徐雪琴
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肌营养不良蛋白及其衍生物的表达与定位的研究被引量：3
- 2015年
- 目的研究肌营养不良蛋白(DG)及其衍生物α-DG、β-DG在真核细胞内的表达与定位。方法构建pcDNA3.1-DAG1-FLAG、pcDNA3.1-DAG1α-FLAG和pcDNA3.1-DAG1β-FLAG 3个真核表达质粒,并分别转染至HEK 293T细胞中;提取总蛋白,Western blot检测表达情况;分别转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察细胞定位情况。结果成功构建了带有DAG1、DAG1α、DAG1β基因的真核表达载体,且在HEK 293T细胞中都能有效表达,在COS7细胞中主要分布于细胞质。结论DG及其衍生物α-DG、β-DG在HEK293T、COS7细胞中均有表达,主要分布在细胞质内,为进一步了解DAG1的功能提供了细胞学基础。
- 钱成王蓓华徐雪琴潘林鑫李新颖刘晓颖范礼斌
- 关键词：转染基因表达
- 人β4GalTⅡ基因在哺乳动物细胞株中的表达与定位
- 2015年
- 目的运用基因克隆技术构建人源β1,4-半乳糖转移酶Ⅱ(β4Gal TⅡ)真核表达质粒,并将其转染到COS7细胞中,观察蛋白在细胞内的定位,同时转染到HEK 293T细胞中检测其表达。方法分别设计带FLAG标签和GFP标签的β4Gal TⅡ基因的特异性引物,以含人β4Gal TⅡ全长c DNA序列为模板,定向构建到pc DNA3.1(+)及p CDGFP真核表达载体中,构建重组表达质粒。通过酶切和测序鉴定阳性重组质粒,利用Lipofectamine 2000分别转染COS7、HEK 293T细胞,免疫荧光显微镜观察重组蛋白在细胞内的定位,Western blot法鉴定重组蛋白的表达。结果成功构建pc DNA3.1-β4Gal TⅡ-FLAG和p CDGFP-β4Gal TⅡ重组表达载体,定位实验表明:β4Gal TⅡ-FLAG和GFP-β4Gal TⅡ二者在COS7细胞中均主要定位在细胞核周围,并有明显的块状染色,胞核中未见明显分布;Western blot法检测显示重组β4Gal TⅡ蛋白在HEK 293T细胞中稳定表达。结论获得了人β4Gal TⅡ的真核表达质粒,并能在COS7和HEK 293T细胞中表达,为进一步研究β4Gal TⅡ的功能及其与其他蛋白的相互作用奠定了一定基础。
- 徐雪琴潘林鑫耿慧武刘晓颖范礼斌
- 关键词：转染细胞定位蛋白表达
- 人RACK1蛋白在HEK-293T和BL21细胞中的表达及COS7细胞的定位被引量：5
- 2014年
- 目的构建可以表达有活性的蛋白激酶C受体(RACK1)的重组质粒,检测其在细胞内的表达与定位情况。方法设计上下游引物,以RACK1全长cDNA序列为模板,PCR扩增出RACK1序列,分别构建到载体pcDNA3.1和pGEX-5X-3。转染pcDNA3.1-FLAG-RACK1到人胚胎肾细胞(HEK-293T)和非洲绿猴肾成纤维细胞(COS7细胞),转化pGEX-5X-3-RACK1到大肠杆菌BL21感受态细胞中表达,Western blot法和考马斯亮蓝染色法检测RACK1表达情况,免疫荧光法研究其细胞内定位。结果成功构建了pcDNA3.1-FLAG-RACK1和GEX-5X-3-RACK1重组质粒。Western blot证明了其在HEK-293T细胞中的表达,考马斯亮蓝染色显示其在BL21菌株也能大量表达,免疫荧光显示RACK1在COS7的细胞核与细胞质中均有分布。结论人RACK1在HEK-293T细胞和BL21菌株中均能有效表达,在COS7细胞的胞质、胞核均有分布,为进一步研究人RACK1基因的功能奠定了基础。
- 乔正赵健潘林鑫李春雨徐雪琴刘晓颖范礼斌
- 关键词：RACK1基因表达细胞定位BL21
