吕文娟
- 作品数：5 被引量：19H指数：2
- 供职机构：石河子大学农学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 库尔勒香梨组织培养的研究被引量：13
- 2016年
- 香梨果实肉质细腻,酸甜可口,是我国重要的出口创汇农产品之一。目前,香梨普遍存在坐果率低、产量不稳定的问题,通过组织培养进行遗传转化改良性状是当前果树高效育种的重要策略。本试验以库尔勒香梨茎段萌发的嫩芽为材料,通过离体组织培养,研究0.1%HgCl_2溶液消毒时间对外植体灭菌效果和褐化的影响,并探讨了适宜的增殖培养基和生根培养基配方。结果表明,库尔勒香梨组织培养过程中,0.1%HgCl_2消毒的适宜时间为5 min;适宜的增殖培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA+1.5 mg/L GA3;适宜的生根培养基为1/2MS+0.05 g/L AC+1.0 mg/L IBA。
- 刘小芳冯建荣梁晓桐吕文娟李文慧樊新民
- 关键词：库尔勒香梨消毒时间增殖
- '库尔勒香梨'SFBB-γ基因全长的克隆与序列分析
- [目的]克隆新疆特色梨品种'库尔勒香梨'花粉SFBB-γ基因全长序列,为梨亚科SFBB基因的功能鉴定提供更多的依据,为进一步探索自交不亲和机制、培育自交亲和品种奠定分子基础.[方法]以新疆轮台国家果树资源圃采集的'库尔勒...
- 吕文娟刘海楠刘小芳李文慧冯建荣
- 关键词：自交不亲和性RACE
- ‘库尔勒香梨’自交不亲和S-RNase等位基因全长的克隆与分析被引量：6
- 2017年
- ‘库尔勒香梨’是新疆重点发展的特色果树品种之一,具有自交不亲和性。本研究以新疆轮台国家果树资源圃栽培梨品种‘库尔勒香梨’为试材,利用梨S基因的保守序列设计合成的引物:‘FTQQYQ’/‘antiIIWPNV’初步确定‘库尔勒香梨’S-RNase等位基因型后,设计等位基因特异性引物,利用RT-PCR克隆两个花柱S-RNase等位基因cDNA片段,RACE(cDNA末端快速扩增)技术进行cDNA全长克隆,采用BLAST进行序列比对,Protparam等在线软件分析两个S-RNase等位基因的编码蛋白特性。根据NCBI上已登录的63条梨属S-RNase基因的全长序列,用DNAMAN软件对其氨基酸序列进行比对并用MEGA 4.0构建进化树。本试验从‘库尔勒香梨’中克隆得到了S_(22)-RNase(Gen Bank接受号:KX214125)/S_(28)-RNase(Gen Bank接受号:KX214124)等位基因cDNA的全长序列,为分子手段调控梨自交不亲和性状奠定了基础。S_(22)-RNase基因cDNA全长904 bp,ORF(开放阅读框)长684 bp,编码227个氨基酸;S_(28)-RNase基因cDNA全长921 bp,ORF长687 bp,编码228个氨基酸。BLASTP比对显示,这两个基因都具有保守的RNase-T2基因结构,属于RNase-T2家族。预测相对分子质量分别为25.6 k D和25.9 k D,等电点9.36和9.30,都属于亲水性蛋白。进化分析表明,‘库尔勒香梨’的S_(22)-RNase和S_(28)-RNase处在不同的两个分支上,表明两基因亲缘关系较远。
- 吕文娟冯建荣刘小芳刘海楠李文慧钟颖
- 关键词：库尔勒香梨自交不亲和S-RNASE基因
- ‘库尔勒香梨’SFBB-γ基因全长的克隆与序列分析
- 2018年
- 【目的】克隆新疆特色梨品种‘库尔勒香梨’花粉SFBB-γ基因全长序列,为梨亚科SFBB基因的功能鉴定提供更多的依据,为进一步探索自交不亲和机制、培育自交亲和品种奠定分子基础。【方法】以新疆轮台国家果树资源圃采集的‘库尔勒香梨’花粉为材料,参考NCBI上已登录的‘库尔勒香梨’SFBB基因(GQ456943)序列,自行设计6对基因特异性引物和8条RACE巢式引物,筛选合适的引物并通过RT-PCR和RACE技术克隆SFBB-γ基因全长,用DNAMAN软件预测其氨基酸序列,并通过ProtParam等在线预测软件对其进行生物信息学分析;选取NCBI上已登录的全部蔷薇科梨亚科SFBB基因以及部分蔷薇科李属自交不亲和SFB基因的全长序列,用Clustal X软件进行多重比对并用MEGA 4.0构建系统进化树。【结果】从自行设计的6对基因特异性引物和8条RACE巢式引物中,筛选出2对基因特异性引物:[B3F (5’-TCATCCTCCACTTGTATC-3’)/B3R (5’-TAAATCCGTCATCGTAG-3’);B6F (5’-ATGTCTCAGGTGCGTGAAAGTG-3’)/B6R (5’-TAAATCCGTCATCGTAG-3’)]和2条RACE巢式引物:[Outer3 (5’-AACTATTGTACCGTTTCTAAAGGATGG-3’)/Inner5 5’-ATGGGTAATGGACTACGATG-3’)],并通过RT-PCR和RACE技术,成功克隆到1个全长为1 227 bp的SFBB-γ基因(GenBank登录中)。该基因包含1个完整的开放阅读框,长度为1 191 bp,编码396个氨基酸。ProtParam等在线软件预测该蛋白为不稳定亲水性非分泌蛋白,主要参与转运和结合等能量代谢并在基质内起连接酶或裂合酶的作用。聚类分析发现,在69个与蔷薇科花粉自交不亲和性有关的基因中,SFBB基因与SFB基因明显地分成2类;在SFBB基因类中,梨属SFBB-α基因和SFBB-β基因聚成一亚类,其中包括苹果的4个SFBB基因和3个SFLB基因,而梨属SFBB-γ基因则单独聚成另一亚类。【结论】获得了‘库尔勒香梨’花粉SFBB-γ基因c DNA全长序列,该基因由1个F-box区和4个可变区(V1、V2、V3、V4)组成,全长1 127 bp,包�
- 吕文娟刘海楠刘小芳李文慧冯建荣
- 关键词：自交不亲和性RACE
- 库尔勒香梨自交不亲和SFBB-γ基因F-box区和可变区V3 RNAi表达载体的构建及遗传转化
- 2018年
- 目的为在分子水平应用RNAi(RNA interference)技术调控梨自交不亲和性状,培育自交亲和梨品种。方法基于本实验室获得的库尔勒香梨(Pyrus bretschneideri Rehd)自交不亲和品种花粉决定子SFBB-γ基因c DNA全长序列,选取SFBB-γ基因F-box区和可变区V3分别设计141 bp和120 bp的片段作为干扰序列,以棉花基因组DNA 242 bp的序列作为间隔片段,利用融合PCR (Fusion PCR)构建SFBB-γ基因发卡结构(intron-containing hairpin RNA,ihpRNA),酶切后与pCAMBIA1304植物表达载体相连,构建SFBB-γ基因RNAi表达载体并转化至农杆菌GV3101中。利用叶盘转化法转化到库尔勒香梨无菌叶片中,用GUS组织化学染色法鉴定侵染叶片。测序结果表明干扰F-box区获得的ihpRNA臂长为141 bp,茎环253 bp;干扰可变区V3获得的ihpRNA臂长为120 bp,茎环253 bp。结果说明SFBB-γ基因F-box区和V3区的ihpRNA结构融合成功。通过双酶切检验及PCR证实,SFBB-γ基因F-box区和V3区的RNAi表达载体p CAMBIA1304-RNAi-SFBB构建成功; PCR验证和测序结果也表明重组质粒已经成功转入农杆菌GV3101中,GUS染色检验获得蓝色,目的基因已整合进入库尔勒香梨叶片中。结论成功构建库尔勒香梨SFBB-γ基因F-box区及可变区V3的RNAi表达载体,为诱导香梨SFBB-γ基因转录后基因沉默及培育自交亲和梨品种提供参考。
- 钟颖冯建荣刘海楠李文慧吕文娟田雯
- 关键词：库尔勒香梨自交不亲和F-BOX
