陈斯勇
- 作品数：24 被引量：38H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PD—L1重组蛋白的表达及生物学活性分析被引量：1
- 2009年
- 目的构建细胞程序死亡因子1配体1（PD—L1）的重组表达质粒，在原核系统中表达并分析其生物学活性。方法经密码子优化后合成PD—L1全基因序列，构建硫氧还原蛋白．pET43b／（PD．L1）重组表达质粒并在大肠埃希菌中表达；用ELISA验证表达产物与其受体结合的生物学活性。结果正确构建了PD—L1重组表达质粒及其大肠埃菌基因工程菌，能稳定、高效地表达目的蛋白，相对分子质量为47×10^3，目的蛋白能与其受体特异性结合。结论成功获得有生物学活性的PD-L1重组蛋白，为研制单克隆抗体及其与病毒感染慢性化的关系提供基础条件。
- 沈立萍陈斯勇边涛伊瑶王锋邱丰毕胜利
- 关键词：密码子细胞死亡重组蛋白质类硫氧还蛋白
- 甲型肝炎病毒P1B、P2A、P3AB和P3D蛋白在原核系统中的表达和抗原活性分析
- 2007年
- 目的 研究甲型肝炎病毒P1B、P2A、P3AB和P3D在原核系统中的表达，并探讨这些蛋白的抗原活性和作为诊断抗原的应用价值。方法 采用PCR方法，从克隆有HAV HM175株全长cDNA基因的克隆载体pHAV16H1上扩增出目的基因，以M47作为表达载体，构建N端带硫氧还蛋白的重组表达质粒。重组质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中经IPTG诱导表达。采用DEAE阴离子交换和镍离子柱螯和亲和层析纯化的方法对重组蛋白进行纯化。以Western Blot和间接ELISA的方法检测重组蛋白的抗原活性。结果 四个重组质粒经测序证明构建正确无误，在大肠埃希菌中表达四个蛋白的相对分子质量也正确无误。Western Blot分析和间接ELISA方法证实四个蛋白中只有p2a有抗原活性。结论 原核表达的P2a蛋白，具有较好的抗原活性，在间接ELISA方法中检测出了所有的24份阳性血清和24份阴性血清，非常有希望做成诊断抗原用于诊断急性甲肝患者和区分甲型肝炎自然感染与注射疫苗所产生的不同免疫。
- 宁尚勇伊瑶陈斯勇毕胜利
- 关键词：病毒非结构蛋白质类抗原
- 丁型肝炎病毒内蒙古株的原核表达及抗原性分析被引量：4
- 2007年
- 目的 获得表达量高、抗原性强的基因工程重组抗原。检测不同地区的丁肝患者血清，初步验证其抗原性及在检测不同地区丁肝血清方面的差异。方法 从内蒙古某丁肝患者血清中提取丁肝病毒，经RT-PCR与PCR，使用PET43a表达质粒及HDVL-Ag 5′和3′端引入His标签获得丁型肝炎病毒L-Ag重组表达质粒，转化BL21（Rosetta）宿主菌，IPTG诱导表达。表达产物经饱和硫酸胺沉淀与亲和层析柱纯化后。采用EIA竞争法分析其抗原性。结果 经与ABBOTT Murex anti-Delta（total）试剂盒同步检测15份阳性和10份阴性血清，一致率100％。结论 EIA检测，证明具有良好的抗原性，基因工程表达的抗原蛋白在检测不同地区丁肝血清方面未见差异，故可用于丁肝的诊断及相关研究。
- 杨英超伊瑶赵洪兰张文英陈斯勇毕胜利
- 关键词：基因
- 抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1单克隆抗体的制备和鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的制备具有中和活性的抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1的单克隆抗体。方法人工合成SP55和SP70（分别包含VP1的第163～177，208—222位氨基酸）两段VP1的多肽，分别免疫BALB／c小鼠，常规杂交瘤技术进行细胞融合，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选阳性杂交瘤细胞并测定效价。用分泌的单抗和EV71病毒在RD细胞上进行中和试验以检验其中和活性。结果得到2株能稳定分泌抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，2株单抗的中和效价分别为1：8和1：16。结论成功制备出2株具有中和活性的抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体，为其下一步应用打下基础。
- 伊瑶郭敏卓沈心亮余陶贾志远毕胜利李秀玲陈斯勇
- 关键词：肠道病毒属酶联免疫吸附测定
- 我国常见乙型肝炎病毒基因型与基本核心启动子及前C区突变关系的初步研究被引量：3
- 2006年
- 收集81份HBV DNA阳性血清标本,经PCR扩增和序列测定确定其中有50份属于基因型C,31份属于基因型B;C基因型的基本核心启动子BCP T1762/A1764的突变率(38%)明显高于B基因型(12.9%,P<0.05);前C区A1896的突变在B、C两基因型间无显著性差异,B基因型为9.7%,C基因型为12%,P>0.05;HBeAg的表达与否与BCP双突变或前C区A1896突变均无明显相关性。经定量PCR检测证明,HBeAg阳性组中的HBV DNA含量明显高于抗-HBe阳性组,P<0.05。组内BCP双突变株和野生株及前C1896突变株和野生株的HBV DNA含量无显著性差异。
- 郭瑜刘晓燕陈斯勇伊瑶陈向伟毕胜利
- 关键词：乙型肝炎病毒前C区基因突变
- 新疆地区居民乙肝病毒基因型的初步研究被引量：2
- 2009年
- 目的初步确定新疆地区乙肝患者乙肝病毒基因型的基本情况。方法对在新疆地区采集的2000余份血清中检测得到200份HBsAg阳性的血清，利用巢氏PCR法扩增其S基因并测序，用MEGA3软件将测序结果与GenBank中的HBV标准序列进行分析，构建并绘制系统发生树，分析基因型。结果在200份样本中，127例（63．5％）成功检出基因型，其中B基因型10例（7．8％），C基因型58例（45．7％），D基因型59例（46．5％）。结论新疆地区HBV基因型以C、D型为主，少量为B型。
- 费永亮岳城李蕾伊瑶陈斯勇贾志远毕胜利
- 关键词：基因型
- 原核表达的PD-1与PD-L1融合蛋白相互作用分析
- 2009年
- 目的分析经原核表达纯化的PD-1和PD-L1融合蛋白分子间相互作用力及其生物学活性。方法PD-1蛋白经过预浓缩后，用氨耦联的原理固定于CM5芯片表面，用HBS-EP缓冲液梯度稀释PD-L1蛋白，以20μl/min流速注射到耦联PD-1的传感芯片通道上，结合3min，解离15min；观察两者结合情况并用BIA Evaluation软件4进行分析。结果PD-1在缓冲液的pH值为4.5、浓度为40μg／ml的状态下能稳定耦联于CM5芯片表面，Ru值约为3300；稀释度为200mmol／ml的PD-Ll与PD-1能较好地结合，RU值为150，亲和常数为KD=3.5×10^-6。结论经原核表达纯化的PD-1与PD-L1融合蛋白具有较强的特异性亲和力及良好的生物学活性，为下一步研究的开展打下基础。
- 沈立萍许龙李建东陈斯勇郭瑜邱丰毕胜利
- 关键词：膜蛋白质类基因表达调控生物学鉴定法
- 乙酰胆碱酯酶抑制剂对乙型肝炎细胞凋亡的抑制作用
- 2008年
- 目的为了抑制乙型肝炎时大量细胞凋亡，以内毒素诱导Vero细胞损伤建立凋亡模型，探讨乙酰胆碱酯酶抑制剂他克林、多奈哌齐对内毒素诱导Vero细胞凋亡的作用。方法用光学显微镜观察细胞形态学改变，CCK-8检测分析细胞损伤状况，DNA Ladder检测细胞凋亡DNA断裂特征性条带。结果光学显微镜观察、CCK-8检测和DNA Ladder检测显示内毒素400、500μg／ml能够诱导Vero细胞凋亡；他克林和多奈哌齐与内毒素同时处理Vero细胞后，他克林10μmol／L能够抑制由内毒素500μg／ml诱导的Vero细胞凋亡，而多奈哌齐则无此抑制作用。结论内毒素能够诱导Vero细胞凋亡，用于建立Vero细胞凋亡模型；他克林对内毒素诱导的Vero细胞凋亡具有一定的抑制作用，多奈哌齐则无此作用。
- 黄晶伊瑶毕胜利陈斯勇王传跃
- 关键词：乙型细胞凋亡内毒素他克林多奈哌齐
- 鼠抗人PD-L1单克隆抗体的研制和生物学活性鉴定
- 2010年
- 目的 研制鼠抗人PD-L1功能性单克隆抗体,并对其生物学活性进行鉴定.方法 以前期原核表达的人硫氧还原蛋白-（PD-L1）融合蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,Western-Blot和酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选阳性杂交瘤细胞,竞争抑制法ELISA实验鉴定抗体的特异性亲和力,小鼠腹水法作大量抗体制备.结果 获得4株能够稳定分泌特异性抗PD-L1抗体的杂交瘤细胞,经验证所分泌的抗体具有较强的特异性亲和力,经过大量抗体制备和纯化获得效价大于1∶32000的纯化抗体;同时获得1株能稳定分泌抗硫氧还原蛋白抗体的杂交瘤.结论 成功制备了鼠抗人PD-L1单克隆抗体,为下一步应用研究奠定了基础.
- 沈立萍陈斯勇郭瑜张爽边涛毕胜利
- 关键词：抗体亲和力
- 丁型肝炎病毒内蒙株的原核表达及抗原性分析
- 目的：获得表达量高、抗原性强的基因工程重组抗原。检测不同地区的丁肝患者血清，初步验证其抗原性及在检测不同地区丁肝血清方面的差异。
方法: 从内蒙某丁肝患者血清中提取丁肝病毒，经RT-PCR与PCR，使用PET4...
- 杨英超伊瑶赵红兰张文英陈斯勇毕胜利
- 关键词：丁型肝炎病毒抗原性原核表达试剂盒生物制品
- 文献传递
