- Smad3 WT、Smad3 EPSM、Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株的建立与功能研究被引量：4
- 2016年
- 目的建立Smad3 WT、Smad3 EPSM及Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株,探究单纯转染3种质粒及选择性上调p Smad3C、p Smad3L对HepG2细胞功能的影响。方法采用脂质体转染试剂盒将Smad3 WT(野生型Smad3基因)、Smad3 EPSM(Smad3L区磷酸化位点突变)、Smad3 3S-A(Smad3C区磷酸化位点突变)3种质粒转染至HepG2细胞中,经G418筛选阳性细胞,Western blot法鉴定3种质粒稳转细胞株的转染效率。MTT法检测细胞增殖情况。流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果 Western blot结果显示,转染相应质粒的HepG2细胞高表达目的蛋白,提示稳转细胞株构建成功。MTT结果显示,在缺乏TGF-β_1刺激情况下,转染3种质粒后对HepG2细胞增殖几乎没有影响,TGF-β_1能够诱导稳转细胞株的细胞增殖,且转染Smad3 EPSM质粒的HepG2细胞,较未转染、转染Smad3 WT或Smad3 3S-A质粒的HepG2细胞对TGF-β_1诱导的细胞增殖反应减弱。细胞周期分析显示,TGF-β_1刺激下,转染Smad3 EPSM质粒组G_0/G_1期细胞数明显增多,而转染Smad3 3S-A质粒组G_2/M期细胞数增加明显。细胞凋亡检测显示,TGF-β_1刺激下,较未转染和转染Smad3 WT质粒组,转染Smad3 EPSM质粒组细胞凋亡率明显增加,而转染Smad3 3S-A质粒组细胞凋亡率明显降低。结论成功建立Smad3 WT、Smad3 EPSM及Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株,为进一步探讨开发能够经由调控p Smad3C、p Smad3L的药物提供一定的基础。
- 吴佳俊江宇峰伍超马滢陈宁陶李芬芳张雨露赵享龙杨雁
- 关键词：SMAD3SMAD3SMAD3HEPG2细胞稳定转染
- 丹酚酸B调控pSmad3C/pSmad3L发挥抗肝纤维化—肝细胞癌作用
- 目的1.构建二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine,DEN)诱导小鼠肝纤维化-肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)动态模型,模拟肝纤维化-肝细胞癌发生发展过程。2.观察丹酚酸B...
- 马滢
- 关键词：丹酚酸B肝纤维化肝细胞癌转化生长因子-Β1
- 文献传递
- 丹酚酸B调控pSmad3C/pSmad3L发挥抗肝纤维化-肝细胞癌作用被引量：18
- 2018年
- 目的观察丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)诱导小鼠肝纤维化-肝细胞癌进程的影响,并探讨Sal B经由p Smad3C/p21介导的抑癌信号、p Smd3L/PAI-1/c-Myc介导的促肝纤维化-肝癌信号转换机制。方法昆明种♂小鼠100只,随机分组,DEN诱导小鼠肝纤维化-肝细胞癌模型,不同剂量Sal B(15、30mg·kg^(-1)·d^(-1),ig)及阳性药秋水仙碱(0.2 mg·kg^(-1)·d^(-1),ig)干预。于造模第12周、第16周分批处死小鼠,肝脏活检,苏木精-伊红(HE)染色、Van Gieson(VG)染色观察肝组织病理学特征,Western blot法检测肝组织中p Smad3C、p S-mad3L、p21、纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1)及c-Myc蛋白表达。结果正常组肝脏表面光滑、质地柔软,模型组第12周时肝脏表面粗糙、质地变硬,第16周时肝脏表面可见弥漫性结节、质地坚硬;而丹酚酸B干预组以上病变明显改善。HE及VG染色显示,正常组肝组织结构正常,模型组第12周时肝组织炎细胞浸润、胶原纤维增生,形成假小叶结构;第16周时肝小叶结构紊乱,细胞核变大、分裂相增多、异型性明显;Sal B干预组肝组织病变程度明显减轻。Western blot结果显示,正常组肝组织中p Smad3C、p Smad3L、PAI-1表达均较少,p21、c-Myc几乎不表达;模型组第12周时肝组织中p Smad3C无明显变化,p S-mad3L、PAI-1、p21表达增多,第16周时p Smad3C、p Smad3L、p21、PAI-1、c-Myc表达皆有增加;而Sal B干预组第12周时p Smad3C、p21表达明显增加,p Smad3L、PAI-1蛋白水平明显降低,第16周时p Smad3C表达明显增加,p21几乎无变化,p Smad3L、PAI-1、c-Myc表达明显降低。结论Sal B延缓DEN诱导的小鼠肝纤维化-肝细胞癌进程,其机制可能与调控p Smad3C/p21、p Smad3L/PAI-1/c-Myc信号转换有关。
- 马滢方萌伍超徐媛媛陶相明汪亭君罗镇杜保根杨雁
- 关键词：肝纤维化肝细胞癌纤溶酶原激活物抑制剂-1C-MYCP21丹酚酸B
