王广兰
- 作品数：21 被引量：25H指数：3
- 供职机构：解放军第153中心医院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组sCR1在毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:酵母细胞SMD 1168表达人sCR1,并对重组蛋白进行纯化。方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9K-sCR1);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD 1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及W estern b lot鉴定,并通过N i2+-NTA agarose亲和层析纯化。结果:经甲醇诱导的含pPIC9K-sCR1的酵母细胞表达出重组人sCR1的融合蛋白,48~72 h sCR1融合蛋白表达量最高。此蛋白在凝胶上表现为M r大于31 KDa的蛋白区带,在W estern b lot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别。经N i2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白。结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性。
- 王广兰宫璀璀王文丽刘亚利刘琰邰苏豫
- 关键词：蛋白表达
- 两种方法联合检测粪便隐血试验结果分析被引量：2
- 2013年
- 目的采用Hb—mAb和TF_mAb胶体金法联合检测粪便隐血的特异性、灵敏性，并对提高消化道出血栓出率进行了比较。方法对111例临床确诊消化道出血患者的粪便标本和100例健康体检者，分别采用Hb—mAb法和TF-mAb法进行联合检测。结果单项Hb—mAb法检测消化道出血阳性率为56．8％（63／111），单项TF-mAb法检测消化道出血阳性率为63．1％（70／111），两种方法联合检测消化道出血阳性率提高至86．5％（96／111）；健康体检100例均为阴性。以上两种检测方法均在5min内判定结果，如两种方法均为阳性或任一种方法为阳性时，则判断为阳性结果；两种方法检测结果为阴性时，则判断为阴性结果。结论粪便中转铁蛋白检测在消化道出血中有较高的检出率（特别是上消化道出血者），Hb—mAb法和TF—mAb法联合检测可以互补，对提高消化道出血性疾病的诊断有临床应用价值。
- 郑素纳李文利王广兰
- 关键词：转铁蛋白隐血血红蛋白消化道出血
- 重组人sCR1蛋白对大鼠肢体缺血再灌注损伤的保护作用被引量：2
- 2014年
- [目的]探讨重组人可溶性补体受体1型(Soluble complement receptor type 1,sCR1)对大鼠肢体缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用。[方法]采用无创血管夹夹闭左侧股动脉制作大鼠肢体缺血再灌注(Ischemiareperfusion,I/R)损伤模型,观察0、4、8 h时间点sCR1蛋白干预组(B组)与生理盐水(NS)对照组(A组)I/R损伤肌组织细胞形态学变化、测定肌肉湿干重比(W/D)、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的表达水平。[结果]sCR1蛋白干预后的B组各时间点腓肠肌组织的W/D均低于NS对照A组,以I/R 4 h组最为显著(P<0.01);B组的MDA、MPO、LDH表达水平明显低于A组,以I/R 4 h组最为显著(P<0.01)。[结论]重组人sCR1蛋白对大鼠模型进行sCR1蛋白早期干预后,可明显减轻大鼠后肢骨骼肌I/R的损伤。
- 李琛琪王广兰周明武王飞云朱杰罗彦平
- 关键词：缺血再灌注
- 肝硬化患者创伤后血清微量可溶性补体受体1型表达水平被引量：1
- 2013年
- 补体系统是机体重要的防御系统,正常的补体激活在清除凋亡细胞,参与免疫应答和防御病原体入侵中有重要作用[1].补体系统属于天然免疫系统(innate immune system)的一个组成部分,它的激活可产生多种生物学效应,具有免疫调控、黏附、调理促吞噬、清除免疫复合物(immune complexes,IC)和炎症等作用,都是通过补体受体介导的,如补体系统的过度活化,可造成机体组织损伤等疾病,给身体带来严重危害.
- 周明武仓宝成刘亚利李琛琪刘蕊徐立博罗彦平王广兰
- 重组人sCR1分子胞外区多克隆抗体的制备
- 目的:原核表达人sCR1分子胞外区及其多克隆抗体制备。方法:提取人总RNA进行RT-PCR扩增合成cDNA,以cDNA为模板,构建重组表达质粒pET28a-sCR1。转化大肠杆菌中,用IPTG诱导表达重组人sCR1融合蛋...
- 王广兰刘亚利宫璀璀初霞
- 关键词：原核表达多克隆抗体补体受体1型
- 文献传递
- 兔抗人sCR1抗体制备及临床初步应用被引量：2
- 2010年
- 目的原核表达人sCR1分子胞外区,制备多克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA法。方法提取人总RNA进行RT-PCR扩增合成cDNA,以cDNA为模板,构建重组表达质粒pET28a-sCR1,转化大肠埃希菌,用IPTG诱导表达重组人sCR1融合蛋白,以其免疫家兔制备抗血清。经纯化并鉴定特异性后建立双抗体夹心ELISA法检测血清中sCR1水平,探讨其对慢性病毒性肝炎及活动性SLE患者的诊断价值。结果研制的兔抗人sCR1抗体ELISA法效价为125 000,纯度和特异性较好。30例健康献血者血清中sCR1为(39.8±7.9)ng/ml;22例慢性病毒性肝炎患者为(48.5±24.7)ng/ml;9例活动性SLE患者为(36.3±17.6)ng/ml。结论制备的兔抗人sCR1抗体效价及特异性较好,用其建立的双抗体夹心ELISA法有望用于临床血清学的诊断。
- 王广兰刘亚利初霞张长远宫璀璀王文丽高天蓝星
- 关键词：多克隆抗体补体受体1型
- 护士在检验科的作用与培养
- 2013年
- 随着生活水平、医疗水平的不断提高，越来越多的新技术、新仪器的应用，人们的健康观念越来越牢固，健康需求越来越迫切，体检也越来越个性化，检验科护士是重要组成部分，面对门诊患者和体检人员的第一“窗口”，工作内容琐碎、应变性强、服务性广等特点。检验科护士作为第一“窗口”与患者打交道的第一单元，代表了医院的形象，也是检验结果准确性得以保汪的重要力量，其工作的好坏直接影响检验结果质量，
- 李文莉郑素纳崔添添王凤王广兰
- 抗凝血酶基因10381T缺失导致的Ⅰ型抗凝血酶缺陷症被引量：3
- 2014年
- 目的对1例遗传性抗凝血酶(AT)缺陷症先症者及其家系进行表型诊断和基因诊断,并探讨其家系成员发病机制。方法用发色底物法检测该家系9名成员的AT活性(AT∶A)、蛋白S活性(PS∶A)、蛋白C活性(PC∶A),用免疫比浊法检测AT抗原量(AT∶Ag),用Western blot检测血浆中的AT分子质量和含量,抽提外周血基因组DNA,用PCR对AT基因的7个外显子及其侧翼序列进行扩增,用直接测序法对该家系所有成员的扩增产物进行测序分析并进行基因突变检测,同时筛查100例正常人以排除基因突变的多态性。结果该家系先症者AT∶A和AT∶Ag分别为48%和121 mg/L,先症者AT基因的第6外显子发现10381T del。其家系的部分成员检测到相同的移码突变。结论该家系先症者及部分成员存在Ⅰ型遗传性抗凝血酶缺陷症,是由AT基因10381T del移码突变所致。
- 李正民宫璀璀吕金利方盼盼王广兰伦永志白洁
- 关键词：抗凝血酶基因突变易栓症
- 酵母菌表达人sCR1高拷贝克隆菌的筛选
- 目的:采用酵母SMD1168细胞和分泌型载体p PIC9K,构建、表达人s CR1,用G418快速筛选及鉴定s CR1高拷贝重组转化克隆菌。方法:从人外周血中提取总 RNA,经 RT-PCR获得人s CR1全长c DNA...
- 王广兰仓宝成刘力源万丰宏罗媛媛党丹丹
- 重组人sCR1真核表达载体的构建、表达及其生物学活性被引量：4
- 2008年
- 目的:采用酵母细胞分泌型载体pPIC9k表达人可溶性补体受体(sCR1),研究重组人sCR1融合蛋白的体外生物学活性。方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,然后将其克隆入毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k中,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9k-sCR1),经测序鉴定正确,电转化入毕赤酵母细胞SMD1168中,将经G418抗性筛选出的重组sCR1酵母细胞株进行PCR鉴定,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后进行生物学活性鉴定。结果:获得毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k-sCR1,经G418筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母细胞株,经甲醇诱导含pPIC9k-sCR1的酵母SMD1168细胞表达出重组sCR1融合蛋白。此蛋白在SDS-PAGE上表现为Mr约31000的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别。经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白及较高的生物学活性。结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原性及其生物学活性。
- 王广兰宫璀璀王文丽张长远刘亚利何培霞郑淑娜陈湘林
- 关键词：生物学活性真核表达载体
