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周晓巍: 作品数：69 被引量：156H指数：7; 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学化学工程农业科学更多>>

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Gas8蛋白的抗体制备及小鼠组织表达图谱分析: 2009年; 目的:制备Gas8抗体,并检测小鼠各组织中Gas8表达谱。方法:在大肠杆菌BL21(DE3)中表达His标签标记的Gas8融合蛋白,以纯化的Gas8重组融合蛋白为抗原制备兔Gas8多抗血清,进一步利用亲和纯化方法制备Gas8多克隆抗体;为确定Gas8抗体的特异性,通过免疫印迹方法检测瞬时表达的Flag-Gas8融合蛋白,同时以抗Flag单克隆抗体作为对照;利用制备的抗体通过Westernblot检测Gas8在小鼠各组织中的表达谱。结果:与Gas8特异性结合的抗体能够通过免疫法获得;利用制备的抗体检测到Gas8在小鼠心、肺、肾、脑、肝、脾、肌肉、睾丸各组织中均表达。结论:获得了特异性抗Gas8抗体,用该抗体可以检测到小鼠组织中Gas8的表达。; 付宁赵莉霞朱恒奇周晓巍马学恩黄培堂; 关键词：抗体组织表达谱

具有受体选择性的新型肿瘤坏死因子突变体的蛋白质工程研究: 肿瘤坏死因子(TNF)能够特异性地杀伤肿瘤细胞,现已被用来作为治疗肿瘤的有效药物。但野生型TNF毒副作用很大,研究表明TNF的有效剂量是其致毒剂量的5～25倍,因此TNF的新型突变体研究十分必要。TNF有两个受体,R55...; 王国力周晓巍黄培堂; 关键词：抗肿瘤药物受体选择性肿瘤坏死因子突变体蛋白质工程

应用HA、NA、M1和M2蛋白制备H5N1高致病性禽流感病毒样颗粒被引量：5: 2011年; 目的:应用重组杆状病毒表达系统制备由HA、NA、M1和M2蛋白组成的H5N1高致病性禽流感病毒样颗粒,为研究H5N1高致病性禽流感疫苗奠定基础。方法:构建能共表达A/chicken/Jilin/2003(H5N1)禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)、A/PR/8/34(H1N1)流感病毒基质蛋白(M1)和离子通道蛋白(M2)的2个二元重组杆状病毒,共同感染HighFive细胞,同时表达HA、NA、M1和M2蛋白,使这4种蛋白在感染的细胞内自主组装成病毒样颗粒。经差速离心和蔗糖密度梯度超速离心收获病毒样颗粒,通过Western印迹鉴定病毒样颗粒的组成,透射电镜观察病毒样颗粒形态,血凝试验测定病毒样颗粒的活性。结果:HA、NA、M1、M2蛋白在昆虫细胞中共表达,并组装成病毒样颗粒;电镜观察到病毒样颗粒的形态与流感病毒一致,直径约80 nm;血凝试验显示该病毒样颗粒具有凝集鸡红细胞的活性。结论:应用该方法可以制备流感病毒样颗粒,为H5N1流感疫苗研究提供了可行方案。; 王立强许龙周晓巍杨志新陆健昇刘冰夏炳辉杨津黄培堂; 关键词：流感病毒病毒样颗粒杆状病毒

鞘内注射ω-芋螺毒素S03对大鼠慢性神经痛的镇痛作用及对DRG细胞内Ca^(2+)含量的影响被引量：10: 2006年; 目的ω-芋螺毒素SO3是通过分子生物学手段从海洋生物线纹芋螺中提取的一种多肽,为新型、特异性N型电压敏感性钙离子通道阻滞剂。观察鞘内注射(it)ω-芋螺毒素SO3对大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CC I模型)所致神经痛的镇痛作用,以及对背根神经节(DRG)细胞内Ca2+含量的影响。方法♂SD大鼠40只,随机均分为5组,即正常对照组(N组)、CC I后14 d组(C组)、CC I 14 d it生理盐水组(CN组)、CC I 14 d it SO3 600 ng组(CS 1组)和CC I 7 d后连续鞘内注射SO3 30 ng.h-1共7 d组(CS 7组)。观察各组动物热痛觉过敏及机械刺激痛觉异常的反应阈值,并测定DRG细胞内Ca2+含量。结果CC I 14 d时结扎侧与非结扎侧热及机械刺激痛阈值均下降,同时DRG细胞内Ca2+含量也升高。it SO3后,结扎侧及非结扎侧痛阈值均升高,而DRG细胞内Ca2+含量降低。结论it SO3对慢性神经痛有镇痛作用,同时可以抑制CC I引起的DRG细胞内Ca2+含量增加,提示DRG细胞N型Ca2+电流在此伤害性信息传递中起作用。; 王红周晓巍张宏黄培堂; 关键词：神经痛背根神经节细胞内钙含量

N型钙通道与疼痛被引量：5: 2005年; N型电压依赖性钙通道 (VDCCs)在疼痛的传递与调控中具有重要作用。它们密集分布于脊髓背角伤害感受性神经元突触前末梢 ,参与主要疼痛介质如谷氨酸和P物质等释放的调节。通过阻断上述通道 ,选择性N型VDCCs阻断剂表现出强效镇痛作用 ,N型VDCCsCaV2 .2亚基基因敲除小鼠也表现为痛阈提高。N型VDCCs还分布于自主神经系统和中枢神经系统突触部位 ,现有的N型VDCCs阻断剂用于疼痛治疗时出现的各种副作用与这些部位的突触抑制有关。最近发现 ,背根节伤害感受性神经元上存在一种特异的N型VDCCs亚型。; 文磊杨胜周文霞张永祥周晓巍黄培堂; 关键词：钙通道阻断剂疼痛

肿瘤坏死因子与其受体相互作用的计算机模拟研究被引量：4: 1998年; 利用同源模建方法，以ＴＮＦＲ５５受体胞外区的晶体结构为参考模板，预测了ＴＮＦＲ７５受体胞外区Ｃｙｓ１８～Ｐｈｅ１４７片段的三维结构．根据Ｒ５５受体胞外区与ＬＴ相结合的复合物的晶体结构，预测了ＴＮＦ与Ｒ５５及Ｒ７５胞外区的复合物的三维结构，模拟了ＴＮＦ与受体之间的相互作用．由于ＴＮＦ与受体的作用形式是三聚体对三聚体，因此在模拟ＴＮＦ与受体相互作用时选择了包括一个非对称的ＴＮＦ三聚体和一个受体（Ｒ５５或Ｒ７５）单体的模拟系统．结合已有的突变体实验结果，利用计算机模拟分析手段，发现了一些ＴＮＦ突变体之所以具有受体选择性的三维结构基础和发挥了关键作用的氨基酸残基以及这些残基之间的主要作用形式．研究深化了对已有的突变体实验结果的认识，建立了不同的实验结果之间的内在关联，为以后有目的的新型突变体设计和实验研究打下了基础．; 王国力周晓巍黄培堂黄翠芬; 关键词：受体同源模建肿瘤坏死因子

一种哺乳动物细胞表达系统及其应用: 本发明公开了一种新的简捷而高效的哺乳动物细胞表达系统。该表达系统包括含SV40 ori和选择标志基因的表达载体，及表达SV40大T抗原并支持表达载体复制的细胞株。本发明的哺乳动物细胞表达系统可用于制备基因重组蛋白，并具有...; 刘定燮黄培堂周晓巍; 文献传递

用表面等离子体共振技术筛选与禽流感病毒基质蛋白M1相互作用的蛋白被引量：3: 2009年; 目的:筛选与禽流感病毒基质蛋白M1相互作用的蛋白。方法:表达禽流感病毒基质蛋白M1,经Ni2+柱亲和层析纯化,用表面等离子体共振(SPR)技术捕获BHK-21细胞裂解液中与M1相互作用的细胞蛋白,并进行质谱分析。结果:获得了纯度在85%以上的基质蛋白M1,并利用此蛋白捕获到宿主细胞肌球蛋白重链6。结论:肌球蛋白重链6与禽流感病毒基质蛋白M1可能存在体外相互作用。; 张吉贵杨志新许龙朱恒奇李郁周晓巍黄培堂; 关键词：禽流感病毒表面等离子体共振

PARP10组织分布、相互作用蛋白及UV应激反应的分析: 2009年; 根据GenBank中公布的人多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶10(PARP10)cDNA序列,设计并合成一对特异性引物,通过RT-PCR扩增293FT细胞mRNA,获得PARP10cDNA。将获得的cDNA克隆到pCMV-Myc和pEGFP-C1中,用免疫沉淀和激光共聚焦实验验证了PARP10和β-actin存在相互作用。然后,通过RT-PCR法发现该基因在小鼠体内表达的组织分布,组织表达谱显示该蛋白在各组织中均有表达;Westernblotting分析表明,UV造成的细胞损伤能够引起PARP10表达水平的增高。PARP10组织表达谱的确定,与β-actin相互作用的验证以及对UV的应激反应都为进一步研究PARP10的生物学功能奠定了基础。; 于孟斌赵莉霞杨予涛杨志新张莹莹朱恒奇周晓巍黄培堂; 关键词：UV 组织表达谱免疫沉淀激光共聚焦

重组人IL-1ra在大肠杆菌中的可溶性表达: 2004年; 利用PCR技术从含有IL-1ra的质粒上扩增IL-1ra基因,经过序列测定后插入表达载体pTIG-Trx,并转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达。经SDS-PAGE分析显示,IL-1ra表达质粒在大肠杆菌中的诱导表达产物出现相对分子量大约为17000的一条新生蛋白质带,其大小与预期结果一致,经Western和ELISA分析,证明该带即为目的蛋白,SDS-PAGE显示目的蛋白全部以可溶性蛋白的形式存在。超声破碎后,上清经金属螯和层析纯化获得纯度约为98%的蛋白样品。; 杨志新周晓巍朱恒奇徐秀英黄培堂; 关键词：IL-1RA 大肠杆菌 ELISA 表达质粒可溶性表达 IPTG

周晓巍

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