尚绪增
- 作品数：5 被引量：19H指数：3
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划黑龙江省教育厅科学技术研究项目黑龙江省青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 鹅细小病毒野毒株VP3基因的原核表达及抗原性检测被引量：7
- 2009年
- 根据发表的鹅细小病毒(GPV)基因序列设计合成了2对检测GPV的特异性引物,用其对疑似小鹅瘟的病料进行PCR检测,经序列比对后确定为GPV感染;利用引物Gs/Ga扩增获得的GPV野毒株VP3基因,测序后将VP3基因连接到原核表达载体pET-30a上,获得重组质粒pET-30a-VP3,将其转化感受态菌Rosetta(DE3)pLysS中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析。结果显示,重组菌可表达出分子质量约为66 000 u的重组融合蛋白,表达的蛋白以包涵体形式存在于菌体中。表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化,获得了纯度较高的目的蛋白。Western-blot分析结果显示,纯化的蛋白能与GPV阳性血清发生特异性反应,证实表达的蛋白具有较好的抗原性。
- 鞠环宇卫娜尚绪增荆志强郭鹭马波王君伟
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因原核表达纯化抗原性
- 禽流感病毒M1抗体间接阻断ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2009年
- 以禽流感病毒(AIV)重组M1蛋白作为检测抗原,兔抗M1血清为阻断抗体,建立了检测AIVM1抗体的间接阻断ELISA方法。经筛选确定,抗原最佳包被浓度为0.78μg/mL,阻断抗体最佳稀释度为1∶15000,待检血清最佳稀释度为1∶10。用该ELISA方法对38份AIV阳性禽类样本和26份AIV阴性禽类样本进行检测,结果显示,该方法的敏感性为97.37%,特异性为96.15%。交叉试验证明该方法与新城疫等8种其他禽病阳性血清不发生交叉反应。用该ELISA方法对268份已知HI效价的临床样品进行检测,结果与HI的符合率达92%以上。表明,建立的间接阻断ELISA方法可用于AIV抗体的检测和禽流感的流行病学调查。
- 王兆鹏尚绪增刘思莹马波王君伟
- 关键词：禽流感病毒
- 鹅细小病毒NS2蛋白间接ELISA方法的建立被引量：4
- 2010年
- 为建立检测鹅细小病毒(GPV)的间接ELISA方法,本研究表达了GPV重组NS2蛋白,并以Ni-NTA亲和层析柱纯化的蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA检测方法,并进行抗体消长规律的检测。用该方法检测阴性血清样本30份,确定检测临界值为0.281。与琼脂扩散试验结果的阳性符合率为100%,阴性符合率为86.67%。与抗鹅H5、H7、H9亚型禽流感病毒阳性血清和抗鹅副粘病毒阳性血清无交叉反应。在此基础上组装检测试剂盒,试剂盒批内变异系数为4.2%,批间变异系数为8.3%,包被抗原的酶标板在4℃可保存6个月。该方法对人工感染GPV血清检测结果表明,接种病毒后第8周,NS2蛋白的抗体水平达到峰值。本研究为GPV流行病学调查提供了一种快速、方便、敏感的抗体检测方法。
- 尚绪增张雅为王兆鹏鞠环宇马波王君伟
- 关键词：小鹅瘟间接ELISA
- 重组鸡痘病毒rFPV-VP3-F的遗传稳定性及在鸡体内的表达被引量：1
- 2009年
- 为了评价重组禽痘病毒rFPV-VP3-F的遗传稳定性,将rFPV-VP3-F在鸡胚成纤维细胞(CEF)连续培养20代。对第5、10、15和20代病毒的F基因进行扩增及序列分析,未发现F基因发生氨基酸改变;通过间接免疫荧光方法检测各个代次rFPV-VP3-F中F基因特异表达的情况;将rFPV-VP3-F和禽痘病毒FPV017分别接种于35日龄商品鸡,在免疫后第7、14、21、28、35 d采集各组血清,检测中和抗体效价。结果显示,F基因在重组禽痘病毒中可以稳定遗传,可在CEF中表达相应蛋白,可刺激鸡产生相应的抗体。
- 李丹王君伟于志丹赵妍尚绪增鞠环宇杨雪晶
- 关键词：重组鸡痘病毒中和抗体
- 禽流感病毒NS1抗体间接阻断ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2009年
- 以禽流感病毒(AIV)重组NS1蛋白作为检测抗原,兔抗NS1血清为阻断抗体,建立了检测AIVNS1抗体的间接阻断ELISA方法。经筛选确定,抗原的最佳包被浓度为0.6μg/mL,阻断抗体的最佳稀释度为1∶10000,待检血清最佳稀释度为1∶10。用该方法对42份AIV感染禽类血清样本和50份用AIV灭活疫苗免疫的禽类血清样本进行检测,结果显示,该方法的敏感性为95.2%,特异性为90.0%。交叉反应试验证明,该方法与新城疫等8种其他禽病阳性血清不发生交叉反应。临床检测结果显示,186份AIV灭活疫苗免疫禽血清样本的阴性率为89.2%,20份基因工程疫苗免疫禽血清样本的阴性率为95.0%,42份健康非免疫禽血清样本的阴性率为100%。表明,建立的间接阻断ELISA方法可用于区分AIV自然感染禽和疫苗免疫禽。
- 王兆鹏尚绪增孙进华高明春马波王君伟
- 关键词：禽流感病毒NS1蛋白
