孙一瑞
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 稳定表达小反刍兽疫病毒N蛋白的CHO细胞系的建立及表达产物的抗原性鉴定被引量：2
- 2016年
- 为制备具有天然抗原活性的小反刍兽疫病毒(PPRV)核衣壳(N)蛋白,本研究建立了稳定表达PPRV N蛋白的真核细胞系。首先,将去除核定位信号(NLS)编码序列并且在其5'端引入组织纤维蛋白溶酶原抗原信号肽(tPA SP)编码序列的PPRV N基因克隆至真核表达质粒pCAGG-neo中,构建了重组质粒pCAGG-N△NLS/his。并将其转染于CHO细胞中,经G418压力培养并采用间接免疫荧光试验(IFA)及western blot试验筛选鉴定,获得稳定表达PPRV N蛋白的细胞系。通过IFA及western blot试验鉴定His标签表明该细胞系传代至22代仍能够稳定表达PPRV N蛋白。最后通过western blot等试验表明该蛋白能够与绵羊抗PPRV多克隆抗体反应,进一步表明该细胞系表达的PPRV N蛋白具有天然的N蛋白抗原性,为PPRV病原学诊断等相关研究奠定了基础。
- 李翠翠孙一瑞王子龙陈伟业步志高
- 关键词：小反刍兽疫核衣壳蛋白CHO细胞细胞系
- 采用非洲地区广泛应用的绵羊痘弱毒株构建表达小反刍兽疫病毒H蛋白的重组疫苗被引量：4
- 2018年
- 为构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因的重组绵羊痘病毒(SPV),本研究利用e GFP报告基因和gpt筛选基因筛选纯化了PPRV H基因的重组SPV(rSPV-PPRV-H)。通过PCR、序列测定和间接免疫荧光的方法对rSPV-PPRV-H进行鉴定。结果显示PPRV的H基因重组至rSPV-PRRV-H中并表达PPRV H蛋白;同时病毒的生长曲线也显示外源H基因的插入并未影响亲本病毒的复制。将该重组病毒经皮内注射途径免疫绵羊,免疫剂量为105.5 TCID50,间隔4周,免疫两次,中和试验结果显示rSPV-PPRV-H免疫绵羊后能够诱导其产生高滴度的抗PPRV的特异性中和抗体,抗体转阳率为100%(6/6)。本研究为rSPV-PPRV-H作为PPRV疫苗提供了实验依据。
- 孙一瑞张敏敏李翠翠李博文陈伟业步志高
- 关键词：小反刍兽疫重组疫苗
