张莹莹
- 作品数：14 被引量：28H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- PARP10组织分布、相互作用蛋白及UV应激反应的分析
- 2009年
- 根据GenBank中公布的人多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶10(PARP10)cDNA序列,设计并合成一对特异性引物,通过RT-PCR扩增293FT细胞mRNA,获得PARP10cDNA。将获得的cDNA克隆到pCMV-Myc和pEGFP-C1中,用免疫沉淀和激光共聚焦实验验证了PARP10和β-actin存在相互作用。然后,通过RT-PCR法发现该基因在小鼠体内表达的组织分布,组织表达谱显示该蛋白在各组织中均有表达;Westernblotting分析表明,UV造成的细胞损伤能够引起PARP10表达水平的增高。PARP10组织表达谱的确定,与β-actin相互作用的验证以及对UV的应激反应都为进一步研究PARP10的生物学功能奠定了基础。
- 于孟斌赵莉霞杨予涛杨志新张莹莹朱恒奇周晓巍黄培堂
- 关键词：UV组织表达谱免疫沉淀激光共聚焦
- HBx-EGFP-TLM融合蛋白表达载体的构建、蛋白表达纯化及活性检测
- 2011年
- 乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)具有广泛的转录激活作用,但是由于细胞类型和实验条件的差异,外源启动子介导的HBx瞬时表达水平常表现出不均一性,为其功能的研究带来困难。为了解决HBx研究过程中遇到的这些难题,利用PCR扩增获得HBx及含转导肽TLM的EGFP编码序列,经酶切后插入pGEX-4T-1原核表达载体,成功构建重组质粒pGEX-HBx-EGFP-TLM和pGEX-EGFP-TLM。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,融合蛋白经IPTG诱导表达,采用?KTATM Purifier蛋白纯化系统纯化并进行SDS-PAGE和Western blotting分析,确定为目的蛋白。将纯化后的融合蛋白分别与AML12和SMMC-7721细胞共孵育,Western blotting和激光共聚焦显微镜检测证实TLM转导肽能够介导HBx-EGFP和EGFP进入细胞,同时进入细胞的HBx-EGFP-TLM能够发挥转录激活活性,为HBx功能的深入研究奠定了基础。
- 史晓燕张莹莹周晓巍陆健昇郭泽坤黄培堂
- 关键词：乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒X蛋白
- 小鼠泛素结合酶UBE2W的抗体制备及组织表达谱分析被引量：6
- 2008年
- 泛素结合酶(E2)是蛋白泛素化修饰所需的第二个连接酶,在泛素转移和底物特异性识别过程中发挥着重要作用。UBE2W是一种新发现的E2酶,其果蝇属同源蛋白可能在光转导或视网膜变性过程中发挥作用,鼠和人同源蛋白功能未见报道。生物信息学分析UBE2W鼠源氨基酸序列,发现UBE2W具有典型的UBC结构域并在多种物种高度保守。通过构建UBE2W原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化了GST-UBE2W融合蛋白。以此纯化蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备抗UBE2W多抗血清,并利用制备的UBE2W抗原柱亲和纯化UBE2W多抗。为了检测纯化抗体特异性,在真核细胞中瞬时表达了myc-UBE2W融合蛋白,分别用myc单抗和UBE2W多抗进行Western blotting分析,结果表明获得了特异性的UBE2W抗体。利用此特异性抗体在小鼠脑、心脏、肾脏、肝脏、肺、肌肉、脾脏和睾丸等组织中均检测到了UBE2W的表达,且在小鼠睾丸中成年期表达最高。
- 张莹莹朱恒奇赵莉霞周晓巍黄培堂
- 关键词：泛素结合酶抗体组织表达谱
- 抗转铁蛋白受体单链抗体的表达、纯化及活性测定被引量：4
- 2006年
- 根据转铁蛋白受体和转铁蛋白特异性结合的性质,利用亲和纯化的方法从胎盘中提取转铁蛋白受体。以转铁蛋白受体为抗原包被免疫管,从全合成人源噬菌体单链抗体库中筛选其抗体。对筛选到的抗体进行特异性鉴定后,将抗体基因插入表达载体pET22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后获得可溶性表达。HeLa细胞的免疫组化结果显示,表达的抗体可以与转铁蛋白受体结合。表达产物经Ni-NTA金属螯和层析柱纯化、脱咪唑后,从尾静脉注射小鼠。1h后,去除血液及毛细血管的干扰,在脑实质中检测到了抗体的存在,说明该抗体可以通过血脑屏障。
- 赵莉霞颜冰许龙蒋世卫张莹莹杨志新周晓巍黄培堂
- EZH2在肝癌发生发展中功能的研究进展被引量：1
- 2011年
- 多种因素引起的原癌基因激活和抑癌基因失活是导致肝癌发生发展的主要原因.EZH2是新近发现的具有组蛋白甲基转移酶活性的癌相关基因,主要通过催化H3K27me3修饰介导基因沉默,参与X染色体失活、细胞分化和胚胎发育调节.近来发现,EZH2在多种机制调节下在肝癌组织中过度表达,通过多种机制调控其下游基因异常表达,从而参与肝癌发生发展的多个过程.本文针对以上进行了总结和讨论.
- 张莹莹周晓巍黄培堂
- 关键词：肝癌EZH2组蛋白甲基转移酶基因沉默
- 乙肝病毒HBx蛋白诱导E-cadherin表观遗传沉默促进细胞迁移的机制研究
- 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一,病死率高,常常发生局部侵袭及远处转移是导致其预后不良的主要原因,严重威胁人们生命健康和生活质量。乙型肝炎病毒(hepati...
- 张莹莹
- 关键词：细胞迁移乙型肝炎病毒X蛋白EZH2E-CADHERIN
- 文献传递
- H5N1型禽流感病毒核蛋白C端缺失削弱核蛋白间的相互作用被引量：3
- 2009年
- 目的:克隆H5N1型禽流感病毒的核蛋白(NP)基因,将其定向插入双分子荧光载体,在细胞水平验证NP-NP的相互作用,进而确定NP-NP相互作用的关键区域。方法:根据双分子荧光互补(BiFC)实验的载体和NP基因序列设计引物,将NP的结构基因定向克隆到荧光载体上,得到重组荧光载体pBiFC-YC155-NP、pBiFC-YN155-NP、pBiFC-YC173-NP和pB-iFC-YN173-NP,瞬时转染293FT细胞,研究NP-NP相互作用;进一步对NP的C端进行缺失突变,然后定向克隆到pBiFC-YN173载体,令其分别与pBiFC-YC155-NP共转染293FT细胞,确定NP的C端在NP-NP相互作用过程中的地位。结果:构建了NP基因的BiFC载体pBiFC-YC155-NP、pBiFC-YN155-NP、pBiFC-YC173-NP和pBiFC-YN173-NP;将pBiFC-YC155-NP和pBiFC-YN173-NP、pBiFC-YC173-NP和pBiFC-YN173-NP共转染293FT细胞后出现了荧光;缺失实验表明,NP的C端是NP在体内相互作用形成寡聚体所必需的。结论:验证了H5N1型禽流感病毒NP在体内的相互作用,并初步证明NP的C端是NP形成寡聚体的必需片段,为进一步研究NP的作用奠定了基础。
- 李斌周晓巍张莹莹孙玉梅
- 关键词：禽流感病毒核蛋白
- parp10基因RNA干扰有效靶点的筛选及验证
- 2009年
- 目的:合成并筛选有效抑制parp10表达的siRNA。方法:根据parp10 cDNA序列,设计并合成prap10基因潜在的RNA干扰(RNAi)片段,将合成的寡核苷酸序列构建到pEGFP-C1H1U6载体中;通过双萤光素酶试验、Western blotting筛选有效的干扰序列;进一步用G418对A549细胞进行耐受度筛选,确定最低耐受度;用G418溶液对转染RNAi重组质粒的A549细胞进行筛选,通过RT-PCR鉴定干扰效果。结果:针对617bp处所构建的RNAi载体能够抑制PARP10的表达,用浓度为400μg/mL G418的McCoy′s 5A培养基筛选转染后的细胞,获得了能够表达绿色荧光标签蛋白的A549细胞株,经RT-PCR检测发现,PARP10表达受到抑制。结论:获得了能够有效抑制PARP10表达的特异性小干扰RNA(siRNA),为进一步研究其生物学功能提供了条件。
- 于孟斌周晓巍李朝张莹莹杨予涛王荣黄培堂
- 关键词：RNA干扰G418
- 一种新泛素结合酶（E2）UBE2W与FANCL相互作用调控Fanconi贫血蛋白FANCD2单泛素化
- Fanconi贫血（FA）是一种罕见的隐性遗传性疾病,临床常以先天畸形、进行性骨髓衰竭和遗传性肿瘤倾向为主要表现。目前已经鉴定包括E3酶FANCL及其底物FANCD2在内至少13个基因的缺失或突变将导致FA症状发生。这些...
- 张莹莹侯继业于孟斌周晓巍黄培堂
- 关键词：FANCONI贫血DNA损伤修复
- 文献传递
- 不同基因型HBx对乙型肝炎病毒复制的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨A、B、C和D四个基因型乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis Bvirus Xprotein,HBx)对乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)复制的影响。方法构建含A、B、C和D四种基因型HBx的真核表达载体和提前终止HBx表达的突变型单倍体HBV表达系统,共转染至人肝肿瘤细胞系HepG2细胞,利用荧光素酶报告系统检测不同基因型HBx对HBV核心启动子的激活作用,利用酶联免疫法(ELISA)检测培养上清中HBV表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的表达情况,利用特异性引物PCR方法检测细胞中HBV前基因组RNA(pgRNA)和总RNA(pgRNA,2.2kb和0.8kbRNA)的转录情况。结果 A、B、C和D四种基因型HBx的表达均可显著激活HBV核心启动子活性,但不同基因型HBx的激活作用不同。除C基因型外,A、B和D三种基因型HBx均可显著增强HBsAg和HBeAg的胞外分泌水平。检测HBV复制中间产物发现,C基因型HBx对HBVpgRNA和总RNA转录水平的影响显著低于A、B和D基因型。结论不同基因型HBx对HBV复制的影响不同,为进一步研究HBV基因型与HBV复制能力以及临床病理表现的关系打下基础。
- 张莹莹史晓燕陆健昇周晓巍黄培堂
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白病毒复制基因型
