田烨
- 作品数：12 被引量：19H指数：3
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- 相关领域：医药卫生环境科学与工程化学工程更多>>
- 流式细胞术在检测细胞氧化还原状态荧光蛋白探针中的应用
- 2018年
- 目的·探索流式细胞术检测基因编码的荧光蛋白探针ro GFP2的方法,比较其与经典的激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)检测方法的异同,探讨其在检测不同氧化还原状态细胞亚群中的应用价值。方法·用ro GFP2转染He La细胞,经H_2O_2处理后,采用LSCM技术和流式细胞术分别检测ro GFP2,以405 nm/488 nm荧光信号强度比值反映细胞氧化还原状态。转染胰腺癌细胞株Panc-1细胞,应用流式细胞术检测CD44和CD24不同标记细胞亚群的ro GFP2,比较干细胞与其他细胞氧化还原状态的异同。结果·与LSCM技术相比,流式细胞术也可检测H_2O_2引起的ro GFP2变化,且可区分群体中不同的亚群。Panc-1细胞中CD24^+/CD44^+肿瘤干细胞群与非干细胞群相比,ro GFP2比值更低,细胞处于更还原的状态。结论·流式细胞术可用于检测基因编码的氧化还原探针和特异地分析亚群的变化,可能将应用于肿瘤生物学、干细胞生物学等研究中。
- 田烨刘奥董瑞祁星易静杨洁
- 关键词：流式细胞术
- 电镜样品制备中四氧化锇配制方法探讨
- 2009年
- 目的:进一步优化透射电镜(TEM)样本固定液的条件,为选择更有效、更理想的固定液条件提供可靠的实验依据。探索出一种既节约四氧化锇(osmium tetroxide,OsO_4)又能获得良好的固定效果的浓度。方法:对照组:常规磷酸缓冲液配制1%OsO_4,实验组:生理盐水配制0.5%,0.6%,0.75%,0.9%和1%OsO_4,通过TEM观察不同浓度四氧化锇对肾组织的固定效果。结果:实验组五种浓度的OsO_4固定的肾组织与对照组常规磷酸缓冲液配制的1%OsO_4固定的肾组织细胞在电镜下观察均具有良好的反差和高质量的超微结构图像。结论:(1)0.5%,0.6%,0.75%,0.9%和1% OsO_4同样具有良好的固定效果,可应用于日常电镜样本制备工作中。(2)生理盐水配制OsO_4方法简单,效果良好,可减少常规方法中磷酸缓冲液不容易冲洗干净的弊端。(3)低浓度的OsO_4用量,大大节约了OsO_4消耗。
- 田烨朱平
- 关键词：超微结构固定液
- 硝化花粉对哮喘小鼠气道反应及炎性细胞因子水平的影响被引量：3
- 2014年
- 目的观察硝化花粉对哮喘小鼠气道反应及炎性细胞因子水平的作用。方法按免疫物及激发物的不同将60只小鼠分为5组,建立哮喘模型,采用体积描记法检测气道反应性、检查支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞学、CBA法测定血清和BALF中IL-17A、IL-10和TNF-α的含量。结果用硝化花粉免疫和激发哮喘组的气道反应性、BALF中EOS及NEU的数量、血清和BALF中IL-17A、IL-10和TNF-α的含量与其他哮喘模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论硝化花粉诱发的哮喘气道高反应更显著,释放更多炎性介质,造成更加严重的气道炎症。
- 杨玲田烨周妍康建强
- 关键词：尾气污染花粉气道反应性炎性介质
- 汽车尾气处理花粉对哮喘小鼠辅助性T细胞17/调节性T细胞的影响
- 杨玲徐欣欣周妍康建强田烨
- 柴油车尾气对小鼠肺部氧化应激作用及气道炎症变化的研究被引量：1
- 2016年
- 目的 观察柴油车尾气对小鼠肺脏的氧化应激及气道炎症、病理变化的影响。方法将36只6~8周龄的雄性小鼠随机分成三组：A组（对照组）、B组（小排量车尾气污染组）、C组（大排量车尾气污染组）,每组12只。柴油车尾气对小鼠染毒4周（B、C组小鼠分别吸入1.4 L、2.8 L排量的尾气）,A组正常饲养,观察所有小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞学、肺组织病理学变化,免疫组织化学检测核因子κB（NF-κB）的活化及硝基酪氨酸（3-NT）的表达。结果 B、C组小鼠BALF中的白细胞总数、淋巴细胞及中性粒细胞分类计数与A组比较,差异均有统计学意义（F=24.25、28.12、18.03,P均〈0.05）,且C组BALF中的淋巴细胞和中性粒细胞计数比B组更多（P均〈0.05）。同样在小鼠肺组织中,B、C组淋巴细胞和中性粒细胞计数与A组相比,差异均有统计学意义（F=20.35、12.61,P均〈0.05）,且C组肺组织中的淋巴细胞和中性粒细胞计数比B组更多（P均〈0.05）;另外B、C组肺组织内出现气道上皮细胞脱落、支气管周围炎性细胞浸润及基底膜纤维化等变化。免疫组织化学结果提示三组肺组织内NF-κB的活化[（6.5±2.4）%、（12.9±4.1）%、（19.4±6.4）%]及3-NT的表达（2.2±0.7、3.7±1.1、5.6±1.6）比较,差异均有统计学意义（F=23.90、24.35,P均〈0.05）,且C组表达都高于B组（P均〈0.05）。进一步相关性分析显示,小鼠肺组织中3-NT蛋白表达与NF-κB的蛋白表达、BALF中淋巴细胞数量都具有正相关性（r=0.659、0.633,P均〈0.05）。结论 柴油车尾气可促进小鼠肺组织的氧化应激,产生更多3-NT,从而激活NF-κB,产生更严重的气道炎症和病理改变。
- 杨玲徐欣欣田烨王根发周妍韩丽
- 关键词：柴油车尾气炎症NF-ΚB小鼠
- 汽车尾气污染花粉对哮喘小鼠免疫平衡的影响
- 目的 观察汽车尾气污染花粉对哮喘小鼠Th 17/Treg细胞比例失衡的作用.方法 60只小鼠按免疫及激发物的不同分为五组,建立哮喘小鼠模型,流式细胞术检测脾脏单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+细胞及CD4+IL-...
- 杨玲徐欣欣田烨周妍
- 汽车尾气处理花粉对哮喘小鼠辅助性T细胞17/调节性T细胞的影响
- 2016年
- 目的探讨汽车尾气污染艾蒿花粉,对哮喘小鼠辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)比例失衡的影响。方法选择60只6~8周龄的雄性BALB/c小鼠为研究对象。采用随机数字表方法,将60只受试小鼠随机分为A^D与对照组,共计5组,每组均为12只。A组变应原和激发物均为艾蒿花粉提取液;B组变应原为艾蒿花粉提取液,激发物为汽车尾气污染艾蒿花粉提取液;C组变应原为汽车尾气污染艾蒿花粉提取液,激发物为艾蒿花粉提取液;D组变应原和激发物均为汽车尾气污染艾蒿花粉提取液;对照组变应原和激发物均为磷酸缓冲液(PBS)。收集这5组受试小鼠肺组织、支气管肺泡灌洗液(BALF)和脾脏标本分别进行:1HE染色、高倍镜下观察各组小鼠肺组织病理学改变;2统计学比较各组小鼠BALF中IL-17A、-10含量及细胞计数、分类的差异;3统计学比较各组小鼠脾脏单个核细胞中Th17及Treg占CD4+T细胞比例,以及Th17/Treg比值的差异。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。结果 1A^D组哮喘小鼠均存在不同程度小支气管管腔收缩及周围组织炎性细胞浸润,以D组程度最严重。2A^D组哮喘小鼠BALF中,IL-17A含量均分别较对照组高,而IL-10含量均分别较对照组低,且差异均有统计学意义(P<0.01)。A^C组哮喘小鼠BALF中,IL-17A含量均分别较D组低,而IL-10含量均分别较D组高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。A^D组小鼠BALF中,细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)、中性粒细胞(NEU)分类计数,均分别较对照组高;A^C组BALF中EOS及NEU分类计数均分别较D组低,且差异均有统计学意义(P<0.05)。3A^D组小鼠脾脏单个核细胞中,Th17细胞占CD4+T细胞比例及Th17/Treg均分别较对照组高,而Treg细胞占CD4+T细胞比例均分别较对照组低,且差异均有统计学意义(P<0.01);其中D组小鼠脾脏单个核细胞中Th17/Treg较A组高,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论汽车尾气污染花粉诱发
- 杨玲徐欣欣周妍康建强田烨
- 关键词：花粉哮喘TH17细胞
- 采用EDTA-胰酶处理难消化细胞株在凋亡检测分析中的可行性被引量：4
- 2015年
- 目的研究细胞胰酶消化液中有无EDTA对流式细胞术检测细胞凋亡率的影响。方法以7种难消化细胞株作为实验对象,分为对照组和H2O2组(加H2O2促凋亡)。采用不同方法(不含EDTA的0.25%胰酶、含EDTA的0.25%胰酶、含EDTA的0.25%胰酶消化离心弃上清之后用1×PBS洗1次)对细胞进行消化处理,利用Annexin V-FITC荧光抗体标记细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率。计算相同消化细胞条件下两组细胞的凋亡率差值。结果统计学分析结果显示:7种细胞株在3种消化细胞条件下的细胞凋亡率差值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论胰酶中含EDTA对流式细胞术检测细胞凋亡无显著影响;因此可以利用EDTA抗凝集这一特性,将其加入胰酶消化液中,用于某些难消化细胞株凋亡样品的制备。
- 符蓉赵犇鹏杨洁田烨
- 关键词：流式细胞术EDTA凋亡ANNEXIN胰酶
- 多囊卵巢综合征和卵巢过度刺激综合征易感基因相关研究
- 背景:多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是最常见的妇科内分泌疾病,遗传学因素在其病因中扮演重要角色。前期中国女性PCOS的2个全基因组关联分析(genome-wide asso...
- 田烨
- 关键词：多囊卵巢综合征卵巢过度刺激综合征全基因组关联分析易感基因
- 文献传递
- FACSAria Ⅱ分选人肺腺癌A549细胞SP亚群的方法优化被引量：3
- 2016年
- 目的·通过优化流式分选人肺癌A549细胞SP亚群方法,提高SP亚群分选纯度并缩短分选时间,以提高分选活率。方法·制备单细胞悬液,不同终浓度维拉帕米孵育及Hoechst33342标记染色,经PI标记检测SP细胞比例。选择最佳染色浓度,100μm喷嘴,分选速度10μL/min,用一次分选法（纯度模式）和二次分选法（富集＋纯度模式）分选SP细胞和MP细胞,比较分选后纯度和分选用时。通过二次分选法获得SP细胞和MP细胞,分别行Lyso-Tracker Red/Hoechst 33342染色共聚焦观察和成瘤实验。结果·经二次分选法,SP细胞纯度达到99%以上,1×10～8个细胞分选时间〈5.2 h。共聚焦镜下观察到SP细胞大小与MP细胞无明显差异,MP细胞的溶酶体数量较SP细胞显著增多。Hoechst 33342均能染色,细胞活率不受影响。在小鼠成瘤实验中,SP细胞成瘤体积较MP细胞显著增大。结论·A549肺癌细胞Hoechst33342染色终质量浓度宜用6μg/mL;采用FACSAriaⅡ对其SP细胞进行二次分选,不仅显著提高SP细胞分选纯度,还大大缩短分选时间,细胞活率不受影响。
- 田烨赵犇鹏符蓉杨洁尹荟菁
- 关键词：侧群细胞细胞分选肿瘤干细胞
