史沛举
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金南京军区医学科技创新课题更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 2型猪链球菌ofs基因敲除株的构建及其N-片段的克隆表达
- 2型猪链球菌（Streptococcus suis serotype 2，S. Suis 2）是一种重要的人兽共患病病原。它不仅可感染猪致急性败血症、脑膜炎、关节炎、心内膜炎及急性死亡，而且可通过伤口等传播途径感染人使人...
- 史沛举
- 关键词：基因敲除突变株2型猪链球菌荚膜多糖毒力因子
- 文献传递
- 2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33 ofs N-片段基因敲除株的构建被引量：1
- 2009年
- 通过生物信息学分析2型猪链球菌(Streptococcus suisserotype 2,S.suis2)中国强毒株05ZYH33的基因组,预测并发现猪链球菌血清浑浊因子(Opacity factor ofS.suis,OFS)的编码基因ofs.为了构建ofsN-末端片段ofs37-683的基因敲除株,首先构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为ofs37-683上、下游同源序列的基因敲除质粒,并对该质粒进行PCR和酶切鉴定.根据同源重组的原理,通过电转化方法筛选得到ofs37-683基因敲除株.PCR、测序和RT-PCR分析结果均显示ofs37-683已完全被壮观霉素抗性基因替代,证实ofs37-683基因敲除株构建成功.该敲除株的获得为进一步研究ofs在猪链球菌2型致病机制中的作用奠定基础.
- 史沛举郝喜娜葛俊超王长军王晶潘秀珍唐家琪
- 关键词：2型猪链球菌
- 猪链球菌2型中国强毒株05ZYH33 ofs基因敲除突变株构建及其生物学特性研究被引量：1
- 2014年
- 目的探究猪链球菌血清浑浊因子ofs基因在强致病性2型猪链球菌致病过程中的作用。方法利用同源重组基因敲除方法构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为ofs编码基因上、下游同源序列的基因敲除质粒,将构建好的质粒电转化入猪链球菌感受态,同源重组筛选ofs基因敲除突变株,通过组合PCR、Southern杂交和DNA测序对疑似突变株进行验证。生物学功能实验研究比较ofs突变株和野生株05ZYH33在革兰氏染色、菌落溶血活性、生长速率和毒力等方面的差异。结果组合PCR、Southern杂交和DNA测序结果均证实ofs基因敲除突变株05ZYH33Δofs构建成功,体外实验结果显示ofs基因缺失后菌株在革兰氏染色和菌落溶血活性及形态、生长速率等方面未发生改变,但小鼠毒力实验数据结果表明敲除突变株Δofs的毒力降低。结论猪链球菌2型ofs基因与细菌的毒力相关,本实验构建的突变株05ZYH33Δofs为进一步研究猪链球菌2型的致病机理奠定基础。
- 李敏王晶史沛举郭静静杜骁杰李先富王长军潘秀珍高基民
- 关键词：猪链球菌2型基因敲除生物特性毒力
- 猪链球菌2型中国强毒株CovR重组蛋白及其抗体的制备被引量：3
- 2009年
- 目的通过构建pET32a-covR原核表达质粒,表达并提纯CovR重组蛋白,制备其多克隆抗体。方法采用PCR法,从四川资阳病人分离株05ZYH33基因组扩增CovR的编码基因covR,构建重组表达质粒pET32a-covR,转化E.coliBL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE鉴定后,His亲和层析柱纯化CovR重组蛋白;免疫新西兰兔制备特异性抗体,Western blot检测兔多抗血清的特异性,间接ELISA检测其滴度。结果covR基因在原核细胞中得到高效表达,重组蛋白免疫新西兰兔后血清效价高达1∶204800,且重组蛋白能够与之发生特异性的反应。结论成功构建了表达载体pET32a-covR,可在E.coliBL21中高效表达,制备了特异性抗体,为进一步研究CovR的调控机理奠定了基础。
- 郝喜娜史沛举葛俊超王晶王长军潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌原核表达
