符蓉
- 作品数：3 被引量：14H指数：3
- 供职机构：上海交通大学更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- FACSAria Ⅱ分选人肺腺癌A549细胞SP亚群的方法优化被引量：3
- 2016年
- 目的·通过优化流式分选人肺癌A549细胞SP亚群方法,提高SP亚群分选纯度并缩短分选时间,以提高分选活率。方法·制备单细胞悬液,不同终浓度维拉帕米孵育及Hoechst33342标记染色,经PI标记检测SP细胞比例。选择最佳染色浓度,100μm喷嘴,分选速度10μL/min,用一次分选法（纯度模式）和二次分选法（富集＋纯度模式）分选SP细胞和MP细胞,比较分选后纯度和分选用时。通过二次分选法获得SP细胞和MP细胞,分别行Lyso-Tracker Red/Hoechst 33342染色共聚焦观察和成瘤实验。结果·经二次分选法,SP细胞纯度达到99%以上,1×10～8个细胞分选时间〈5.2 h。共聚焦镜下观察到SP细胞大小与MP细胞无明显差异,MP细胞的溶酶体数量较SP细胞显著增多。Hoechst 33342均能染色,细胞活率不受影响。在小鼠成瘤实验中,SP细胞成瘤体积较MP细胞显著增大。结论·A549肺癌细胞Hoechst33342染色终质量浓度宜用6μg/mL;采用FACSAriaⅡ对其SP细胞进行二次分选,不仅显著提高SP细胞分选纯度,还大大缩短分选时间,细胞活率不受影响。
- 田烨赵犇鹏符蓉杨洁尹荟菁
- 关键词：侧群细胞细胞分选肿瘤干细胞
- 流式细胞仪MoFlo Astrios^(EQ)96孔板单细胞分选方法的条件优化被引量：8
- 2018年
- 目的·优化流式细胞仪MoFlo Astrios EQ 96孔板单细胞分选方法,为单细胞技术的应用奠定基础。方法·通过对仪器精确调节及各项参数优化,采用不同孔径喷嘴、不同分选方式对32D、U937、iBMDM和293T共4种细胞进行单细胞分选,观察分选后单细胞孔数以及单细胞所形成克隆孔数。结果·在单细胞分选模式下,70、100μm喷嘴分选获得单细胞的孔数分别为83~91、87~93孔。分选后的单细胞经7~10 d培养后,70μm喷嘴分选获得的单细胞所形成克隆的孔数为36~58孔;100μm喷嘴条件下电荷式分选、"无电"直接分选获得的单细胞所形成克隆的孔数分别为53~78、69~81孔。结论·进行单细胞分选时,选择100μm喷嘴和"无电"直接分选方式可得到较好的细胞活性与较高的细胞克隆率。
- 张小翠符蓉赵犇鹏
- 关键词：流式细胞仪单细胞培养
- 采用EDTA-胰酶处理难消化细胞株在凋亡检测分析中的可行性被引量：4
- 2015年
- 目的研究细胞胰酶消化液中有无EDTA对流式细胞术检测细胞凋亡率的影响。方法以7种难消化细胞株作为实验对象,分为对照组和H2O2组(加H2O2促凋亡)。采用不同方法(不含EDTA的0.25%胰酶、含EDTA的0.25%胰酶、含EDTA的0.25%胰酶消化离心弃上清之后用1×PBS洗1次)对细胞进行消化处理,利用Annexin V-FITC荧光抗体标记细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率。计算相同消化细胞条件下两组细胞的凋亡率差值。结果统计学分析结果显示:7种细胞株在3种消化细胞条件下的细胞凋亡率差值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论胰酶中含EDTA对流式细胞术检测细胞凋亡无显著影响;因此可以利用EDTA抗凝集这一特性,将其加入胰酶消化液中,用于某些难消化细胞株凋亡样品的制备。
- 符蓉赵犇鹏杨洁田烨
- 关键词：流式细胞术EDTA凋亡ANNEXIN胰酶
