付强
- 作品数：13 被引量：7H指数：1
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- 钾通道四聚化结构域5对胰腺癌细胞恶性生物学行为的研究
- 2023年
- 目的探讨钾通道四聚化结构域5(KCTD5)对胰腺癌细胞的生物学行为的影响。方法生物信息学检测KCTD5在胰腺癌中184例mRNA及211例蛋白质中的表达水平,观察KCTD5的表达对胰腺癌患者预后的影响,进一步对数据库中所得数据进行单因素Cox回归分析。定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白免疫印迹法检测KCTD5在胰腺癌细胞株中的表达水平。转染KCTD5小干扰RNA至SW1990胰腺癌细胞中,分为si-NC、si-KCTD5-1、si-KCTD5-2组。细胞计数实验(CCK-8)实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测转染后胰腺癌细胞迁移及侵袭能力。结果生物信息学结果表明KCTD5在胰腺癌中的mRNA及蛋白表达水平显著高于正常组织;单因素分析及生存分析结果表明KCTD5可作为胰腺癌患者一种独立危险因素;qPCR结果表明KCTD5在正常人胰腺导管上皮细胞HPDE中的表达水平为1.10±0.18,在胰腺癌细胞株中的表达水平分别为SW1990(2.44±0.19)、PANC-1(1.65±0.15)、ASPC-1(2.15±0.12),KCTD5在胰腺癌细胞株中的表达水平明显升高(t=12.84,5.76,12.16,P均<0.05);转染后,CCK-8实验表明72 h后si-KCTD5-1、si-KCTD5-2、si-KCTD5-3组吸光度值分别为2.93±0.88、1.76±0.97、3.03±0.99,明显低于对照组(4.20±1.02,t=2.31、4.25、2.02,P均<0.05);降低KCTD5表达后Transwell实验中胰腺癌细胞的迁移能力和侵袭能力明显降低。结论胰腺癌中表达升高的KCTD5可促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,降低其表达后胰腺癌细胞上述能力降低。
- 韩彤罗乾坤付强刘攀赵澎博李文磊胡明星秦涛
- 关键词：胰腺癌增殖
- 微小RNA-33b-5p靶向ETS1在胰腺癌吉西他滨耐药中的作用
- 2023年
- 目的探讨微小RNA-33b-5p(miR-33b-5p)靶向E26转录因子-1(E26 transformation specific-1,ETS1)在胰腺导管腺癌(PDAC)吉西他滨耐药中的作用。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测胰腺癌细胞ASPC-1和胰腺癌耐药细胞ASPC-1/GEM中miR-33b-5p和ETS1的表达水平,双荧光素酶报告实验验证miR-33b-5p与ETS1之间的靶向关系;免疫组织化学染色检测PDAC患者敏感组与抵抗组ETS1的表达;转染ASPC-1/GEM细胞,分为NC mimic组、miR-33b-5p mimic组、ETS1小干扰RNA(siRNA)NC组及ETS1 siRNA组,RT-qPCR检测转染后miR-33b-5p、ETS1 mRNA的表达水平,Western blot检测ETS1的表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性并计算吉西他滨半数抑制浓度(IC_(50)),流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果与ASPC-1细胞比较,ASPC-1/GEM细胞株中miR-33b-5p表达下降(t=-11.011,P<0.05)、ETS1表达升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验表明miR-33b-5p可明显降低野生型ETS1-33b-5p-WT载体荧光素酶活性(t=-4.453,P<0.05);免疫组织化学结果显示ETS1在抵抗组中表达量明显高于敏感组(8.11±2.80比2.78±0.83,P<0.05);miR-33b-5p mimic组IC_(50)明显低于NC mimic组[(25.10±1.77)μmol/L比(43.63±3.04)μmol/L,t=-9.110,P<0.05],miR-33b-5p表达量明显高于NC mimic组(t=19.444,P<0.05),ETS1的表达量明显低于NC mimic组(P<0.05),凋亡率明显高于NC mimic组[(18.8±1.9)%比(5.3±0.4)%,t=12.239,P<0.05];ETS1 siRNA组吉西他滨IC_(50)明显低于ETS1 siRNA NC组[(20.39±0.89)μmol/L比(37.38±2.62)μmol/L,t=-10.628,P<0.05]。结论miR-33b-5p可能通过抑制ETS1表达促进PDAC对吉西他滨化疗的敏感性。
- 李文磊付强刘攀张旭罗乾坤禹鹏飞秦涛
- 关键词：胰腺癌吉西他滨耐药
- 缝隙连接结合蛋白2在胰腺癌相关成纤维细胞中表达和对胰腺癌侵袭、转移的影响
- 2023年
- 目的探究缝隙连接结合蛋白2(GJB2)在胰腺癌相关成纤维细胞(CAF)的表达和对胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法收集河南省人民医院39例胰腺癌标本和其对应癌旁组织,培养原代CAF和正常胰腺成纤维细胞(NF)以及胰腺癌类器官。测序分析CAF与NF基因表达差异。免疫组化染色进行GJB2表达评分,根据病理结果将标本分为T分期>2组和T≤2组,N>0组和N=0组,有神经浸润组和无神经浸润组。采用t检验评估不同分组GJB2表达评分差异,免疫组化染色进行GJB2表达评分,根据病理结果将标本分为T分期>2组和T≤2组,N>0组和N=0组,有神经浸润组和无神经浸润组。使用t检验评估不同分组GJB2表达评分差异,分析GJB2在CAF中表达量与患者预后相关性。设计GJB2过表达序列并构建载体,转染NF,蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后NF中GJB2表达量。将GJB2过表达组设为实验组(OE-NF),转染空载质粒NF设为对照组(OE-NC),分别与胰腺癌细胞、胰腺癌类器官共培养,Transwell实验和侵袭胶实验,采用t检验评估两组细胞影响下胰腺癌细胞的转移能力和侵袭能力差异。结果测序结果显示GJB2在CAF表达量高于NF(log2FoldChange:-5.37 pval:1.34e-04<0.05),免疫组织化学结果显示GJB2在T分期>2组表达量(11.310±0.221)较T≤2组(9.261±0.542)明显升高,差异有统计学意义(t=3.99,P<0.01)。N>0组表达量(10.950±0.249)较N=0的组(9.313±0.669)升高,差异有统计学意义(t=2.857,P<0.05)。神经浸润组(11.600±0.193)较无神经浸润组(9.625±0.442)升高,差异有统计学意义(t=4.563,P<0.01)。Kaplan-Meier生存分析结果显示GJB2高表达组患者3年总生存期明显低于低表达组[风险比(HR)=2.50(1.26~4.96),P<0.01]。Transwell迁移实验中OE-NF组穿出数量(20.200±2.417)多于OE-NC组(6.600±1.288,t=4.966,P<0.01),且Transwell侵袭实验中OE-NF组(343.80±19.440)引导肿瘤细胞穿出数量多于OE-NC组(66.380±3.914,t=13.99,P<0.01)。结论GJB2在CAF�
- 刘佳音刘传江付强罗乾坤刘攀张宏伟
- 关键词：胰腺癌
- 活化激酶C受体1对胆管癌细胞迁移和侵袭能力的影响被引量：5
- 2021年
- 目的:检测活化激酶C受体1(RACK1)在胆管癌细胞中的表达,探讨其对胆管癌细胞生物学表型的影响。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RACK1在人正常胆管上皮细胞HIBEC和2株胆管癌细胞RBE、HUH28中的表达水平。采用t检验分析RACK1细胞水平表达差异。慢病毒构建RACK1低表达稳定株,分为sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组和阴性对照组(NC-RACK1组),qPCR检测其转染效率;Transwell实验检测胆管癌细胞的迁移和侵袭能力。采用t检验分析敲低RACK1后胆管癌细胞的迁移和侵袭能力变化。结果:qPCR结果显示RACK1在RBE、HUH28胆管癌细胞株中的表达量(3.45±0.92、3.21±0.33)明显高于人正常胆管上皮细胞HIBEC(1.43±0.58,t=21.965、24.153,P<0.01),差异均有统计学意义;Western blot结果表明RACK1在RBE和HUH28胆管癌细胞株中的表达水平明显高于人正常胆管上皮细胞HIBEC;Transwell迁移实验结果提示RBE中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量为[(261.89±8.65)、(231.07±9.73)个/视野],明显低于NC-RACK1组[(430.19±10.15)个/视野,t=30.684、24.380,P<0.01],差异均有统计学意义;HUH28中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量[(253.57±7.28)、(210.11±6.09)个/视野]低于NC-RACK1组[(424.78±8.03)个/视野,t=35.442、36.781,P<0.01],差异均有统计学意义;侵袭实验结果表明RBE中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量为[(52.15±1.43)、(60.58±2.01)个/视野]明显低于NC-RACK1组[(125.39±4.03)个/视野,t=9.935、12.566,P<0.05],差异均有统计学意义;HUH28中sh-RACK1-1、sh-RACK1-2组细胞穿膜数量[(60.91±1.30)、(51.19±0.96)个/视野]低于NC-RACK1组[(150.88±7.28)个/视野,t=13.554、15.328,P<0.01],差异均有统计学意义。结论:RACK1在胆管癌细胞中表达上调,降低RACK1表达后可抑制胆管细胞迁移及侵袭能力,RACK1可促进胆管癌发生发展。
- 许立霞付强胡明星王玉柱秦涛
- 关键词：胆管癌迁移
- NKG2D配体在小鼠异位气管移植模型中的作用
- 2017年
- 目的 观察小鼠异位气管移植后不同时间点NKG2D配体Rae-1和H60表达水平的变化，探讨其在肺移植后闭塞性细支气管炎（BOS）中的重要作用。方法 建立小鼠异位气管移植模型并于术后7、14、28 d取材。苏木素-伊红（HE）和Mallory染色形态学观察，并检测术后气管闭塞率，实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测不同时间点移植物Rae-1和H60的mRNA表达；免疫组织化学检测不同时间点移植物的Rae-1和H60蛋白表达。结果 移植后随时间延长，HE染色提示BOS病理学不断进展，与对照组比较，气管移植物14 d和28 d管腔闭塞率不断增加[（30.82±7.61）%和（83.52±13.12）%比（3.75±1.78）%，P＝0.012、0.007]，Mallory染色和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达不断增强。RT-qPCR检测结果显示与对照组比较，移植后小鼠气管移植物14 d的H60（12.712 2±2.828 0比0.739 6±0.042 8，P＝0.014）和28 d的Rae-1 mRNA（10.464 9±2.109 1比0.617 6±0.041 3，P＝0.022）表达强度均明显提高。免疫组织化学检测结果显示气管移植物H60和Rae-1在蛋白水平表达分别在14 d（207.97±25.87比31.63±9.42，P＝0.023）和28 d（185.34±24.06比32.84±7.85，P＝0.026）明显高于对照组。结论 NKG2D配体可能参与了肺移植后BOS的发生发展，加强主要组织相容性Ⅰ类相关基因（MIC）配型或特意性阻断NKG2D通路有可能延缓并减少肺移植后BOS的产生。
- 唐强张宏伟薛飞刘传江付强贾鹏冲秦涛
- 关键词：肺移植闭塞性细支气管炎NKG2D
- DNA损伤结合蛋白2抑制肝门部胆管癌上皮-间充质转化及转移的作用被引量：1
- 2016年
- 目的观察DNA损伤结合蛋白2（DDB2）在肝门部胆管癌上皮-间充质转化及转移中的作用。方法构建DDB2干扰质粒和高表达质粒，经反转录病毒稳定转染肝门部胆管癌细胞株QBC939细胞，建立DDB2沉默及高表达稳定转染细胞株。通过Western blot检测上皮-间充质转化标志物[E-钙黏蛋白（E—cadherin）和波形蛋白（Vimentin）]表达变化；经划痕实验及Transwell迁移实验检测QBC939细胞迁移能力改变；经Matrigel侵袭实验检测QBC939细胞侵袭能力改变。结果在QBC939细胞中沉默DDB2能够明显抑制上皮细胞标志物E—cadherin的表达而促进间质细胞标志物（Vimentin）的表达，在Transwell实验中可增强细胞的迁移能力[（100．00±5．37）％比（214．66±10．04）％，P〈0．05]，在Matrigel实验中可增强细胞的侵袭能力[（100．00±11．18）％比（238．02±32．46）％，P〈0．05]同时增强细胞的迁移和侵袭能力；在QBC939细胞中高表达DDB2能够明显促进上皮细胞标志物E-cadherin的表达而抑制间质细胞标志物（Vimentin）的表达，在Transwell实验中可降低细胞的迁移能力[（100．00±18．76）％比（49．31±10．21）％，P〈0．05]，在Matrigel实验中可降低细胞的侵袭能力[（100．00±12．81）％比（35．37±4．92）％，P〈0．05]。同时降低细胞的迁移和侵袭能力。结论DDB2能够抑制肝门部胆管癌细胞上皮一间充质转化及转移。
- 胡明星付强王玉柱秦涛
- 关键词：肝门部胆管癌上皮-间充质转化
- 斑菲素蛋白3在胰腺癌中的表达及其与肿瘤增殖、迁移的关系
- 2022年
- 目的观察斑菲素蛋白3(PKP3)在胰腺癌中的表达,探讨PKP3对胰腺癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法利用在线生信分析网路数据库基因表达谱交互分析(GEPIA)观察PKP3在胰腺癌中的表达水平;收集2019年4月至2021年4月就诊于郑州大学人民医院行手术治疗的25例胰腺癌组织及其相应的正常组织,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测组织中PKP3的表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测人胰腺腺癌细胞(SW1990,BXPC3)、人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)中PKP3的表达水平。小干扰RNA构建PKP3低表达细胞株,分为siPKP3-1、siPKP3-2组和空白对照组(NC-PKP3)。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测胰腺癌细胞的增殖能力,划痕愈合实验、Transwell实验检测其迁移能力,两组间比较采用t检验。结果PKP3在胰腺癌组织中表达量为(2.32±0.93),明显高于胰腺正常组织(1.57±0.42,t=9.246,P<0.01),差异有统计学意义,Western blot结果表明PKP3在胰腺癌细胞BXPC3中的表达量高于正常胰腺细胞HPDE[(1.74±0.15)倍],在胰腺癌细胞SW1990中的表达量高于正常胰腺细胞HPDE[(1.34±0.08)倍]。CCK-8实验提示转染72 h后,BXPC3细胞中siPKP3-1、siPKP3-2组吸光度值分别为(2.09±0.37、1.67±0.42),明显低于NC-PKP3组(3.66±0.67,t=10.683、11.361,P<0.01),差异有统计学意义;SW1990细胞中siPKP3-1、siPKP3-2组吸光度值分别为(2.36±0.45、1.68±0.39),明显低于NC-PKP3组(3.54±0.98,t=7.664、8.727,P<0.01),差异有统计学意义;转染后24 h划痕愈合实验结果表明BXPC3细胞中siPKP3-1、siPKP3-2组划痕愈合百分比分别为(36.14±4.77)%、(22.56±5.15)%,明显低于NC-PKP3组[(78.61±5.03)%,t=9.375、9.716,P<0.01];SW1990细胞中siPKP3-1、siPKP3-2组划痕愈合百分比分别为(18.03±3.85)%、(23.12±5.02)%,明显低于NC-PKP3组[(68.33±6.98)%,t=9.772、9.913,P<0.01];Transwell实验结果表明,SW1990细胞中siPKP3-1、siPKP3-2组的细胞穿膜数量为(33.23±4.26)、(35.93±5.76)个/视野
- 赵栓柱刘攀禹鹏飞李文磊付强张旭罗乾坤秦涛
- 关键词：胰腺癌增殖迁移
- 长链非编码RNA RGD1566401在大鼠急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的作用
- 张旭王玉柱胡明星刘传江付强唐强薛飞秦涛张宏伟
- 肝脏自然杀伤细胞对梗阻性黄疸小鼠模型肝纤维化的影响
- 2017年
- 目的 观察肝脏自然杀伤（NK）细胞对梗阻性黄疸小鼠模型肝纤维化的影响.方法将小鼠随机分为A组：手术＋聚肌胞苷酸（Poly I∶C）组;B组：手术组＋磷酸盐缓冲液（PBS）组;C组：假手术＋Poly I∶C组;D组：假手术＋PBS组,每组20只.手术组行胆总管双重结扎术构建梗阻性黄疸模型,假手术组仅游离胆总管.A组、C组每48h腹腔注射1次Poly I∶C,B组、D组注射等量PBS,于第14天处死小鼠,比较各组小鼠血清肝功能指标变化,对肝脏组织行苏木素-伊红（HE）染色、Masson三染色、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫染色,实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测肝脏组织NK细胞表面特异性标志NK1.1、α-SMA及肿瘤坏死因子（TNF）-α mRNA相对表达量.结果 手术组血清肝功能指标高于假手术组,血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）水平A组[（829.78±79.33）、（752.00±67.90）U/L]较B组[（508.69±102.46）、（486.20±126.80）U/L]升高（P=0.032,P=0.030）;肝脏组织HE染色、Masson三染色结果表明,A组肝纤维化程度较B组重,α-SMA免疫染色结果根据阳性细胞数及阳性强度评分A组（＋＋＋）、B组（＋＋）、C组（＋）、D组（＋）;NK1.1、α-SMA、肿瘤坏死因子-α（TNF-α） mRNA相对表达量手术组（A组：181.79±13.68、239.67±12.09、12.39±0.87;B组：168.69±12.90、179.96±20.95、7.44±0.66）高于假手术组（C组：91.86±5.95、1.21±0.31、1.51±0.03）,NK1.1 mRNA表达量均较D组升高（P=0.029,P=0.031,P=0.027）.结论 Poly I∶C 诱导肝脏NK细胞活化并肝内聚集,加重了梗阻性黄疸小鼠模型肝纤维化,梗阻性黄疸减弱了肝脏NK细胞的抗肝纤维化的作用.
- 刘传江周文婧许先玲秦涛陈琳付强胡明星王玉柱
- 关键词：梗阻性黄疸自然杀伤细胞肝纤维化
- 缺血预适应对小肠缺血再灌注损伤后c-Fos和c-Jun基因表达的影响及其保护作用
- 2017年
- 目的 观察小鼠小肠缺血再灌注损伤（IRI）模型中缺血预适应（IPC）对小肠IRI的保护作用,并检测c-Fos和c-Jun的变化,探讨其小肠IRI和IPC中的作用机制.方法 建立雄性C57BL/6小鼠小肠IRI模型,分为Sham组（假手术）、IRI组（单纯IRI）和IPC组（IPC＋IRI）3组.采集3组术后再灌注0、30、60、90、120min小肠组织,实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测不同时间点c-Fos和c-Jun的mRNA表达;免疫组织化学检测不同时间点小肠组织的c-Fos、c-Jun、增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达;原位缺口末端标记法（TUNEL）法检测不同时间点小肠上皮细胞凋亡情况.结果 RT-qPCR检测结果显示与对照组比较,IRI组小肠组织中c-Fos和c-Jun mRNA表达强度不断上升,分别于再灌注30min和60min时达峰值（12.34±2.95、11.65±2.43）,并且明显高于IPC组（P=0.011、P=0.017）.免疫组织化学检测显示IRI组再灌注30-60min时c-Fos（189.62±47.45、174.31±32.57）（P=0.026、P=0.029）和60-120min（71.31±11.54、97.46±14.48）（P=0.031、P=0.027）时c-Jun表达明显高于IPC组.IRI组PCNA表达不断增强,60min达峰值（392.74±67.04）后下降,并且明显高于IPC组（P=0.013）;TUNEL染色显示与对照组比较随再灌注时间延长,IRI组和IPC组的凋亡指数（AI）均高于对照组,但IPC组再灌注90-120min的AI值明显低于IRI组（P=0.036、P=0.028）.结论 IPC对小鼠小肠IRI具有显著的保护作用,c-Fos和c-Jun可能是介导小鼠小肠IPC保护作用的重要内源性活性介质.
- 唐强张宏伟薛飞刘传江付强秦涛
- 关键词：小肠缺血再灌注损伤缺血预适应C-JUN
