吴丽双
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中南大学资源加工与生物工程学院更多>>
- 发文基金：湖南省研究生科研创新项目湖南省自然科学基金湖南省科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程环境科学与工程更多>>
- RT-PCR检测毕赤酵母外源β-甘露聚糖酶基因拷贝数被引量：2
- 2014年
- 利用荧光定量PCR方法检测毕赤酵母外源β-甘露聚糖酶基因(man)拷贝数。以毕赤酵母中高度保守基因三磷酸甘油醛脱氢酶基因(gap)为内参基因,分别构建含有gap和man的克隆质粒,进行RT-PCR反应构建gap和man双标准曲线;获得的双标准曲线具有良好的重复性,其相关系数(R2)均为0.999,其扩增效率分别为105.1%和102.2%。提取含有外源man基因的毕赤酵母基因组进行RT-PCR检测,通过双标准曲线计算出外源man基因的拷贝数。结果显示:预先经过博莱霉素(Zeoicn)抗性筛选得到的10株毕赤酵母重组菌株中含有1、2、3、4、5和7个不等拷贝的β-甘露聚糖酶基因。结果表明该方法能够高效快速筛选和鉴定出含有不同外源β-甘露聚糖酶基因拷贝数的毕赤酵母重组菌株。
- 林福来周洪波郑甲郭宁吴俊子吴丽双
- 关键词：实时荧光定量PCR毕赤酵母基因拷贝数Β-甘露聚糖酶
- 响应面分析优化产木聚糖酶毕赤酵母基因工程菌培养条件
- 2012年
- 研究不同碳源、氮源和无机盐对毕赤酵母AX181菌株产木聚糖酶的影响。实验表明,分别采用葡萄糖和玉米浆干粉为碳源和氮源可以明显提高木聚糖酶的产量。无机盐单因子优化实验显示添加适量的(NH_4)_2SO_4、KH_2PO_4、MnSO_4·H_2O、FeSO_4·7H_2O也可以部分提高木聚糖酶产量。在此基础上利用响应面法优化毕赤酵母产木聚糖酶培养基,利用12次实验的Plackett-Burman设计实验筛选出影响产木聚糖酶的3个主要因素,即玉米浆干粉、MnSO_4·H_2O和FeSO_4·7H_2O。并进一步通过最陡爬坡路径逼近最大响应区域,采用中心组合实验设计确定最佳条件。优化后的产木聚糖酶培养基组分为(g/L):葡萄糖40.00,玉米浆干粉80.84,(NH_4)_2SO_4 6.25,KH_2PO_4 1.25、MnSO_4·H_2O 0.35,FeSO_4·7H_2O 1.31。培养基优化后,实际产酶2 883.86 U/mL,是优化前YPD培养基产酶的2.51倍。
- 郭宁赵伟郑甲田健吴丽双周洪波
- 关键词：木聚糖酶培养基优化毕赤酵母
- P.phragmitetus发酵条件优化及其所产絮凝剂的应用研究
- 2014年
- 在LB培养基的基础上,对P.phragmitetus的生长特性进行研究,发现P.phragmitetus所产絮凝剂的表达与菌体呈正相关,且倾向于在碱性条件(pH=7.5)下生长和产生絮凝剂。选择察氏培养基为基础发酵培养基,发现P.phragmitetus产絮凝剂最佳碳源为葡萄糖,氮源为蛋白胨,最适碳氮比为4∶1。以该菌所产絮凝剂粗品和脱色剂双氰胺甲醛树脂对模拟的活性染料废水进行联合处理。结果表明,微生物絮凝剂投加量为40μg/mL,脱色剂用量为100μg/mL时,脱色率达到90%。相对于传统化学处理工艺,该联合处理工艺所需脱色剂和絮凝剂用量都更少。
- 田健吴丽双周洪波
- 关键词：微生物絮凝剂脱色剂
- 温度对β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响被引量：1
- 2013年
- β-甘露聚糖酶已经广泛的在毕赤酵母中异源表达,为了提高β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的产量,本文研究了培养温度对β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响。通过比较不同温度下β-甘露聚糖酶在转录和蛋白表达水平的差异,发现降低温度虽然降低了mRNA表达量,但是外源蛋白得到积累增加;降低培养温度可以显著提高重组菌株的活性,从而减少细胞死亡带来的胞内蛋白酶的释放,最终使得低温下发酵液中的蛋白酶活力显著下降。研究结果表明降低培养温度能显著提高β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的表达量。
- 周洪波林福来郑甲郭宁吴俊子吴丽双邱冠周
- 关键词：Β-甘露聚糖酶MRNA表达培养温度
- 普鲁兰酶基因在毕赤酵母中组成型表达及定点突变研究被引量：1
- 2013年
- 合成Bacillus acidopullulyticus的全长普鲁兰酶基因并在毕赤酵母X-33中进行组成型外分泌表达,重组酶的最适作用温度为60℃,最适作用pH值为4.5～5.0,酶比活力为2.0 U/mg。采用重叠延伸PCR方法对普鲁兰酶基因进行定点突变,实验结果表明,625、626位点Ala、Leu氨基酸突变为Leu、Tyr氨基酸后,该酶的催化效率有所降低,而Gln487Ala的突变对催化效率没有较大的影响。该研究结果为探究关键氨基酸区域对催化效率的影响提供了一定的理论和实验基础。
- 吴丽双田健郑甲郭宁王玉光周洪波
- 关键词：普鲁兰酶BACILLUS毕赤酵母定点突变
