管楷
- 作品数：8 被引量：5H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人TBK1小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰TBK1细胞株的筛选被引量：2
- 2010年
- 目的:构建人TANK结合激酶1(TBK1)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰TBK1的细胞株。方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对TBK1的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo+gfp上,经测序分析正确后得到质粒psiTBK1。用脂质体转染质粒psiTBK1到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达TBK1小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中TBK1的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siTBK1,再用萤光素酶试验检测MCF-7/siTBK1细胞对外源TBK1诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况。结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF-7/siTBK1能够有效干扰TBK1的表达,并在外源TBK1存在的情况下抑制IFN-β的转录活性。结论:构建了表达TBK1小干扰RNA的质粒psiTBK1,筛选出稳定干扰TBK1表达的细胞株MCF-7/siTBK1,为深入研究TBK1在先天免疫中的作用提供了平台。
- 孙静魏从文管楷程孝中徐扬袁媛尹晴晴宋婷郑子瑞张艳红钟辉
- 关键词：小干扰RNA转录活性
- ERRα及其抑制剂在促进干扰素生成以及抑制病毒感染中的用途
- 本发明提供一种ERRα及其抑制剂在促进干扰素生成以及抑制病毒感染中的用途，本发明证实了ERRα可以作为新的病毒药物研究用靶点，有着很好的应用前景。
- 钟辉何湘魏从文马胜利张艳红郑子瑞管楷
- 文献传递
- 人TANK结合激酶1的基因克隆、表达及生物活性鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的:克隆人TANK结合激酶1(TBK1)基因,构建其真核表达载体,检测该基因在293细胞中的表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测其生物活性。方法:应用RT-PCR方法,以HeLa细胞RNA为模板,扩增获得TBK1基因,定向克隆到pcDNA3-Flag载体中,以LipofectAMINE2000转染试剂转染pcDNA-Flag-TBK1至293细胞中进行瞬时表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测诱导β干扰素(IFN-β)转录的情况。结果:测序结果表明,从人HeLa细胞总RNA中克隆到正确的TBK1基因全长编码序列,利用Western印迹检测其在293细胞中获得有效表达,利用萤光素酶报告基因实验检测TBK1可以诱导IFN-β转录激活。结论:真核表达的人TBK1具有相应的生物学活性,为研究其功能奠定了基础。
- 魏从文管楷岳翔袁媛宋婷郑子瑞张艳红钟辉
- 关键词：真核表达
- TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体的构建、表达及生物活性鉴定
- 2011年
- 目的:构建TANK结合激酶1(TBK1)相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体真核表达载体,检测该基因相关突变体在293细胞中的表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测其生物活性。方法:根据文献报道的突变序列及QuickChange Site-Directed Mutagenesis实验设计手册,设计合成2条针对TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体的引物,以实验室之前构建的TBK1野生型真核表达载体为模板,构建TBK1激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体真核表达载体,分别命名为pcDNA3-Flag-TBK1(KD)、pcDNA3-Flag-TBK1(ΔULD)。以LipofactAMINE2000转染试剂转染至293细胞中进行瞬时表达,利用萤光素酶实验检测2种TBK1突变体诱导β干扰素(IFN-β)转录的情况。结果:测序结果表明,TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域缺失突变体真核表达载体构建成功,Western印迹检测表明其在293细胞中获得有效表达;用萤光素酶报告基因实验检测,与野生型TBK1相比,其相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域缺失突变体诱导IFN-β转录激活的作用明显降低。结论:真核表达的TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体具有相应的生物学活性,为研究其功能奠定了基础。
- 魏从文管楷岳翔袁媛宋婷郑子瑞张艳红钟辉
- 关键词：真核表达转录活性
- 高尔基体膜蛋白GP73小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰GP73细胞株的筛选
- 2010年
- 目的构建高尔基体膜蛋白73(Golgi membrane protein 73,GP73)小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,筛选出稳定干扰GP73的细胞株。方法根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对GP73的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo+gfp上,经测序分析正确后,质粒命名为psiGP73。用脂质体转染质粒到肝癌细胞系HepG2中,经G418加压筛选稳定表达GP73 siRNA的细胞株,用免疫印迹检测质粒对内源GP73的干扰效果,将干扰效果好的细胞株命名为HepG2/siGP73。用MTT法检测GP73被干扰下调后对细胞增殖的影响。再通过贴壁非依赖性生长试验检测GP73被干扰下调后对细胞贴壁非依赖性生长的影响。结果免疫印迹结果证实构建的psiGP73质粒能够有效干扰细胞内源GP73的表达。GP73被干扰下调后,HepG2细胞的增殖速度降低,在软琼脂中克隆形成减慢。结论成功构建了表达GP73 siRNA的质粒psiGP73,筛选出稳定干扰GP73表达的细胞株HepG2/siGP73,为深入研究GP73在肝癌发生中的作用提供了平台。
- 管楷黄蓓钟辉
- 关键词：高尔基体膜蛋白质类
- MAVS诱导细胞凋亡的机制研究
- MAVS (Mitochondrial Anti-Viral Signaling protein)是RIG-1受体介导的先天性免疫应答信号传导途径中唯一的接头分子,可以通过诱导Ⅰ型干扰素的和炎症因子的产生参与先天性免疫应...
- 管楷何湘熊向华魏从文郑子瑞宋婷曹叶钟辉
- 关键词：MAVS细胞凋亡
- MAVS通过VDAC1诱导细胞凋亡的分子机制研究
- MAVS(mitochondria anti-viral signaling protein)是一种在先天免疫途径中发挥重要作用的蛋白。它定位在线粒体外膜上，由N端的CARD(caspase recruitment do...
- 管楷
- 关键词：细胞凋亡分子机制蛋白表达
- 文献传递
- MAVS诱导细胞凋亡的机制研究
- MAVS(Mitochondrial Anti-Viral Signaling protein)是RIG-1受体介导的先天性免疫应答信号传导途径中唯一的接头分子,可以通过诱导Ⅰ型干扰素的和炎症因子的产生参与先天性免疫应答...
- 管楷何湘熊向华魏从文郑子瑞宋婷曹叶钟辉
- 关键词：MAVS细胞凋亡
- 文献传递
