郭瑜
- 作品数：20 被引量：22H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用
- 本发明提供了利用噬菌体表面展示技术筛选获得的人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体HBIgG03(轻链和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示)和HBIgG12(轻链和重链可变区的氨基...
- 梁米芳毕胜利孙丽娜郭瑜刘洋张福顺李川李德新
- 文献传递
- 程序死亡蛋白1基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2008年
- 目的克隆人程序死亡蛋白（PD-1）基因并构建PD-1蛋白的原核表达质粒，在大肠埃希菌中进行表达。方法用RT-PCR的方法从慢性乙肝患者外周血淋巴细胞总RNA中逆转录得到PD-1基因的eDNA，构建PD-1基因的原核表达质粒，在大肠埃希菌BL21（DE3）中进行表达并纯化。用SDS-PAGE、DNA测序、氨基酸测序等方法对表达蛋白进行鉴定。结果克隆到PD-1基因编码区全长序列eDNA，经DNA测序与已报道的序列同源性达99.8％。构建得到PD-1的原核表达质粒，并在大肠埃希菌中表达，纯化获得纯度较高的PD-1蛋白。氨基酸测序证明表达蛋白的正确性。结论成功克隆人PD-1基因，在大肠埃希菌中获得表达，得到纯化的PD-1蛋白，为进一步研究PD-1蛋白的功能及应用打下基础。
- 陈斯勇关坤萍郭敏卓伊瑶贾志远余陶郭瑜毕胜利
- 关键词：逆转录聚合酶链反应基因克隆分子
- 我国常见乙型肝炎病毒基因型与基本核心启动子及前C区突变关系的初步研究被引量：3
- 2006年
- 收集81份HBV DNA阳性血清标本,经PCR扩增和序列测定确定其中有50份属于基因型C,31份属于基因型B;C基因型的基本核心启动子BCP T1762/A1764的突变率(38%)明显高于B基因型(12.9%,P<0.05);前C区A1896的突变在B、C两基因型间无显著性差异,B基因型为9.7%,C基因型为12%,P>0.05;HBeAg的表达与否与BCP双突变或前C区A1896突变均无明显相关性。经定量PCR检测证明,HBeAg阳性组中的HBV DNA含量明显高于抗-HBe阳性组,P<0.05。组内BCP双突变株和野生株及前C1896突变株和野生株的HBV DNA含量无显著性差异。
- 郭瑜刘晓燕陈斯勇伊瑶陈向伟毕胜利
- 关键词：乙型肝炎病毒前C区基因突变
- 原核表达的PD-1与PD-L1融合蛋白相互作用分析
- 2009年
- 目的分析经原核表达纯化的PD-1和PD-L1融合蛋白分子间相互作用力及其生物学活性。方法PD-1蛋白经过预浓缩后，用氨耦联的原理固定于CM5芯片表面，用HBS-EP缓冲液梯度稀释PD-L1蛋白，以20μl/min流速注射到耦联PD-1的传感芯片通道上，结合3min，解离15min；观察两者结合情况并用BIA Evaluation软件4进行分析。结果PD-1在缓冲液的pH值为4.5、浓度为40μg／ml的状态下能稳定耦联于CM5芯片表面，Ru值约为3300；稀释度为200mmol／ml的PD-Ll与PD-1能较好地结合，RU值为150，亲和常数为KD=3.5×10^-6。结论经原核表达纯化的PD-1与PD-L1融合蛋白具有较强的特异性亲和力及良好的生物学活性，为下一步研究的开展打下基础。
- 沈立萍许龙李建东陈斯勇郭瑜邱丰毕胜利
- 关键词：膜蛋白质类基因表达调控生物学鉴定法
- 鼠抗人PD-L1单克隆抗体的研制和生物学活性鉴定
- 2010年
- 目的 研制鼠抗人PD-L1功能性单克隆抗体,并对其生物学活性进行鉴定.方法 以前期原核表达的人硫氧还原蛋白-（PD-L1）融合蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,Western-Blot和酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选阳性杂交瘤细胞,竞争抑制法ELISA实验鉴定抗体的特异性亲和力,小鼠腹水法作大量抗体制备.结果 获得4株能够稳定分泌特异性抗PD-L1抗体的杂交瘤细胞,经验证所分泌的抗体具有较强的特异性亲和力,经过大量抗体制备和纯化获得效价大于1∶32000的纯化抗体;同时获得1株能稳定分泌抗硫氧还原蛋白抗体的杂交瘤.结论 成功制备了鼠抗人PD-L1单克隆抗体,为下一步应用研究奠定了基础.
- 沈立萍陈斯勇郭瑜张爽边涛毕胜利
- 关键词：抗体亲和力
- 人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用
- 本发明提供了利用噬菌体表面展示技术筛选获得的人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体HBIgG03(轻链和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示)和HBIgG12(轻链和重链可变区的氨基...
- 梁米芳毕胜利孙丽娜郭瑜刘洋张福顺李川李德新
- 一种人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用
- 本发明公开了一种人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用。本发明运用噬菌体表面呈现技术，采集乙肝疫苗免疫后具有高滴度表面抗体者的外周血淋巴细胞，通过基因工程手段构建了人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体文库，并...
- 梁米芳毕胜利孙丽娜郭瑜刘洋张福顺李川李德新
- 文献传递
- 抗β淀粉样肽40人单克隆抗体在昆虫细胞分泌表达被引量：1
- 2007年
- 目的通过杆状病毒昆虫细胞系统重组表达抗β淀粉样肽40人单克隆抗体,为全人抗体治疗阿尔茨海默病创造条件。方法将抗β淀粉样肽40人单链抗体重链可变区和轻链可变区分别克隆插入pAC-L-CH3的多克隆位点,构建成pAC-VH-VL表达质粒。将表达质粒和BaculoGold共转染SF9细胞后,用免疫荧光方法进行人IgG表达的检测。将感染重组杆状病毒的昆虫细胞培养液上清过蛋白A-琼脂糖亲和层析柱,洗脱纯化出的抗体经过SDS-PAGE电泳鉴定纯化蛋白质。结果杆状病毒昆虫细胞系统抗β淀粉样肽40人单克隆抗体表达质粒pAC-VH-VL构建成功。将表达质粒和辅助病毒感染昆虫细胞后可见昆虫细胞表达人抗体。经过蛋白A-琼脂糖亲和层析,从昆虫细胞培养基中纯化出抗β淀粉样肽40人单克隆抗体。结论通过基因工程手段在人抗Aβ40抗体可变区羧基端连接人抗体恒定区片段,通过杆状病毒昆虫系统分泌表达并纯化获得完整的人抗Aβ40单克隆抗体。
- 蔡炯郭瑜梁米芳李方刘飞王世真
- 关键词：阿尔茨海默病Β淀粉样肽昆虫细胞
- 人禽流感酶联免疫诊断方法的建立及其初步应用
- 2007年
- 目的建立人禽流感H5抗体的酶联免疫检测方法（ELISA）。方法用ELISA法检测疑似高致病性禽流感患者及正常人群血清标本中H5IgG抗体。结果23例疑似高致病性禽流感患者血清样品中有4例H5IsG抗体阳性，阳性率为17．40％，与血凝抑制试验（HI）和微量中和试验（NI）相比较，三者符和率为100％。234例正常人群血清H5 IgG抗体检测均为阴性。结论建立的ELISA方法可用于高致病性人禽流感的血清样品初步筛查。
- 鲁健郭瑜李梓曹玉玺王琦王秀平黄晶晶王敏毕胜利舒跃龙
- 关键词：人禽流感免疫球蛋白G酶联免疫吸附测定
- 人源抗乙型肝炎病毒基因工程全抗体的研制被引量：3
- 2004年
- 目的 研制人源化抗乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)的IgG全抗体。方法 采用噬菌体抗体库技术 ,从乙肝疫苗免疫后健康人外周血淋巴细胞中提取抗体基因建立抗体库 ,用纯化的HBsAg筛选Fab抗体 ;再将获得的抗体轻、重链构建到杆状病毒表达载体pAc κ Fc中 ,转染SF9细胞表达IgG全抗体并进行纯化。免疫荧光检测抗体的表达 ,竞争抑制ELISA检测其与抗原的结合活性及特异性。结果 获得了一株抗乙肝表面抗原的Fab抗体 ;在转染后的SF9培养上清中收获到了IgG抗体 ,竞争ELISA证实该抗体针对HBV表面抗原的特异性抗体。结论 本实验得到了一株人源抗HBsAg的IgG抗体 ,并进行了纯化。
- 郭瑜梁米芳毕胜利
- 关键词：乙型肝炎病毒基因工程
