许龙
- 作品数：15 被引量：31H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划北京市自然科学基金更多>>
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- 用表面等离子体共振技术筛选与禽流感病毒基质蛋白M1相互作用的蛋白被引量：2
- 2009年
- 目的:筛选与禽流感病毒基质蛋白M1相互作用的蛋白。方法:表达禽流感病毒基质蛋白M1,经Ni2+柱亲和层析纯化,用表面等离子体共振(SPR)技术捕获BHK-21细胞裂解液中与M1相互作用的细胞蛋白,并进行质谱分析。结果:获得了纯度在85%以上的基质蛋白M1,并利用此蛋白捕获到宿主细胞肌球蛋白重链6。结论:肌球蛋白重链6与禽流感病毒基质蛋白M1可能存在体外相互作用。
- 张吉贵杨志新许龙朱恒奇李郁周晓巍黄培堂
- 关键词：禽流感病毒表面等离子体共振
- 原核表达的PD-1与PD-L1融合蛋白相互作用分析
- 2009年
- 目的分析经原核表达纯化的PD-1和PD-L1融合蛋白分子间相互作用力及其生物学活性。方法PD-1蛋白经过预浓缩后，用氨耦联的原理固定于CM5芯片表面，用HBS-EP缓冲液梯度稀释PD-L1蛋白，以20μl/min流速注射到耦联PD-1的传感芯片通道上，结合3min，解离15min；观察两者结合情况并用BIA Evaluation软件4进行分析。结果PD-1在缓冲液的pH值为4.5、浓度为40μg／ml的状态下能稳定耦联于CM5芯片表面，Ru值约为3300；稀释度为200mmol／ml的PD-Ll与PD-1能较好地结合，RU值为150，亲和常数为KD=3.5×10^-6。结论经原核表达纯化的PD-1与PD-L1融合蛋白具有较强的特异性亲和力及良好的生物学活性，为下一步研究的开展打下基础。
- 沈立萍许龙李建东陈斯勇郭瑜邱丰毕胜利
- 关键词：膜蛋白质类基因表达调控生物学鉴定法
- 利用大肠杆菌表达禽流感病毒聚合酶酸性蛋白
- 2009年
- 目的:通过在大肠杆菌中分段表达禽流感病毒聚合酶酸性蛋白(PA蛋白),探索PA基因中可能影响表达的区域。方法:构建分段缺失的PA蛋白突变体,用IPTG在大肠杆菌RosettaGamiB(DE3)中诱导表达,比较各突变体的表达效率。结果:N端缺失长度在143～408个氨基酸残基之间的9个突变体在大肠杆菌中的表达水平较高;而突变体PA/K(Δ1-40aa)、PA/M(Δ1-56aa)、PA/N(Δ41-56aa)和PA/P(Δ57-75aa)的表达水平很低;全长PA蛋白和缺失N端20个氨基酸残基的突变体PA/L则检测不到表达。结论:PA基因的61～225bp和325～426bp可能是影响PA蛋白表达的2个重要区域,为下一步表达全长PA蛋白奠定了基础。
- 王少蕾许龙周晓巍张春枝黄培堂
- 关键词：禽流感病毒大肠杆菌
- 应用HA、NA、M1和M2蛋白制备H5N1高致病性禽流感病毒样颗粒被引量：5
- 2011年
- 目的:应用重组杆状病毒表达系统制备由HA、NA、M1和M2蛋白组成的H5N1高致病性禽流感病毒样颗粒,为研究H5N1高致病性禽流感疫苗奠定基础。方法:构建能共表达A/chicken/Jilin/2003(H5N1)禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)、A/PR/8/34(H1N1)流感病毒基质蛋白(M1)和离子通道蛋白(M2)的2个二元重组杆状病毒,共同感染HighFive细胞,同时表达HA、NA、M1和M2蛋白,使这4种蛋白在感染的细胞内自主组装成病毒样颗粒。经差速离心和蔗糖密度梯度超速离心收获病毒样颗粒,通过Western印迹鉴定病毒样颗粒的组成,透射电镜观察病毒样颗粒形态,血凝试验测定病毒样颗粒的活性。结果:HA、NA、M1、M2蛋白在昆虫细胞中共表达,并组装成病毒样颗粒;电镜观察到病毒样颗粒的形态与流感病毒一致,直径约80 nm;血凝试验显示该病毒样颗粒具有凝集鸡红细胞的活性。结论:应用该方法可以制备流感病毒样颗粒,为H5N1流感疫苗研究提供了可行方案。
- 王立强许龙周晓巍杨志新陆健昇刘冰夏炳辉杨津黄培堂
- 关键词：流感病毒病毒样颗粒杆状病毒
- H5N1亚型高致病性禽流感病毒NS1基因的克隆及其序列分析
- 2007年
- 目的:克隆H5N1亚型禽流感病毒的NS1基因,并分析其序列特性。方法:通过RT-PCR方法克隆H5N1亚型禽流感病毒NS1基因,并对该基因片段进行测序,将此序列与数据库中不同时间、地点、宿主来源的H5N1亚型流感毒株NS1基因序列进行同源性比较。结果:获得了678 bp的NS1全长基因,可编码225个氨基酸;其与毒株A/chicken/Jilin/hq/2003的同源性最高,二者的核酸和氨基酸的同源性分别为99.7%和99.1%。比对分析发现,该毒株NS1基因在第238-252位有15个核苷酸的缺失;进化树分析表明,它与1997年香港流行的H5N1亚型禽流感病毒毒株分别属于2个不同的分支。结论:克隆了一株H5N1亚型禽流感病毒的NS1基因,并初步分析了其序列特性,为进一步研究NS1基因的功能奠定了基础。
- 张传福蒋世卫杨予涛杨志新朱恒奇赵丽霞许龙王荣于孟斌周晓巍黄培堂
- 关键词：禽流感H5N1亚型NS1基因
- SARS冠状病毒N蛋白和CYP4F3的相互作用被引量：1
- 2007年
- 目的:研究SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白与CYP4F3的相互作用。方法:应用免疫共沉淀、GST-pulldown、BIACORE实验验证SARS-CoVN蛋白与CYP4F3的相互作用。结果:SARS-CoVN蛋白与CYP4F3能够相互作用,BIA-CORE实验证实CYP4F3与SARS-CoVN蛋白的亲和常数为KD=4.3×10-11。结论:SARS-CoVN蛋白与CYP4F3在细胞内、外均能形成复合物,这为进一步探讨SARS-CoVN蛋白在SARS致病机理中的作用奠定了基础。
- 陈亮许龙曹诚王玉民
- 关键词：SARS冠状病毒N蛋白相互作用
- 抗转铁蛋白受体单链抗体的表达、纯化及活性测定被引量：4
- 2006年
- 根据转铁蛋白受体和转铁蛋白特异性结合的性质,利用亲和纯化的方法从胎盘中提取转铁蛋白受体。以转铁蛋白受体为抗原包被免疫管,从全合成人源噬菌体单链抗体库中筛选其抗体。对筛选到的抗体进行特异性鉴定后,将抗体基因插入表达载体pET22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后获得可溶性表达。HeLa细胞的免疫组化结果显示,表达的抗体可以与转铁蛋白受体结合。表达产物经Ni-NTA金属螯和层析柱纯化、脱咪唑后,从尾静脉注射小鼠。1h后,去除血液及毛细血管的干扰,在脑实质中检测到了抗体的存在,说明该抗体可以通过血脑屏障。
- 赵莉霞颜冰许龙蒋世卫张莹莹杨志新周晓巍黄培堂
- 原核表达中优化起始密码下游序列的软件设计与实现被引量：2
- 2006年
- 在原核表达中影响外源基因表达效率的因素有很多,这其中翻译起始效率起了非常重要的作用。翻译起始效率又主要受SD序列、SD序列与起始密码子之间的间距、DB(DownstreamBox)序列、mRNA翻译起始区(TIR)的二级结构和稀有密码子等因素的影响。主要针对DB序列和5′端稀有密码子的优化设计了软件。通过计算机对序列进行分析比对后,按照匹配碱基数、匹配位置、密码子使用频率平均值的顺序进行排序,给出一些优化序列,并给出了软件算法。
- 许龙李涛周晓巍黄培堂
- 关键词：基因表达软件设计
- 禽流感病毒NS1蛋白对细胞的影响被引量：5
- 2008年
- NS1蛋白为流感病毒非结构蛋白,只在病毒侵入宿主细胞后产生。目前NS1蛋白对细胞整体水平上的作用仍不清楚,为了解NS1蛋白在病毒感染细胞中的作用,构建了重组质粒pCMV-myc-NS1并将其转染A549细胞,利用双向电泳技术检测了受NS1蛋白调控的宿主蛋白,以期从蛋白质组水平上研究禽流感病毒与宿主细胞间的相互作用。同时,还检测了转染NS1对细胞增殖和细胞周期的影响。结果显示,NS1在细胞中的表达,能够明显引起宿主细胞代谢的变化,并通过阻滞细胞周期的正常进行而减缓细胞的增殖。
- 赵莉霞张莹莹杨志新许龙杨予涛于孟斌王荣周晓巍黄培堂
- 关键词：NS1蛋白宿主细胞双向电泳细胞增殖细胞周期
- 抗转铁蛋白受体抗体的筛选和鉴定
- 2006年
- 目的:从全人源噬菌体抗体库中筛选抗转铁蛋白受体(TfR)的抗体。方法:从HeLa细胞中提取总RNA,分两段反转录TfR胞外区cDNA,经两轮PCR后,获得胞外区基因。测序正确后,将其插入表达载体pPROEXTMHTa中,并在E.coliBL21(DE3)中表达。目的蛋白通过NiNTA金属螯合层析柱进行纯化、复性。用复性的TfR包被免疫管,从库容为1013cfu/L的全合成人源噬菌体单链抗体库中,筛选抗TfR的抗体。结果:得到约1.9kb的TfR胞外区基因,该基因以包涵体的形式在大肠杆菌中表达;利用纯化、复性的TfR从抗体库中筛选到了8个可与人TfR特异性结合的单链抗体。结论:利用TfR在大肠杆菌表达的复性产物,可以筛选到与天然TfR特异性结合的单链抗体。
- 赵莉霞颜冰朱恒奇许龙黄培堂
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体
