张秀云
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：大连工业大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：大连市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 阿留申病毒强致病性毒株非结构蛋白基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2010年
- 根据Genbank公布的全基因序列设计两对引物,利用PCR扩增技术,得到阿留申病毒非结构蛋白基因ADV-LN1、ADV-LN2,将其克隆至pMD18-T载体中进行序列测定,并与其它国内外毒株的非结构蛋白进行序列比较和分析。序列分析表明,同国外毒株相比核苷酸序列同源率NS1为87.8%～99.1%,NS2为87.7%～98.5%,NS3为85.4%～99.2%;氨基酸序列同源率NS1为82.5%～98.0%,NS2为81.6%～96.5%,NS3为78.2%～98.9%;与国内毒株相比核苷酸序列同源率NS1为91.5%～93.8%,NS2为93.0%～94.7%,NS3为93.5%～96.6%;氨基酸序列同源率NS1为87.4%～89.9%,NS2为87.7%～90.4%,NS3为88.5%～94.3%。系统进化树分析表明:国内流行毒株之间与欧美毒株之间,差异逐渐缩小,遗传变异趋势更加复杂。
- 张瑞李艳伍许兰菊贾赟蒋大伟张秀云李炜宋海霞
- 关键词：阿留申病毒非结构蛋白克隆
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆、高效表达与鉴定被引量：1
- 2011年
- 根据猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)VR2332株ORF7的全长基因序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR扩增出完整的ORF7基因,并将PCR产物克隆至pMD-18T载体进行测序分析。双酶切测序后重组质粒pMD-18T-N得到目的片段连接至原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组质粒pET-28a(+)-N。再转化至BL21宿主菌,对诱导表达条件(IPTG质量浓度、诱导时间、诱导温度)进行优化。结果显示,在37℃、0.2 mmol/LIPTG诱导5 h可实现重组N蛋白的高效表达。该重组N蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,Western-blotting分析显示,重组的N蛋白与PRRSV阳性血清发生特异性反应,表明表达的重组N蛋白具有较好的反应活性。
- 张秀云吴斌肇慧君贾赟刘霞张瑞
- 关键词：基因克隆原核表达
