两种细胞中均有增强绿色荧光蛋白基因的表达。C2C12细胞用阳离子多聚物转染的效率略高于纳米材料转染,其中Superfect的转染效率可达到30%;DF-1细胞用纳米材料和阳离子多聚物转染的效率都高,其中Fect的转染效率达到50%。因此,阳离子多聚物Superfect用于C2C12细胞的体外转染,Fect转染试剂用于DF-1细胞的体外转染。
- 尹亚军李蕊清刘欢田蕾铭张力瑞张辉路宏朝张涛
- 关键词：C2C12细胞纳米材料转染效率
- 维生素D受体对小鼠睾丸组织硬脂酰辅酶A去饱和酶1基因表达的影响
- 2020年
- 为探究小鼠睾丸组织中维生素D受体(VDR)对硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD-1)基因表达的影响,首先对6月龄、12月龄野生型和VDR敲除型小鼠睾丸组织进行转录组测序分析,发现VDR敲除后SCD-1基因表达显著降低,并通过RT-qPCR对转录组测序结果进行验证。随后构建了融合表达载体pEGFP-VDR,在293T细胞中检测VDR的定位。接着将pEGFP-VDR和pCDNA3.1-VDR重组质粒以及VDR特异性siRNA分别转染至睾丸间质细胞TM3,利用RT-qPCR和Western blot检测过表达和干扰VDR表达对SCD-1表达的影响。结果显示,VDR敲除后,睾丸组织中SCD-1的表达量在6月龄和12月龄小鼠中均极显著下降;EGFP的核内分布因核转录因子VDR介导的作用明显多于细胞质;TM3细胞中过表达VDR对SCD-1基因表达无显著差异,干扰VDR后,SCD-1转录水平显著下降,但蛋白水平差异不显著。据此认为,正常水平的VDR对于SCD-1基因表达和功能维持是必要的,VDR缺失会严重影响SCD-1的功能,研究结果为VDR调控SCD-1基因表达研究奠定了基础,为VDR与脂代谢及雄性生殖方面的研究提供了新思路。
- 左甜甜刘欢王令路宏朝王珊珊张涛
- 关键词：维生素D受体睾丸间质细胞
- 酵母双杂交筛选与小鼠维生素D受体互作的蛋白被引量：1
- 2018年
- 通过酵母双杂交实验技术筛选小鼠VDR相互作用的蛋白质,评价不同蛋白与VDR的结合活性,以期获得基于互作影响雄性生殖能力基因。扩增小鼠VDR完整CDS序列,克隆至诱铒表达载体pGBKT7,经菌落PCR、DNA测序鉴定,获得重组载体pGBKT7-VDR。随后将重组载体转化至酿酒酵母AH109,并进行毒性和自激活检测;然后与含小鼠cDNA文库的Y187酵母杂交,获得阳性克隆,经HindⅢ酶切,测序分析VDR互作候选蛋白的核酸序列,再检测β-半乳糖苷酶活性,评价候选蛋白与VDR作用力的强弱。结果表明,从小鼠cDNA文库中获得12个与VDR互作的候选蛋白。初步检测到12个蛋白可能与VDR互作,其中3个蛋白因子可能与VDR结合并调控蛋白激酶磷酸化或去磷酸化以影响精子形成、发育和精子活力。
- 张涛白皓王令路宏朝杜伟立刘欢杨理凯
- 关键词：维生素D受体酵母双杂交雄性生殖
- VDR对雄性小鼠生殖与脂代谢影响及相关基因表达调控研究
- 维生素D受体(Vitamin D Receptor,VDR)是一种核转录因子,属于类固醇激素/甲状腺激素受体超家族成员。VDR在睾丸间质细胞、支持细胞、精子等多种生殖细胞中广泛表达,表明其与雄性生殖间的密切关系。本课题前...
- 刘欢
- 关键词：维生素D受体雄性生殖脂代谢睾丸间质细胞
- 文献传递
- 小鼠中年期和老年期睾丸组织转录组分析被引量：2
- 2018年
- 为丰富小鼠睾丸组织转录组研究领域的基础数据,对中年期(180日龄)和老年期(360日龄)小鼠睾丸组织进行转录组测序分析,在中、老年期分别获得25 187 980个和28 840 576个可用Reads,比对到参考基因组上的Reads分别有18 861 721和22 355 657个,占总读数的74.88%和77.51%,并检测到中、老年期小鼠睾丸组织中分别有17 770和18 073个基因表达。以中年期为对照,老年期睾丸组织中下调基因122个,上调基因185个,其中可清楚注释的基因共285个。GO分析发现285个差异表达被归纳到生物过程、细胞组分与分子功能3个大类的25个小类,主要涉及膜、氧化还原过程、转运蛋白活性、生殖发育及衰老等。KEGG分析发现差异表达基因涉及139个信号通路,主要代谢通路为信号转导、脂代谢、碳水化合物代谢、内分泌系统和神经系统等生物学机制。差异表达基因中RPKM>1的有57个,其所涉及信号通路主要为脂代谢、固醇类激素生成、TNF信号通路、补体系统、胰岛素和溶酶体等。
- 张涛杨理凯路宏朝王令刘欢左甜甜
- 关键词：小鼠睾丸差异表达基因
- 汉中地区不同黑稻品种查尔酮合成酶基因的遗传变异分析
- 2016年
- 为汉中黑稻起源及其花青苷合成机制提供分子遗传依据,通过分析汉中地区8个黑稻品种和其他植物查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因序列,利用PCR扩增8个黑稻品种查尔酮合成酶基因并测序,使用DNAMAN和MEGA5.0软件分别对水稻的CHS基因外显子序列进行比对和不同物种间的聚类。结果表明:水稻种内存在4个多态位点,8种黑稻中存在3个多态位点,比对CHS氨基酸序列,仅黑宝品种存在1个氨基酸突变。经聚类分析,8种黑稻亲缘关系最近,与籼稻聚为一类,然后与粳稻聚在一起,禾本科植物CHS同源性很高。结论:CHS是一个古老的基因,可作为种属鉴定的参考基因,CHS虽是花青苷合成的限速酶基因,但其序列的变异可能与黑稻花青苷的合成无相关性。
- 李蕊清刘欢田蕾铭路宏朝张力瑞张辉张涛
- 关键词：黑稻查尔酮合酶
- 一种履带式工程车辆辅助攀爬装置
- 本实用新型公开一种履带式工程车辆辅助攀爬装置，包括与板车铰接的承力机构和设置在承力机构上的支腿，所述承力机构包括两个平行设置的主承力梁，两个主承力梁之间设置用于工程车辆行走的承力板以及位于承力板下方且用于支腿插接定位的承...
- 刘欢
- 文献传递
- 基于抑菌杀菌的多靶点CRISPR/Cas9表达载体
- 本发明公开了一种基于抑菌杀菌的多靶点CRISPR/Cas9表达载体，该基于抑菌杀菌的多靶点CRISPR/Cas9表达载体的基因序列为SEQ ID NO1；Cas9表达载体基因序列为SEQ ID NO2；构建方法利用导向R...
- 王令张涛路宏朝杜伟立尹亚军杨理凯郭苗刘欢尹美晨李蕊清
- 文献传递
- 一种计算机信息安全防护装置
- 本实用新型公开了一种计算机信息安全防护装置，包括FPGA开发板、USB接口模块及PC终端，FPGA开发板内设有SOPC模块和AES加密模块，SOPC模块用于实现PC终端与FPGA开发板的信号互通，SOPC模块控制USB接...
- 刘欢
- 文献传递
- 精原干细胞在转基因小鼠生产中的研究进展被引量：1
- 2019年
- 精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs)是雄性动物体内的一类生殖干细胞,可以增殖分化形成大量生殖细胞,修饰精原干细胞基因组是生产转基因动物的有效方法之一。精原干细胞介导转基因小鼠的研究比较系统,本研究对精原干细胞的分离纯化以及体内外介导精原干细胞制备转基因小鼠的方法进行系统阐述和比较,为利用该方法研究其他转基因动物提供借鉴。本研究还讨论了基因编辑技术修饰精原干细胞,产生转基因动物在基因功能研究和疾病模型构建方面的研究前景。
- 刘欢李蕊清杨理凯尹美辰张涛
- 关键词：精原干细胞转基因小鼠
