目的:利用慢病毒包装系统使人眼小梁网细胞(HTMCs)稳定表达HES1 sh RNA并初步探索HES1在HTMCs的作用。方法:体外培养HTMCs和HEK293FT细胞并进行传代,同时应用p LKO.1-puro sh RNA慢病毒载体构建HES1 sh RNA质粒。Lipofectamine 2000慢病毒包装法感染原代HTMCs,使其稳定表达HES1sh RNA/Scramble质粒。采用q-PCR和Western blot方法检测HES1sh RNA的敲低效果及促纤维化细胞外基质蛋白(ECM)的表达变化;HTMCs增殖和迁移能力分别通过CCK-8细胞活性分析和Transwell计数实验进行分析。结果:原代细胞经过培养后贴壁生长,呈长梭形,生长状态良好,形态符合HTMCs形态学特征。HES1 sh RNA有效下调HES1的m RNA和蛋白水平表达(P<0.05)。同时,HES1 sh RNA组促纤维化ECM(FN;COL1;α-SMA)的m RNA和蛋白表达水平较Scramble组显著降低(P<0.05)。而Transwell计数实验显示HES1 sh RNA组HTMCs的迁移数量较Scramble组增加(P<0.05);CCK-8细胞活性分析实验表明抑制HES1表达对HTMCs的增殖活性影响不大,差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论:成功建立了稳定表达HES1 sh RNA的HTMCs细胞株。HES1可以影响HTMCs中促纤维ECM的生成及HTMCs的增殖和迁移能力。
